腦膜瘤Nestin表達(dá)與術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系

麥麥提依明·托合提 李金賢 烏拉別克·毛力提 趙文君 黃嘯元 吳尚諭 王繼超

腦膜瘤是顱內(nèi)常見的腫瘤，大多數(shù)為良性，與周圍組織界限清晰。部分腦膜瘤膨脹性生長，可能累及血管、顱骨、腦實質(zhì)，與周圍組織解剖結(jié)構(gòu)復(fù)雜，增加了腫瘤全切除難度，導(dǎo)致術(shù)后容易復(fù)發(fā)。腦膜瘤復(fù)發(fā)影響病人的預(yù)后。研究表明巢蛋白（Nestin）是一種腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，參與腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲、生長等過程。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)Nestin 與非小細(xì)胞肺癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、腫瘤大小等病理特征有關(guān)。本文探討Nestin 在腦膜瘤組織中的表達(dá)及其與腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2015 年9 月～2017 年9 月手術(shù)切除的169 例腦膜瘤，其中男78 例，女91 例；年齡31～73歲，平均（50.53±12.48）歲；WHO分級Ⅰ級133例，Ⅱ級20 例，Ⅲ級16 例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)后病理證實為腦膜瘤；年齡≥18歲；術(shù)前無放/化療及免疫治療史；3個月內(nèi)無免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史。排除標(biāo)準(zhǔn)：復(fù)發(fā)性腦膜瘤；合并嚴(yán)重的心、肝、腎臟功能障礙；合并患其他原發(fā)性腫瘤；存在血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病、傳染性疾??；既往有精神病史。

1.2 檢測方法 利用免疫組化染色法測定Nestin表達(dá)情況。組織蠟塊切片，厚4 μm。脫蠟、水化后，PBS清洗3 次，3 min/次。利用3%雙氧水滅活內(nèi)源性過氧化物酶，蒸餾水洗3 次，3 min/次。用PBS 洗3 次，3 min/次，微波爐加熱行抗原修復(fù)，冷卻至室溫。加正常山羊血清，室溫下反應(yīng)20 min。加一抗4 ℃過夜，PBS 洗3 次，3 min/次。加二抗室溫下反應(yīng)30 min，PBS 洗3 次，3 min/次。加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素液，室溫下反應(yīng)30 min。PBS洗3次，3 min/次。行DAB顯色后，蘇木精復(fù)染，顯微鏡下觀察。免疫組化染色結(jié)果判斷：若細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)中可見棕黃色以及棕褐色染色，則判定為陽性細(xì)胞（圖1），選取5 個高倍視野（×200）進行觀察，染色結(jié)果計分：無染色為0分，黃色1為分，棕黃色2為分，棕褐色3為分；陽性細(xì)胞占比0～5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩者乘積為最終評分，0～1分為陰性，≥2分為陽性。

圖1 免疫組化染色檢測腦膜瘤Nestin表達(dá)（SP法，×200）

1.3 隨訪方法 術(shù)后隨訪4 年，隨訪時進行MRI 檢查。腫瘤基底部硬膜緣或腫瘤侵襲部位如矢狀竇或海綿竇內(nèi)等部位少量殘留腫瘤再次生長，或全切除術(shù)后再發(fā)現(xiàn)腫瘤定為復(fù)發(fā)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0軟件分析；計數(shù)資料行

χ

檢驗；正態(tài)分布計量資料用±

s

表示，行

t

檢驗；采用多因素logistic回歸模型分析腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素；

P

<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腦膜瘤Nestin表達(dá) 腦膜瘤Nestin陽性表達(dá)率為73.37%（124/169），其中WHO分級Ⅰ級腦膜瘤Nestin陽性表達(dá)率[50.94%（27/53）]明顯低于Ⅱ級、Ⅲ級腦膜瘤[分別為80.90%（72/89）、92.59%（25/27）；

P

<0.001]。2.2 腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)率及術(shù)后復(fù)發(fā)的危險因素169例中，術(shù)后復(fù)發(fā)43 例，復(fù)發(fā)率為25.44%。腦膜瘤WHO分級、腫瘤大小、腫瘤侵襲性生長、腫瘤侵犯海綿竇、腫瘤包繞血管神經(jīng)、Nestin 表達(dá)水平、腫瘤切除程度與術(shù)后復(fù)發(fā)有關(guān)（

P

<0.05；表1）。多因素lo?gistic回歸分析顯示，WHO分級Ⅱ～Ⅲ級、腫瘤直徑≥5 cm、腫瘤侵襲性生長、腫瘤侵犯海綿竇、腫瘤包繞血管神經(jīng)、Nestin 表達(dá)陽性是腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素（

P

<0.05，表2），腫瘤全切除是預(yù)防術(shù)后復(fù)發(fā)的保護因素（

P

<0.05，表2）。

表1 腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的單因素分析（例）

注：與未復(fù)發(fā)組相應(yīng)值比，*<0.05

危險因素性別 男女年齡WHO分級<50歲≥50歲Ⅰ級Ⅱ～Ⅲ級<5 cm≥5 cm腫瘤大小瘤周水腫腫瘤鈣化腫瘤侵襲性生長腫瘤侵犯海綿竇腫瘤包繞血管神經(jīng)Nestin表達(dá)腫瘤切除程度陰性陽性全切術(shù)未全切除未復(fù)發(fā)組62（49.21%）64（50.79%）59（49.17%）67（53.17%）117（92.86%）9（7.14%）86（68.25%）40（31.75%）95（75.40%）32（25.40%）22（17.46%）30（23.81%）21（16.67%）42（33.33%）84（66.67%）67（53.17%）59（46.83%）復(fù)發(fā)組16（37.21%）27（62.79%）14（32.56%）29（67.44%）16（37.21%）27（62.79%）*8（18.60%）35（81.40%）*32（74.42%）17（39.53%）24（55.81%）*25（58.14%）*22（51.16%）*3（6.98%）40（93.02%）*9（20.93%）34（79.07%）*

表2 腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)影響因素的多因素logistic回歸分析

危險因素WHO分級Ⅱ～Ⅲ級腫瘤直徑≥5 cm腫瘤侵襲性生長腫瘤侵犯海綿竇腫瘤包繞血管神經(jīng)Nestin表達(dá)陽性腫瘤全切除比值比3.528 2.718 2.979 3.067 3.774 2.715 0.877 95%置信區(qū)間1.278～9.739 1.840～4.015 1.633～5.434 1.487～6.326 1.898～7.504 1.198～6.153 0.802～0.959 P值0.015<0.001<0.001 0.002<0.001 0.017 0.004

3 討論

腦膜瘤是常見的顱內(nèi)腫瘤，多為良性，手術(shù)切除效果良好。但部分腦膜瘤部位特殊，涉及復(fù)雜的血管、神經(jīng)組織，手術(shù)全切除難度大，術(shù)后復(fù)發(fā)率高。如何改善腦膜瘤預(yù)后仍是臨床需要解決的問題。

本文結(jié)果顯示腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)與多種因素相關(guān)，其中WHO 分級、腫瘤大小、腫瘤侵犯海綿竇、腫瘤包繞血管神經(jīng)以及腫瘤切除程度為較常見的影響因素。另外，本文結(jié)果顯示Nestin 陽性表達(dá)也是腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的一種危險因素。Nestin 基因多態(tài)性在腫瘤中有重要的調(diào)節(jié)作用，Nestin 的Thr315 或Thr1299磷酸化對細(xì)胞增殖有較大影響，參與腫瘤進展。王攀等發(fā)現(xiàn)Nestin過表達(dá)與皮膚黑素瘤的病理分級、腫瘤大小有關(guān)，提示Nestin具有促腫瘤進展作用。Nestin 表達(dá)還與乳腺癌進展有關(guān)，受SOX10調(diào)節(jié)，對乳腺癌干細(xì)胞特性進行調(diào)控。Nestin是腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，在細(xì)胞骨架構(gòu)成中發(fā)揮重要作用，可通過對細(xì)胞粘附因子以及肌動蛋白進行調(diào)控，影響腫瘤細(xì)胞浸潤、遷移與增殖，促進腫瘤進展。Nestin 還與炎癥反應(yīng)有關(guān)，可能是神經(jīng)炎癥反應(yīng)的依賴性標(biāo)記物。本文發(fā)現(xiàn)腦膜瘤Nestin 表達(dá)與WHO 分級有關(guān)，隨著WHO 分級增高，Nestin 陽性率也相應(yīng)增高，提示Nestin可能促進腦膜瘤進展。

總之，Nestin 表達(dá)與腦膜瘤WHO 分級有關(guān)，其陽性表達(dá)是腦膜瘤術(shù)后復(fù)發(fā)的獨立危險因素。