鐵皮石斛對肉仔雞生長性能、屠宰性能和免疫性能的影響

李秀富 ， 唐 嬌

(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院 ， 貴州 銅仁 554300 ； 2.貴州銅仁萬山區(qū)高樓坪農(nóng)業(yè)服務(wù)中心 ， 貴州 銅仁 554300)

鐵皮石斛(DendrobiumofficinaleKimura et Migo，DKM)為蘭科多年附生藥食同源性草本植物[1]，具有益胃生津、清熱滋陰、增強(qiáng)免疫、提高胃腸消化酶活性、調(diào)節(jié)糖脂代謝、抗疲勞和抗氧化等功效[2-3]，這主要與其所含多糖、石斛堿、酚類、氨基酸和多種微量元素等生物活性成分有關(guān)[4]。雞新城疫(Newcastle disease，ND)是危害養(yǎng)禽業(yè)健康發(fā)展最為重要的急性、烈性、高傳染性的一類疫病之一[5]，我國防控ND主要以免疫預(yù)防為主[6]，但因肉雞飼養(yǎng)周期短，屠宰時(shí)?？梢娢赐耆盏囊呙纾瑢﹄u肉品質(zhì)和安全存在隱患。當(dāng)前，尋找促進(jìn)肉雞生長、增強(qiáng)肉雞免疫的免疫增強(qiáng)劑逐漸成為研究的焦點(diǎn)。筆者查閱相關(guān)資料，罕見DKM在禽類的相關(guān)研究報(bào)道。中藥細(xì)粉化具有成分損失小，利用效率高等優(yōu)點(diǎn)?；诖耍驹囼?yàn)通過在日糧中添加DKM細(xì)粉，觀察DKM對肉仔雞的生長性能、屠宰性能、主要免疫器官指數(shù)、新城疫抗體效價(jià)(Newcastle disease antibody，ND-Ab)、血清免疫球蛋白M(Immunoglobulin M，IgM)和免疫球蛋白G(Immunoglobulin G，IgG)的影響，以期為DKM在禽類健康養(yǎng)殖和作為ND免疫增效劑的開發(fā)使用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 DKM，購自銅仁市中藥材公司，粉碎后過40目篩；ND血凝抑制抗原、陰性血清和陽性血清，均購自哈爾濱國生生物有限公司；LaSota株ND活疫苗，購自和元生物工程有限公司；IgG、IgM檢測試劑盒，均購自南京建成生物工程研究所。

1.2 主要儀器 Eppendorf移液器(100～1 000 μL，50～100 μL，1～10 mL)及配套耗材，均購自江蘇科學(xué)器材有限公司；數(shù)顯電子天平，購自康州HZ電子有限公司；MH-2振蕩器，購自Kylin-Bell儀器公司；L-600離心機(jī)，購自湖南湘儀儀器廠。

1.3 試驗(yàn)動物 愛拔益加(AA)肉仔雞，公雞，1日齡，體重(25.23±0.23)g，購自銅仁華鑫禽業(yè)有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)日糧 將250只1日齡健康肉仔雞隨機(jī)分成5個(gè)組，每組50只，對照組(CG組)飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組在基礎(chǔ)日糧中分別添加0.5%(0.5%DKM組)、1%(1%DKM組)、2%(2%DKM組)和4%(4%DKM組)的DKM粉。所有肉雞于7日齡(試驗(yàn)7 d)時(shí)按1羽份/只進(jìn)行滴鼻點(diǎn)眼接種LaSota株ND活疫苗，試驗(yàn)期35 d。試驗(yàn)日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of experimental diets(air-dry basis)

1.4.2 飼養(yǎng)管理 整個(gè)試驗(yàn)期采用三層重疊式籠養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境相同，雛雞自由飲水采食，間斷采光，試驗(yàn)第1～7天控溫30 ℃每日間斷光照18 h，第8～14天控溫28 ℃每日間斷光照16 h，第15～21天控溫25 ℃每日間斷光照14 h，以后控溫25 ℃每日間斷光照12 h，每天定時(shí)記錄添加和回收飼料量。

1.4.3 生長性能指標(biāo)測定 試驗(yàn)結(jié)束(35日齡)時(shí)，將肉雞在清晨給料前(禁食12 h)以重復(fù)籠為單位稱量其空腹體重和耗料量，統(tǒng)計(jì)測算試驗(yàn)7～35 d肉雞的平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)。ADG(g)=總增重(g)/(試驗(yàn)天數(shù)×只數(shù))；ADFI(g)=總采食量(g)/(試驗(yàn)天數(shù)×只數(shù))；F/G=總采食量(g)/總增重(g)。

1.4.4 屠宰性能和重要器官指數(shù)測定 試驗(yàn)結(jié)束(35日齡)時(shí)，每組隨機(jī)選取6只肉雞，禁食12 h后稱量其活重；完成采血后頸部放血致死，去除羽毛、趾和喙角質(zhì)層后稱量其屠體重；屠體去除食道、氣管、胃、腸、心、肝、脾、肺、腎、生殖器、腹脂和頭腳后稱量其全凈膛重；沿胸骨脊切開皮膚向背部剝離，切離胸骨脊側(cè)面的肌肉及肩胛部肌腱稱量其胸肌重；去除腿骨、皮膚、皮下脂肪后稱量全部腿肌重；解剖摘取主要實(shí)質(zhì)組織器官，剔除脂肪和筋膜雜質(zhì)，濾紙吸干水分后立即稱量其器官鮮重，參照《家畜生產(chǎn)性能名詞術(shù)語和度量統(tǒng)計(jì)方法》測定屠宰性能[7]，計(jì)算主要免疫器官指數(shù)。全凈膛率/%=(全凈膛重/活重)×100%；胸肌率/%=(胸肌重/全凈膛重)×100%；腿肌率/%=(腿肌重/全膛凈重)×100%；器官指數(shù)(g/kg)=器官鮮重(g)/體重(kg)。

1.4.5 雞血清ND-Ab抗體效價(jià)測定 分別于試驗(yàn)14、21、28 d和35 d時(shí)，隨機(jī)從各試驗(yàn)組選取6只肉雞，采心臟血液5 mL于離心管中，在37 ℃靜置30 min，于室溫下以3 000 r/min離心10 min，吸取上部1.5 mL血清置于指型離心管，保存于-20 ℃冰箱待檢。按照《新城疫診斷技術(shù)》規(guī)范(GB/T16550—2008)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行雞ND抗體效價(jià)測定。

1.4.6 血清免疫功能測定 于試驗(yàn)14 d和28 d時(shí)分別從各組挑選6只體重相近的肉雞，按1.4.5心臟采血分離血清。IgG、IgM含量測定嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 DKM對肉仔雞生長性能的影響 由表2可知，在各試驗(yàn)組ADFI差異不顯著的情況下(P>0.05)，與CG組比較，1%、2%、4% DKM組肉雞平均末重、ADG顯著提高，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)，說明日糧中添加DKM可有效提高肉雞生長性能(表2)。

表2 DKM對肉仔雞生長性能指標(biāo)的影響Table 2 Effects of DKM on growth performance of broilers (n=6)

2.2 DKM對肉仔雞屠宰性能的影響 由表3可知，試驗(yàn)組的胴體重和全凈膛率較CG組顯著增加(P<0.05)；1%、2% DKM組和4% DKM組肉雞的胸肌率以及1% DKM組和2% DKM組的腿肌率顯著高于CG組(P<0.05)。

表3 DKM對肉仔雞屠宰性能指標(biāo)的影響Table 3 Effects of DKM on slaughter performance of broilers (n=6)

2.3 DKM對肉仔雞免疫器官指數(shù)的影響 由表4可知，試驗(yàn)14 d時(shí)，試驗(yàn)組肉雞胸腺指數(shù)(ThI)較CG組增加，但差異不顯著(P>0.05)，2% DKM組和4% DKM組的脾臟指數(shù)(SpI)較CG組顯著增加(P<0.05)，試驗(yàn)組法氏囊指數(shù)(BFI)較CG組顯著增加(P<0.05)；試驗(yàn)28 d時(shí)，1%、2% DKM組和4% DKM組ThI較CG組顯著增加(P<0.05)，試驗(yàn)組SpI較CG組顯著增加(P<0.05)，1%、2% DKM組和4% DKM組的BFI較CG組顯著增加(P<0.05)。

表4 DKM對肉仔雞主要免疫器官指數(shù)的影響Table 4 Effects of DKM on major immune organ indexes of broilers (g/kg,n=6)

2.4 DKM對肉仔雞抗體滴度的影響 由表5可知，試驗(yàn)14 d和28 d時(shí)，1%、2% DKM組和4% DKM組的ND-Ab效價(jià)較CG組顯著升高(P<0.05)；試驗(yàn)21 d時(shí)，試驗(yàn)組較CG組均顯著升高(P<0.05)；試驗(yàn)35 d時(shí)，僅2% DKM組較CG組顯著升高(P<0.05)；整個(gè)試驗(yàn)階段均未出現(xiàn)組間差異顯著性升高變化(P>0.05)。

表5 DKM對肉仔雞新城疫抗體滴度的影響Table 5 Effects of DKM on Newcastle disease antibody titer of broilers (log2,n=6)

2.5 DKM對肉仔雞血清免疫球蛋白的影響 由表6可知，試驗(yàn)14 d時(shí)，1%、2% DKM組和4% DKM組IgM較CG組顯著升高(P<0.05)，2% DKM組和4% DKM組IgG較CG組顯著升高(P<0.05)；試驗(yàn)28 d時(shí)，1%、2% DKM組和4% DKM組IgM和IgG較CG組顯著升高(P<0.05)，且IgM含量在14 d時(shí)高于28 d；IgG含量在28 d時(shí)高于14 d。

表6 DKM對肉仔雞血清IgM、IgG的影響 Table 6 Effects of DKM on serum immunoglobulin M and immunoglobulin G of broilers (mg/mL,n=6)

3 討論

3.1 日糧中添加DKM對肉雞生長性能和屠宰性能的影響 ADG、ADFI和F/G是評估動物生長發(fā)育快慢最直觀的三大生長性能指標(biāo)。2015版《中華人民共和國藥典》和現(xiàn)代藥理研究表明，DKM具有益胃生津、厚腸胃、提高機(jī)體消化酶活性、促胃腸液分泌和排便、調(diào)節(jié)胃腸道菌群等多種功效[8-9]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，日糧中添加1%、2%和4% DKM，在ADFI差異不顯著的情況下(P>0.05)，可顯著提高肉仔雞平均末重和ADG，F(xiàn)/G顯著降低(P<0.05)，其中以2%DKM組指標(biāo)增加最明顯，0.5% DKM組生長指標(biāo)有所提高，但差異不顯著(P>0.05)，說明DKM對提高肉仔雞生長性能有效，其原因可能與DKM選擇性促進(jìn)腸道益生菌增殖、提高腸道消化酶活性幫助食物消化吸收[10-11]和促進(jìn)胃腸排空有關(guān)[12]。屠宰率、全凈膛率和胸肌率等指標(biāo)是評估肉雞常用的屠宰性能指標(biāo)，一般認(rèn)為全凈膛率60%以上，屠宰率80%以上，肉用性能良好[13]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組的胴體重、屠宰率和全凈膛率不僅顯著高于CG組(P<0.05)，也高于肉雞肉用性能評判標(biāo)準(zhǔn)，腿肌和胸肌是肉雞的主要可食部分，日糧中添加1%、2%、4% DKM后肉雞的胸肌率和添加1%、2% DKM后肉雞的腿肌率顯著高于CG組(P<0.05)，再次表明日糧中添加DKM對提高肉雞生長性能、產(chǎn)肉性能和屠宰性能具有良好的作用，但日糧中添加0.5%、1%和4% DKM后肉雞的生長性能和屠宰性能指標(biāo)不如日糧中添加2% DKM的效果好，說明日糧中添加DKM要適量，短時(shí)間低濃度添加可能達(dá)不到最佳刺激腸胃消化酶活性和促進(jìn)腸絨毛快速增長的作用，高濃度添加對飼料口感可能會產(chǎn)生影響，導(dǎo)致日均采食量和日均增重不增反降，肉雞屠宰性能相關(guān)指標(biāo)也降低，具體原因有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

3.2 日糧中添加DKM對肉仔雞免疫性能的影響 機(jī)體的免疫效應(yīng)主要通過活化巨噬細(xì)胞的吞噬作用，提高T細(xì)胞、B細(xì)胞主要免疫活性細(xì)胞和NK細(xì)胞等其他相關(guān)免疫細(xì)胞活性，同時(shí)激活機(jī)體的補(bǔ)體系統(tǒng)等來完成[14]。法氏囊、胸腺和脾臟是禽類最主要的免疫器官，胸腺和法氏囊分屬于主導(dǎo)細(xì)胞免疫和體液免疫的初級免疫器官，脾臟屬于主導(dǎo)體液免疫的次級免疫器官[15]。通常認(rèn)為健康動物免疫器官的質(zhì)量增加是T、B淋巴細(xì)胞增殖分化、成熟形成、免疫應(yīng)答所致，其指數(shù)越高，機(jī)體免疫功能越強(qiáng)[16]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)14 d時(shí)，試驗(yàn)組法氏囊指數(shù)和2%、4% DKM組脾臟指數(shù)顯著高于CG組(P<0.05)；試驗(yàn)28 d時(shí)，試驗(yàn)組脾臟指數(shù)，1%、2%、4% DKM組胸腺指數(shù)和法氏囊指數(shù)均顯著高于CG組(P<0.05)，其中以2%DKM組免疫器官指數(shù)升高最明顯。說明DKM對促進(jìn)雛雞的細(xì)胞和體液免疫具有重要作用，但必須在日糧中添加適當(dāng)?shù)膭┝?。?xì)胞免疫和體液免疫是組成機(jī)體特異性免疫的2種重要免疫方式，血清抗體效價(jià)是衡量機(jī)體體液免疫狀況的主要指標(biāo)，抗體效價(jià)越高，機(jī)體體液免疫功能越強(qiáng)[17]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)14～35 d時(shí)DKM能快速顯著提高雞ND疫苗免疫功能(P<0.05)，而且能使ND-Ab效價(jià)持續(xù)保持較高水平，表明DKM在雛雞ND免疫后，能快速顯著提高其體液免疫功能。由B淋巴細(xì)胞主導(dǎo)的體液免疫主要通過IgG、IgM等來發(fā)揮功效，IgM是初次免疫后機(jī)體產(chǎn)生最早的抗體，IgG是疫苗免疫機(jī)體后監(jiān)測的主要抗體[18]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組的IgM和IgG均高于CG組，試驗(yàn)14 d時(shí)，1%、2%、4% DKM組IgM和2%、4% DKM組 IgG顯著高于CG組(P<0.05)；試驗(yàn)28 d時(shí)，1%、2%、4%DKM組IgM和IgG均顯著高于CG組(P<0.05)。說明DKM可通過增加B淋巴細(xì)胞增殖來增強(qiáng)機(jī)體體液免疫功能和提高抗體滴度[3]。從試驗(yàn)結(jié)果指標(biāo)數(shù)據(jù)上看，2% DKM組要明顯優(yōu)于0.5%、1%和4% DKM組；4%DKM組較2%DKM組指標(biāo)下降，表明機(jī)體的免疫功能與日糧添加DKM并不形成正相關(guān)性，有一定的閾值性。黃曉君[19]、覃輝艷等[20]在小鼠中的研究發(fā)現(xiàn)，DKM粉末能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞分化增殖，增強(qiáng)腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能，提高血清中免疫球蛋白含量和體液免疫功效，與本試驗(yàn)結(jié)果較為相似。

3.3 本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，在雛雞日糧中添加DKM具有顯著提高雛雞生長性能、屠宰性能、免疫器官指數(shù)、ND-Ab效價(jià)水平、血清IgM和IgG含量的作用，本試驗(yàn)條件下以日糧中添加2% DKM的效果最好。