ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性與子癇前期遺傳易感性關(guān)系

楚靜,張璐,湯潛,劉世國,詹瑛

(1 青島大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,山東 青島 266003； 2 菏澤市婦幼保健院； 3 青島大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心)

子癇前期(PE)是一種高血壓及炎癥的妊娠疾病，主要表現(xiàn)為妊娠20周后孕婦出現(xiàn)血壓增高、頭痛惡心、蛋白尿等癥狀[1]。PE是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及圍生兒病死率升高的主要原因之一[2-3]。然而，PE的發(fā)病機(jī)制至今尚未明確。有研究結(jié)果表明，PE與遺傳、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)失衡[4]、螺旋動(dòng)脈異常重塑、胎盤缺陷及血管生成障礙等有關(guān)[5]。含Ⅰ型血小板結(jié)合蛋白基序的解聚蛋白樣金屬蛋白酶(ADAMTSs)是一個(gè)新定義的金屬蛋白酶家族，共包括19個(gè)成員，其中多個(gè)成員在人胎盤中表達(dá)[6-7]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，ADAMTS4和ADAMTS5參與胎盤的形成過程[8]。ADAMTS13可以促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)育，在PE中的表達(dá)降低[9]。而ADAMTS7在人體組織中廣泛分布，主要參與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展[10]、血管基質(zhì)的重塑以及骨分化[11]。有研究結(jié)果表明，ADAMTS7還能協(xié)調(diào)血管平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的功能，從而促進(jìn)新內(nèi)膜的形成[12]。本課題組前期的研究結(jié)果顯示，PE中ADAMTS7基因啟動(dòng)子甲基化水平較低[13]，而這是否與基因的多態(tài)性有關(guān)目前還未可知。因此，本研究選擇影響ADAMTS7成熟和平滑肌細(xì)胞遷移的rs3825807位點(diǎn)[14]進(jìn)行檢測，以進(jìn)一步探討ADAMTS7基因與PE遺傳易感性的關(guān)系，為PE的早期診斷提供新的方向?，F(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2018—2019年就診于青島大學(xué)附屬醫(yī)院、濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院、聊城市人民醫(yī)院、煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院及臨沂市人民醫(yī)院等山東省醫(yī)院的孕婦1 632例作為研究對(duì)象，其中確診PE病人706例(病例組)，正常孕婦926例(對(duì)照組)。PE的診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)2018年國際妊娠期高血壓研究學(xué)會(huì)(ISSHP)制訂的《妊娠期高血壓疾?。篒SSHP分類、診斷和管理指南》[15]，即妊娠20周以后出現(xiàn)血壓升高伴或不伴蛋白尿。早發(fā)型PE即34周前發(fā)病者，晚發(fā)型PE即34周及以后發(fā)病者。排除標(biāo)準(zhǔn)：有慢性高血壓、糖尿病、心臟病、腎病及肝病病史的孕婦，胎膜早破、前置胎盤、先兆流產(chǎn)、輔助生殖、雙胎及巨大兒孕婦。收集所有研究對(duì)象的一般資料。

1.2 樣本采集及基因型檢測

采集孕婦的空腹肘靜脈血3 mL，置于EDTA抗凝管中，用2 mL EP管分裝后置-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆?。用血液基因組DNA提取試劑盒(北京天根公司)提取外周血基因組DNA。采用TaqMan探針實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)對(duì)ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)進(jìn)行基因型檢測。rs3825807位點(diǎn)上下游引物分別為5′-GTCCCCCTGTGAGGCAA-TTT-3′和5′-CCGTGGTACTCCACCATTTTG-3′。PCR反應(yīng)體系7 μL，包括2×Mix 3.5 μL、ddH2O 2.45 μL、20×SNP探針0.05 μL、DNA模板1 μL。應(yīng)用SLAN-96S全自動(dòng)醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)進(jìn)行基因分型，PCR反應(yīng)條件為：95 ℃、10 min，95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，共40個(gè)循環(huán)。在每個(gè)周期60 ℃延伸過程中采集探針熒光強(qiáng)度。通過檢測不同等位基因所標(biāo)識(shí)的熒光信號(hào)，判讀待測樣本的基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 兩組一般資料的比較

兩組孕婦孕后體質(zhì)量指數(shù)(BMI)、入院孕周、分娩孕周、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)和胎兒出生體質(zhì)量比較差異均有顯著性(t=-51.81～21.07，P<0.001)，而兩組孕婦年齡、孕前BMI、孕次及流產(chǎn)次數(shù)比較則差異無顯著性(P>0.05)。見表1。

2.2 Hardy-Weinberg遺傳平衡檢驗(yàn)

Hardy-Weinberg的檢驗(yàn)結(jié)果顯示，ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)在對(duì)照組和病例組均符合遺傳平衡定律(χ2=0.362、0.722，P>0.05)，表明本研究選取的樣本具有較好的群體代表性。

2.3 兩組ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

本研究病例組和對(duì)照組孕婦ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)的3種基因型頻率比較差異無顯著性(χ2=1.329，P>0.05)，等位基因頻率也未見明顯差異(χ2=1.207，P>0.05)。見表2。早發(fā)型、晚發(fā)型PE病人ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)3種基因型及等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=0.146～2.000，P>0.05)。見表3。

3 討 論

PE是一種妊娠常見的并發(fā)癥，每年在全球范圍內(nèi)造成約7萬名孕產(chǎn)婦死亡，其中大部分發(fā)生在低收入和中等收入國家[16]。而對(duì)PE發(fā)病機(jī)制的研究則可以幫助我們更好地診治PE。

目前，有關(guān)PE發(fā)病機(jī)制常見的學(xué)說有如下幾個(gè)。①氧化應(yīng)激-血管內(nèi)皮損傷學(xué)說。內(nèi)皮一氧化氮合酶(e-NOS)可誘導(dǎo)一氧化氮(NO)的合成，NO可以使動(dòng)脈床血管擴(kuò)張。在PE中，氧化應(yīng)激會(huì)增加脂質(zhì)過氧化物的生成，導(dǎo)致內(nèi)皮功能障礙[17]、e-NOS缺乏，可以導(dǎo)致胎盤床、腎血管系統(tǒng)和其他器官血管床的血管收縮，引起血壓升高[18]。②免疫調(diào)節(jié)異常學(xué)說。胎盤、白細(xì)胞和腎足細(xì)胞中富含Toll樣受體4(TLR4)，研究表明PE的發(fā)生與胎盤和腎臟中TLR4的過表達(dá)有關(guān)[19]。TLR4的增加會(huì)導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子的增加和胎盤/腎臟功能障礙[20]。此外，抗炎細(xì)胞因子的減少也會(huì)引起PE的發(fā)生[21]。③胎盤或滋養(yǎng)細(xì)胞缺血低氧學(xué)說。在正常妊娠中，胎盤的滋養(yǎng)細(xì)胞侵入子宮壁，用低阻力的血管系統(tǒng)取代高阻力的子宮螺旋動(dòng)脈和小動(dòng)脈。這種重塑在PE中存在缺陷，可引起胎盤缺血，進(jìn)而導(dǎo)致可溶性fms樣酪氨酸激酶1(sFlt-1)和可溶性內(nèi)皮糖蛋白(sEng)的過量生產(chǎn)[22]。sFlt-1在血液中可以與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和胎盤生長因子(PLGF)結(jié)合，而高sFlt-1和低VEGF/PLGF參與了高血壓的發(fā)生。同樣，高sEng有助于高血壓和蛋白尿的發(fā)展[23]。

表1 兩組一般資料相關(guān)指標(biāo)的比較

表2 病例組和對(duì)照組ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

表3 早發(fā)型、晚發(fā)型PE病人和對(duì)照組ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)基因型及等位基因頻率比較

ADAMTS7為金屬基質(zhì)蛋白酶家族的一員，基因位于15q25染色體上，其主要作用是降解細(xì)胞外基質(zhì)，與多數(shù)心血管疾病的發(fā)生發(fā)展以及關(guān)節(jié)炎中軟骨細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解密切相關(guān)[24-25]。還有研究指出，ADAMTS7的升高能引起孕婦流產(chǎn)[26]。ADAMTS7rs3825807位點(diǎn)由腺嘌呤(A)至鳥嘌呤(G)的取代可導(dǎo)致ADAMTS7前結(jié)構(gòu)域中絲氨酸至脯氨酸的取代[27]，激活的ADAMTS7具有蛋白水解活性，會(huì)裂解軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)，影響ADAMTS7的成熟和平滑肌細(xì)胞的遷移[14,28]。此外，有研究表明，ADAMTS7 rs3825807位點(diǎn)上A等位基因與冠心病及缺血性腦卒中易感性相關(guān)[29]。本課題組前期研究表明，ADAMTS7是PE的重要調(diào)節(jié)因子，PE病人胎盤中ADAMTS7的啟動(dòng)子區(qū)甲基化程度降低，導(dǎo)致ADAMTS7在胎盤中的表達(dá)增加，進(jìn)而抑制滋養(yǎng)細(xì)胞的遷移、侵襲等功能，導(dǎo)致母體螺旋動(dòng)脈重塑不足和血流不足[13]，最終導(dǎo)致胎盤缺血，引起PE。而本研究結(jié)果顯示，病例組和對(duì)照組ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)基因型和等位基因頻率比較差異無顯著性，早發(fā)型、晚發(fā)型PE病人基因型及等位基因頻率與對(duì)照組比較差異亦無顯著性。提示ADAMTS7基因rs3825807位點(diǎn)多態(tài)性與山東地區(qū)漢族人群PE發(fā)病可能不相關(guān)。

PE是一種很復(fù)雜的多基因遺傳性疾病，受多個(gè)基因、多個(gè)位點(diǎn)的調(diào)控，且環(huán)境、飲食、生活方式等也會(huì)對(duì)其發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響，故本研究結(jié)果仍需要通過擴(kuò)大樣本量進(jìn)行更深入的研究確認(rèn)。另外，對(duì)于ADAMTS7基因多態(tài)性與PE易感性關(guān)系的研究還需要選取多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行研究，從而為PE的臨床診治及預(yù)防提供遺傳學(xué)依據(jù)。