子宮內(nèi)膜樣腺癌中FBXW7和FAM83D的表達(dá)及臨床意義

魯 萍，程曉東

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]。子宮內(nèi)膜樣腺癌(endometrial endometrioid carcinoma, EEC)占子宮內(nèi)膜癌的80%～90%，是其最主要的病理類型。EEC是一種多因素相關(guān)疾病，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，基因突變、信號(hào)通路異常等均參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，其分子機(jī)制尚不明確。FAM83D是近年被發(fā)現(xiàn)的可能原癌基因，其位于癌癥的易感染色體20q。20q染色體擴(kuò)增出現(xiàn)在人類較多的惡性腫瘤中，并與腫瘤的進(jìn)展及轉(zhuǎn)移等不良預(yù)后相關(guān)[2]。其編碼的FAM83D蛋白可與FBXW7抑癌基因相互作用，并作用于腫瘤發(fā)生的多個(gè)信號(hào)通路[3]。文獻(xiàn)報(bào)道FAM83D在多種腫瘤中均過表達(dá)[4]。目前，F(xiàn)AM83D在EEC中的表達(dá)及是否通過降解FBXW7發(fā)揮作用尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)初步探究FBXW7、FAM83D在EEC發(fā)生、發(fā)展中的作用及與臨床病理特征、預(yù)后的關(guān)系，為EEC早期診斷及治療提供可能的新分子標(biāo)記。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2012年1月～2015年12月浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院診治的211例EEC標(biāo)本?；颊吣挲g32～65歲，平均(53.4±6.89)歲;根據(jù)FIGO(2009)分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期：Ⅰ期153例，Ⅱ期34例，Ⅲ期23例，Ⅳ期1例；按病理分化程度：高分化62例，中分化112例，低分化37例。另選取同期因子宮內(nèi)膜不典型增生行子宮切除的標(biāo)本55例，以及因良性疾病(子宮肌瘤)行子宮切除術(shù)的標(biāo)本47例作對(duì)照。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2 方法采用免疫組化EnVision兩步法染色，F(xiàn)AM83D多克隆兔抗體購(gòu)自北京博奧森公司；FBXW7多克隆兔抗體購(gòu)自Abcam公司。FAM83D稀釋度為1 ∶500；FBXW7稀釋度為1 ∶200，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判斷免疫組化結(jié)果根據(jù)半定量積分方法進(jìn)行判斷[5-7]。(1)細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核染色強(qiáng)度計(jì)分：未著色為0分，淺黃色為1分，淡棕色為2分，棕褐色為3分；(2)陽(yáng)性細(xì)胞百分比計(jì)分：0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分。將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：<4分為陰性，≥4分為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman，生存分析采用Kaplan-Meier法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及EEC中FBXW7、FAM83D的表達(dá)FBXW7表達(dá)定位于細(xì)胞核，在正常子宮內(nèi)膜中的陽(yáng)性率為97.9%，在不典型增生子宮內(nèi)膜中的陽(yáng)性率為87.3%，在EEC中的陽(yáng)性率僅為10.0%，三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1，圖1)。FAM83D表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)，在EEC中的陽(yáng)性率為80.1%，在不典型增生子宮內(nèi)膜中的陽(yáng)性率為65.5%，在正常子宮內(nèi)膜中的陽(yáng)性率為27.7%，三組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1，圖2)。

2.2 EEC中FBXW7、FAM83D表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系FBXW7表達(dá)與EEC患者年齡、絕經(jīng)、糖尿病、高血壓、FIGO分期、分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管陽(yáng)性、CA125異常、ER、PR、p53表達(dá)均無關(guān)(P>0.05，表2)。FAM83D表達(dá)與患者年齡、絕經(jīng)、糖尿病、高血壓、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移、脈管陽(yáng)性、CA125異常、ER、PR、p53表達(dá)均無關(guān)(P>0.05)；與FIGO分期、分化程度相關(guān)(P<0.05，表2)。

2.3 EEC中FBXW7與FAM83D表達(dá)的相關(guān)性在FBXW7陽(yáng)性組中，F(xiàn)AM83D陽(yáng)性率為85.7%；在FBXW7陰性組中，F(xiàn)AM83D陽(yáng)性率為79.5%。根據(jù)Spearman相關(guān)性分析顯示：在EEC組織中FBXW7與FAM83D表達(dá)無明顯相關(guān)性(rs=0.047，P=0.497，表3)。

2.4 FBXW7、FAM83D表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系本組對(duì)211例EEC患者進(jìn)行術(shù)后隨訪，隨訪截至2020年8月15日，其中26例失訪，19例FBXW7陽(yáng)性者死亡2例，復(fù)發(fā)2例；166例FBXW7陰性者死亡10例，復(fù)發(fā)15例。148例FAM83D陽(yáng)性者死亡10例，復(fù)發(fā)13例；37例FAM83D陰性者死亡2例，復(fù)發(fā)4例。采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，Log-rank檢驗(yàn)顯示：FBXW7、FAM83D表達(dá)與EEC的總生存時(shí)間及無瘤生存時(shí)間均無明顯相關(guān)性(P>0.05，圖3)。

3 討論

目前，子宮內(nèi)膜癌位居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中的第2位，其發(fā)病率占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%[8-9]。隨著分子分型的發(fā)展，許多分子基因已被鑒定為腫瘤診斷和預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)志物[10]。

表1 正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜及EEC中FBXW7和FAM83D的表達(dá)[n(%)]

圖1 A.FBXW7在正常子宮內(nèi)膜中呈陽(yáng)性，EnVision兩步法；B.FBXW7在不典型增生子宮內(nèi)膜中呈弱陽(yáng)性，EnVision兩步法；C.FBXW7在EEC中呈陰性，其中正常腺體呈陽(yáng)性，EnVision兩步法 圖2 A.FAM83D在正常子宮內(nèi)膜中呈陰性，EnVision兩步法；B.FAM83D在不典型增生子宮內(nèi)膜中呈弱陽(yáng)性，EnVision兩步法；C.FAM83D在EEC中呈陽(yáng)性，EnVision兩步法

表2 EEC中FBXW7、FAM83D表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

表3 EEC中FBXW7與FAM83D表達(dá)的相關(guān)性[n(%)]

FAM83D蛋白屬于紡錘體蛋白，主要定位于有絲分裂的紡錘體中，是紡錘體定位、染色體重組對(duì)齊、細(xì)胞分裂所必須的蛋白[11]。文獻(xiàn)報(bào)道FAM83D在人類結(jié)直腸癌、乳腺癌、肝癌、卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌、膀胱癌、白血病等組織中均過表達(dá)，且與不良預(yù)后有關(guān)。有研究者通過mRNAsi發(fā)現(xiàn)在子宮內(nèi)膜癌中上調(diào)的6個(gè)關(guān)鍵基因，它們的高表達(dá)與腫瘤低分化、高分期密切相關(guān)，其中FAM83D通過ROC和Kaplan-Meier證實(shí)其與子宮內(nèi)膜癌患者的不良預(yù)后相關(guān)[12]。FAM83D蛋白可以通過與PI3K結(jié)合直接激活PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路[13]，促進(jìn)上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)，在腫瘤局部浸潤(rùn)具有關(guān)鍵作用，已知PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路可調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡、代謝、增殖、生長(zhǎng)等多種生物學(xué)過程[14]，該信號(hào)的過度激活以及PTEN的缺失[15]與EEC發(fā)病有關(guān)[16]，是EEC治療的潛在靶標(biāo)，且EMT現(xiàn)象的短暫發(fā)生對(duì)子宮內(nèi)膜癌的子宮肌層浸潤(rùn)具有重要價(jià)值[17]。本實(shí)驗(yàn)為探討FAM83D在EEC發(fā)生、發(fā)展中的作用，對(duì)正常子宮內(nèi)膜、不典型增生子宮內(nèi)膜和EEC進(jìn)行免疫組化檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)FAM83D在EEC中陽(yáng)性率高，不典型增生子宮內(nèi)膜次之，而在正常子宮內(nèi)膜中陽(yáng)性率低，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示該分子在EEC的發(fā)生中有一定作用。本組還對(duì)FAM83D與EEC的臨床病理特征進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其高表達(dá)與EEC分化程度、FIGO分期呈正相關(guān)，提示FAM83D可能在EEC的局部(locoregional)進(jìn)展中起作用。本組生存分析未能得出FAM83D與EEC患者的不良預(yù)后相關(guān)，可能與醫(yī)療水平及患者健康意識(shí)的提升、EEC患者的生存率高、復(fù)發(fā)率低有關(guān)。FAM83D與EEC患者的預(yù)后是否具有相關(guān)性，亟需通過增加樣本量，延長(zhǎng)隨訪時(shí)間等進(jìn)一步分析。

圖3 FBXW7、FAM83D表達(dá)與EEC患者預(yù)后的生存曲線：A.FBXW7表達(dá)與EEC患者總生存期的關(guān)系；B.FAM83D表達(dá)與ECC患者總生存期的關(guān)系；C.FBXW7表達(dá)與EEC患者無瘤生存期的關(guān)系；D.FAM83D表達(dá)與EEC患者無瘤生存期的關(guān)系

FBXW7屬于抑癌基因，在多種人類惡性腫瘤中均表達(dá)下調(diào)[18]。有研究發(fā)現(xiàn)FAM83D在多個(gè)惡性腫瘤中的作用機(jī)制是通過降解FBXW7實(shí)現(xiàn)的，如結(jié)直腸癌[19]、乳腺癌[20]。本組FBXW7在正常子宮內(nèi)膜中呈高表達(dá)、EEC中呈低表達(dá)，但與FAM83D的表達(dá)未見明顯相關(guān)性。FAM83D是重要的細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑[21]，在EEC中可能與FBXW7的表達(dá)作用相對(duì)獨(dú)立，無明確相關(guān)性。FBXW7和FAM83D在EEC中的作用機(jī)制以及相互作用，還有待進(jìn)一步分析。

綜上所述，F(xiàn)AM83D、FBXW7均與EEC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，但作用相對(duì)獨(dú)立。FAM83D表達(dá)與較差分化和較高分期相關(guān)。FAM83D有望成為EEC新的潛在細(xì)胞增殖指標(biāo)[22]，為判斷EEC進(jìn)展、是否進(jìn)行保育及靶向治療、預(yù)后評(píng)估等，提供新的選擇和方向。盡管有文獻(xiàn)報(bào)道FAM83D通過降解抑癌蛋白FBXW7實(shí)現(xiàn)促癌作用，但本組分析顯示FBWX7與FAM83D可能通過相對(duì)獨(dú)立的途徑在EEC的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮作用。因此，F(xiàn)BWX7與FAM83D在EEC中的作用機(jī)制還有待進(jìn)一步分析。