復(fù)合藻對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠衰老模型皮膚屏障功能的改善作用

時(shí)間、激素、飲食、環(huán)境污染及太陽(yáng)輻射等均可導(dǎo)致皮膚老化現(xiàn)象的發(fā)生

。真皮膠原細(xì)胞外基質(zhì)是維持皮膚力量和彈性的主要功能組織

。膠原蛋白（Collagen）超家族一共被劃分為8個(gè)家族，28種不同類型的膠原蛋白

，其中皮膚內(nèi)部Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白最豐富，它們是皮膚真皮層細(xì)胞外最主要的基質(zhì)（ECM）。Ⅰ型膠原占皮膚ECM的80%～85%，而Ⅲ型膠原占8%～11%

。

海洋大型藻類富含大量生物活性物質(zhì)，其在中醫(yī)中早已用于皮膚疾病的治療，具有抗氧化、抗炎、抗菌及抗過(guò)敏等作用

。課題組通過(guò)開發(fā)一種由褐藻（海帶、墨角藻、巨藻）及小球藻以適宜比例組成的復(fù)合藻，發(fā)現(xiàn)其可以通過(guò)上調(diào)Sirt3表達(dá)，促進(jìn)線粒體能量代謝水平，改善紫外線誘導(dǎo)的皮膚光老化

，但是該復(fù)合藻在對(duì)皮膚膠原蛋白含量及其修復(fù)皮膚屏障功能中的研究尚未明確，因此本研究通過(guò)采用D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠皮膚衰老及D-半乳糖刺激的小鼠原代皮膚成纖維細(xì)胞損傷模型考察復(fù)合藻對(duì)小鼠皮膚膠原蛋白及其屏障功能的影響。

1 材料和方法

1.1 試劑：復(fù)合藻提取物[褐藻（海帶、墨角藻、巨藻）及小球藻混合組成，成都丁因科技有限公司]；Sirt3抗體（abcom，美國(guó)）；Nrf2抗體（abcom，美國(guó)）；GAPDH抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG（武漢博士德生物工程有限公司）；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

此外，邢孟志[14]從文字學(xué)、金石學(xué)視角出發(fā)提出，清初文字學(xué)、金石學(xué)家的研究，促使清代碑學(xué)運(yùn)動(dòng)自清早期開始萌芽，中期以阮元、包世臣為代表。掃盡帖學(xué)低眉柔靡之風(fēng)、倡導(dǎo)碑學(xué)質(zhì)樸雄強(qiáng)面貌的學(xué)術(shù)運(yùn)動(dòng)，仍是在篆隸書的領(lǐng)域展開的，而清代篆隸的復(fù)興正是文字學(xué)、金石學(xué)研究的結(jié)果。碑學(xué)運(yùn)動(dòng)也是受文字學(xué)、金石學(xué)直接影響的產(chǎn)物，這一影響帶來(lái)了書法理論和書法創(chuàng)作上審美取向的根本改變，這一改變豐富了書法創(chuàng)作的理論內(nèi)容，拓展了書法創(chuàng)作的空間。

1.2 儀器：二氧化碳培養(yǎng)箱(Sigma，公司)；生物潔凈工作臺(tái)(蘇州安泰空氣有限公司)；多功能酶標(biāo)儀（Tecan Mpro200，瑞士），Western blot電泳及化學(xué)成像系統(tǒng)（Bio-red，美國(guó)）。

路基兩側(cè)需要進(jìn)行加寬處理，方式為拼接，控制加寬寬度約為4.5 m。在對(duì)路基加寬處理時(shí)，首先將外圍車道進(jìn)行封堵，然后開始加寬部分的施工，在路基加寬施工期間，為了不給交通帶來(lái)太大的壓力，極可能保持雙向車道可以通車，施工過(guò)程如圖2所示。

2.1 復(fù)合藻對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠皮膚衰老模型含水量的影響：D-半乳糖干預(yù)可以導(dǎo)致小鼠皮膚水分發(fā)生明顯損失，在造模的第8周模型組小鼠皮膚與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）；復(fù)合藻干預(yù)后，小鼠皮膚水分損失現(xiàn)象有降低趨勢(shì)，在第8周復(fù)合藻高劑量組與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。見圖1。

1.3.2 小鼠皮膚水分測(cè)定：采用皮膚水分測(cè)試儀在建模及給藥干預(yù)完成后分別測(cè)定各組小鼠皮膚水含量，監(jiān)測(cè)小鼠皮膚含水變化。

馬克思主義認(rèn)為，社會(huì)作為一個(gè)有機(jī)體是由多個(gè)子系統(tǒng)集成的，社會(huì)整體觀要求我們看到整體聯(lián)動(dòng)的優(yōu)越性，要求我們確立整體大于部分觀念。習(xí)近平指出，共產(chǎn)黨人的初心就是為了實(shí)現(xiàn)人民的根本利益，就是要堅(jiān)持以人民為中心的發(fā)展思想，這也是對(duì)社會(huì)各子系統(tǒng)運(yùn)行的總規(guī)范。具體說(shuō)來(lái)要把握好以下三個(gè)理念：

1.3.3 小鼠皮膚組織生化指標(biāo)測(cè)定：建模及給藥干預(yù)完成后，處死小鼠，取100 mg小鼠背部皮膚，并除去皮下脂肪和結(jié)締組織，加入生理鹽水勻漿后，4℃、3 000 r/ min條件下離心10 min，取上清液，按照試劑盒說(shuō)明檢測(cè)皮膚組織中羥脯氨酸（Hydroxyproline，HYP）、透明質(zhì)酸（Hyaluronic acid，HA）及皮膚總蛋白含量。

1.3 方法

2.2 復(fù)合藻對(duì)小鼠皮膚中羥脯氨酸、透明質(zhì)酸含量的影響：模型組小鼠皮膚中羥脯氨酸、透明質(zhì)酸含量均顯著降低，與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）；中、高劑量復(fù)合藻干預(yù)可以明顯升高小鼠皮膚羥脯氨酸含量，高劑量復(fù)合藻干預(yù)可升高透明質(zhì)酸的含量，且與模型組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。因此給予D-半乳糖可以明顯降低小鼠皮膚羥脯氨酸、透明質(zhì)酸含量，而復(fù)合藻干預(yù)后可以明顯抑制D-半乳糖導(dǎo)致的小鼠皮膚羥脯氨酸、透明質(zhì)酸的丟失，升高小鼠皮膚中羥脯氨酸、透明質(zhì)酸含量。見圖2。

1.3.5 D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞衰老模型的建立：采用5～7 d昆明乳鼠的背部皮膚，Ⅰ型膠原酶消化法分離獲得小鼠皮膚成纖維細(xì)胞。細(xì)胞培養(yǎng)于二氧化碳孵育箱中，采用高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。采用D-半乳糖（20 g/L）的培養(yǎng)基，刺激建立成纖維細(xì)胞衰老模型。模型建立的同時(shí)給予復(fù)合藻提取物干預(yù)，復(fù)合藻的濃度為5、25、50 μM。細(xì)胞板離心后收集上清液，細(xì)胞中每孔加入200 μl 1%的Triton-X 100裂解液，4℃放置30 min后，分別收集至96孔板中，根據(jù)ELISA試劑盒說(shuō)明書分別檢測(cè)Ⅰ型（COL1A2）、Ⅲ型膠原蛋白（COL3A1）和纖連蛋白的表達(dá)量（E）。相對(duì)表達(dá)倍數(shù)計(jì)算公式為：相對(duì)表達(dá)倍數(shù)=E

/E

。

1.3.6 實(shí)時(shí)定量PCR：實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)細(xì)胞中的mRNA表達(dá)。用Trizol常規(guī)方法提取總RNA。采用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)OD

/OD

，將1μg總RNA采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒反轉(zhuǎn)錄成20 μl cDNA。采用RocheR FastStart Essential DNA Green Master進(jìn)行實(shí)時(shí)定量，擴(kuò)增反應(yīng)引物（見表1）。擴(kuò)增條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃變性10 s，60℃退火15 s，72℃延伸20 s，40個(gè)循環(huán)。溶解曲線分析表明PCR反應(yīng)產(chǎn)物為單獨(dú)的雙鏈DNA。用2

值法，以β-actin表達(dá)為內(nèi)參定量其他mRNA的表達(dá)。

南宋周密《武林舊事》的記錄更有意思了，“小經(jīng)紀(jì)”逐條羅列了杭州城的各種小商品與寵物服務(wù)，其中有“貓窩、貓魚、賣貓兒、改貓犬”，貓窩、貓魚、賣貓兒的含義好理解，“改貓犬”很可能是給寵物貓、寵物犬做美容?！端问贰ば⒘x傳》記載，“江州德安陳昉”之家，“有犬百余，共食一槽，一犬不至，群犬不食”。養(yǎng)了一百多條狗，恐怕就不單純是出于實(shí)用目的，而應(yīng)該對(duì)狗有特別的感情。又據(jù)洪邁《夷堅(jiān)志》，宋人員琦，“養(yǎng)狗黑身而白足，名為‘銀蹄’，隨呼拜跪，甚可愛。忽失之，揭榜募贖”。這條“甚可愛”的小狗，有名字，有一日丟失了，主人還貼出啟事，懸賞尋狗，顯然員家已將“銀蹄”當(dāng)成寵物來(lái)飼養(yǎng)了。

2.市場(chǎng)化風(fēng)險(xiǎn)合作承包模式。在現(xiàn)有技術(shù)、經(jīng)濟(jì)、政策下開發(fā)無(wú)效益甚至負(fù)效益的難采儲(chǔ)量區(qū)塊，大港油田提出了在中國(guó)石油內(nèi)部開展市場(chǎng)化風(fēng)險(xiǎn)合作承包的策略，得到中石油集團(tuán)公司的認(rèn)可。在嚴(yán)格執(zhí)行中國(guó)石油“油氣田開發(fā)管理規(guī)定”和礦權(quán)歸屬不變的前提下，邀請(qǐng)渤海鉆探、長(zhǎng)城鉆探、大港油田集團(tuán)公司3 家企業(yè)參加6 個(gè)難采儲(chǔ)量區(qū)塊的開發(fā)競(jìng)標(biāo)。通過(guò)競(jìng)標(biāo)，與渤海鉆探工程有限公司、長(zhǎng)城鉆探工程有限公司、大港油田集團(tuán)有限責(zé)任公司3 家企業(yè)簽訂了濱海一區(qū)、塘沽-長(zhǎng)蘆、葉三撥等6個(gè)風(fēng)險(xiǎn)區(qū)塊的開發(fā)協(xié)議。生產(chǎn)期間，全部油氣產(chǎn)量歸甲方所有，由甲方按照中國(guó)石油相關(guān)規(guī)定向乙方支付服務(wù)費(fèi)。

2 結(jié)果

1.3.1 D-半乳糖誘導(dǎo)的皮膚衰老模型及動(dòng)物分組：采用18～22 g昆明種小鼠50只，將小鼠隨機(jī)分為5組，分別為正常對(duì)照組、模型組、復(fù)合藻低劑量組（0.25 g/kg）、復(fù)合藻中劑量組（0.5 g/kg）及復(fù)合藻高劑量組（1 g/kg）。復(fù)合藻提取物濃度按照前期預(yù)實(shí)驗(yàn)劑量給予。正常對(duì)照組皮下注射生理鹽水，其余各組小鼠每天1次皮下注射D-半乳糖（1 g/kg），連續(xù)8周，建立亞急性皮膚衰老小鼠模型。在開始注射D-半乳糖4周后，復(fù)合藻干預(yù)組各組動(dòng)物皮膚涂抹相應(yīng)復(fù)合藻，每天1次，連續(xù)4周。

1.3.4 小鼠皮膚膠原蛋白和纖連蛋白含量檢測(cè)：取100 mg小鼠背部皮膚，并除去皮下脂肪和結(jié)締組織，加入生理鹽水勻漿后，4℃、3 000 r/min條件下離心10 min，取上清液，檢測(cè)Ⅰ型、Ⅲ型膠原蛋白和纖連蛋白的表達(dá)量（E）。相對(duì)表達(dá)倍數(shù)計(jì)算公式為：相對(duì)表達(dá)倍數(shù)=EPTC溶液/E陰性對(duì)照。

2.3 復(fù)合藻對(duì)小鼠皮膚組織老化的影響：正常對(duì)照組小鼠皮膚結(jié)構(gòu)完整，真皮層較厚，基底膜可見，毛囊、皮脂腺可見。模型組小鼠皮膚結(jié)構(gòu)紊亂，真皮層顯著變薄，細(xì)胞數(shù)減少，基底膜不清晰。低、中劑量組小鼠皮膚結(jié)構(gòu)有所改善，皮膚略增厚，真皮層厚度有所恢復(fù)，染色較均勻，細(xì)胞層數(shù)增多；基底膜可見。高劑量組小鼠皮膚結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)，表皮與真皮界線清晰、規(guī)則，染色較均勻，真皮層厚度明顯增加。見圖3。

1.3.7 Western印跡法分析蛋白表達(dá)情況：各組細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后,磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌1次，每孔加入蛋白裂解液后，反復(fù)吹打，使細(xì)胞充分裂解，95℃～100℃煮沸10 min，10 000 r/min離心10 min，收集的上清液即為樣本蛋白。順序加樣，待電泳分離完全后，采用濕轉(zhuǎn)法將蛋白轉(zhuǎn)移至聚偏氟乙烯（PVDF）膜上，5%脫脂奶粉封閉1.5 h，TBST充分洗膜后加入特異性一抗GAPDH（1:10 000稀釋）及COL1A1和COL3A1抗體（1:1 000稀釋）。4℃過(guò)夜孵育，二抗（1:10 000稀釋）室溫孵育1 h，充分洗膜后加電化學(xué)發(fā)光（ECL）液顯影，凝膠成像儀自動(dòng)曝光，并分析灰度值，每個(gè)樣本重復(fù)3次。

2.4 復(fù)合藻對(duì)小鼠皮膚COLⅠ﹑COL Ⅲ和纖連蛋白含量的影響：D-半乳糖可以導(dǎo)致小鼠皮膚中屏障功能相關(guān)蛋白COLⅠ﹑COL Ⅲ和纖連蛋白的含量明顯減少，模型組與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）；而給予復(fù)合藻干預(yù)后，小鼠皮膚中COLⅠ﹑COL Ⅲ和纖連蛋白含量明顯升高，且高劑量組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。見圖4。

2.5 復(fù)合藻對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞衰老模型中成纖維細(xì)胞活力的影響：D-半乳糖可以導(dǎo)致成纖維細(xì)胞活力顯著降低，模型組與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）；給予復(fù)合藻干預(yù)后，顯著改善了D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠皮膚成纖維細(xì)胞損傷，提高了細(xì)胞活力，且中、高劑量組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。見圖5。

研發(fā)阿爾茨海默病藥物的研究人員正在選擇β-淀粉樣蛋白和tau蛋白之外的研究對(duì)象，這些蛋白曾經(jīng)長(zhǎng)期被認(rèn)為是尋求治療方案的關(guān)鍵。下面的條狀圖表明：2008年和2017年，國(guó)家老齡化研究所對(duì)各種不同研究主題資金投入的百分比。

2.6 復(fù)合藻對(duì)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞中屏障功能相關(guān)蛋白表達(dá)的影響：成纖維細(xì)胞中COL1A2和COL3A1 mRNA水平降低，蛋白水平表達(dá)降低，模型組與正常對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）；而給予復(fù)合藻干預(yù)后，成纖維細(xì)胞中COL1A2和COL3A1 mRNA水平較模型組顯著升高，高劑量組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。同時(shí)復(fù)合藻可促進(jìn)膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ型在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)，促進(jìn)細(xì)胞屏障功能的恢復(fù)，中、高劑量組與模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

＜0.05）。見圖6～7。

3 討論

真皮細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白為完整皮膚纖維提供附著點(diǎn)和機(jī)械阻力，但當(dāng)皮膚暴露在紫外線下輻照（光老化）或氧化應(yīng)激（時(shí)間老化），活性氧激活信號(hào)級(jí)聯(lián)導(dǎo)致膠原蛋白合成減少，基質(zhì)金屬蛋白酶含量增加。活性基質(zhì)金屬蛋白酶可切割膠原細(xì)胞外基質(zhì)，此外被切割生成的膠原蛋白碎片會(huì)進(jìn)一步刺激并通過(guò)上調(diào)基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)和下調(diào)膠原生成，從而促進(jìn)皮膚促老化的發(fā)生

。

海藻的主要生物活性成分包括：多酚、褐藻多糖、間苯三甲酸酯、類胡蘿卜素等

。有研究從昆布、螺旋藻、石花菜3種海藻中提取海藻多糖，研究發(fā)現(xiàn)其具有顯著的抗氧化、吸濕保濕和抗紫外線功效

。同時(shí)近期有研究將積雪草苷與海藻酸鈉制備為皮膚修復(fù)貼劑，發(fā)現(xiàn)家兔皮膚中炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少、新生毛細(xì)血管較多

。也有采用海藻多糖敷料制備皮膚修復(fù)貼用于面部激光術(shù)后皮膚修復(fù)，結(jié)果表明其功效與透明質(zhì)酸敷料制備的皮膚修復(fù)貼相近

。

本研究采用課題組前期開發(fā)的褐藻（海帶、墨角藻、巨藻）及小球藻以適宜的比例組成的復(fù)合藻考察其在皮膚屏障功能改善中的作用。膠原蛋白是皮膚延緩衰老的關(guān)鍵物質(zhì)，但該復(fù)合藻在膠原蛋白流失的作用有待明確。因此本研究通過(guò)采用D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠皮膚衰老模型，考察復(fù)合藻對(duì)其改善作用。D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠皮膚衰老是模擬皮膚自然衰老的經(jīng)典模型，可引起皮膚組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，導(dǎo)致皮膚膠原蛋白及相關(guān)蛋白酶的顯著改變。本研究結(jié)果表明，D-半乳糖刺激后小鼠皮膚中皮膚水分丟失顯著，透明質(zhì)酸、羥脯氨酸、膠原蛋白和纖連蛋白含量明顯降低，小鼠原代皮膚成纖維細(xì)胞活力降低，同時(shí)皮膚細(xì)胞中COL1A2和COL3A1 mRNA水平降低，膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ型表達(dá)顯著降低。復(fù)合藻可以明顯改善D-半乳糖刺激導(dǎo)致的小鼠背部皮膚水分丟失，明顯改善模型小鼠中透明質(zhì)酸、羥脯氨酸含量，升高膠原蛋白和纖連蛋白含量，減少氧化應(yīng)激指標(biāo)；復(fù)合藻還可顯著改善D-半乳糖導(dǎo)致的小鼠原代皮膚成纖維細(xì)胞活力降低，同時(shí)促進(jìn)皮膚細(xì)胞中COL1A2和COL3A1 mRNA水平的升高，并促進(jìn)膠原蛋白Ⅰ和Ⅲ型的表達(dá)。膠原蛋白在皮膚組織中的屏障功能中扮演重要作用，膠原蛋白的缺失或降解均可導(dǎo)致皮膚屏障功能的喪失，導(dǎo)致皮膚褶皺、失水等現(xiàn)象的發(fā)生，而復(fù)合藻具有顯著的恢復(fù)膠原蛋白合成的作用，但其分子機(jī)制還有待進(jìn)一步明確。

[1]Rittié L,Fisher G J.Natural and sun-induced aging of human skin[J].Cold Spring Harb Perspect Med,2015,5(1):a015370.

[2]Yamaguchi Y.Periostin in skin tissue and skin-related diseases[J].Allergol Int,2014,63(2):161-170.

[3]Shu Y,Ren H,Ao R,et al.Comparison of physical and chemical characteristics of collagen from the skin of cod (Gadus macrocephaius)[J].Genet Mol Res,2017,16(2).doi:10.4238/gmr16027940.

[4]Chattopadhyay S,Raines R T.Review collagen-based biomaterials for wound healing[J].Biopolymers,2014,101(8):821-833.

[5]Agarwal P,Zwolanek D,Keene D R,et al.Collagen XII and XIV, new partners of cartilage oligomeric matrix protein in the skin extracellular matrix suprastructur[J].J Biol Chem,2012,287(27):22549-22559.

[6]Karna E,Szoka L,Huynh T Y L,et al.Proline-dependent regulation of collagen metabolism[J].Cell Mol Life Sci,2020,77(10):1911-1918.

[7]Egbert M,Ruetze M,Sattler M,et al.The matricellular protein periostin contributes to proper collagen function and is downregulated during skin aging[J].J Dermatol Sci,2014,73(1):40-48.

[8]Fisher G J,Kang S,Varani J,et al.Mechanisms of photoaging and chronological skin aging[J].Arch Dermatol,2002,138(11):1462-1470.

[9]Jesumani V,Du H,Aslam M.et al.Potential use of seaweed bioactive compounds in skincare—a review[J].Mar Drugs,2019,17(12):688.

[10]Evi S,Ratih P,Hendra M,et al.Cosmeceuticals properties of sea cucumbers: prospects and trends[J].Cosmetics,2017,4:26.

[11]張松,黨學(xué)良,石磊,等.復(fù)合藻通過(guò)調(diào)節(jié)Stir3改善線粒體能量平衡抑制紫外線誘導(dǎo)的皮膚光老化[J].中國(guó)醫(yī)療美容,2020,10(7):65-70.

[12]Holt D R,Kirk S J,Regan M C,et al.Eff ect of age on wound healing in healthy human beings[J].Surgery,1992,112(2):293-297,discussion297-298.

[13]Mine S,Fortunel N O,Pageon H,et al.Aging alters functionally human dermal papillary fibroblasts butnot reticular fibroblasts:A new view of skin morphogenesis and aging[J].PLoS One,2008,3(12):e4066.

[14]Luebberding S,Krueger N,Kerscher M.Age-related changes in skin barrier function—quantitative evaluationof150 female subjects[J].Int J Cosmet Sci,2013,35(2):183-190.

[15]Fernando I P S,Kim K N,Kim D,et al.Algal polysaccharides:potential bioactive substances for cosmeceutical applications[J].Crit Rev Biotechnol,2018,9:1-15.

[16]景永帥,金姍,張丹參,等.3種海藻多糖的理化性質(zhì)和護(hù)膚功效研究[J].日用化學(xué)工業(yè),2021,51(2):121-126,138.

[17]郭家棋,郭敏慧,孔松芝,等.積雪草苷-海藻酸鈉修復(fù)貼的制備及其創(chuàng)傷修復(fù)作用研究[J].中草藥,2020,51(19):4934-4942.

[18]丁利營(yíng),李紅艷,趙絳波,等.皮膚屏障修復(fù)貼海藻糖敷料對(duì)面部激光術(shù)后皮膚修復(fù)的臨床觀察[J].中國(guó)醫(yī)療美容,2017,7(1):35-39.