湖北利川及鄰區(qū)產(chǎn)黃連的質(zhì)量評價

鐘一文 萬定榮 吳漫 唐吉慧 徐澤剛 劉虹

（1.中南民族大學(xué)藥學(xué)院 湖北 武漢 430074；2.湖北省利川市箭竹溪黃連專業(yè)合作社；3.中南民族大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院）

1 前言

中藥材黃連是毛茛科植物黃連（Coptis chinensis Franch.）、三角葉黃連（Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao）或云連（Coptis teeta Wall.）的干燥根莖。以上3種基源的黃連分別習(xí)稱“味連”“雅連”“云連”，其中“味連”是黃連的主要商品，主產(chǎn)于湖北利川和重慶石柱。該兩大產(chǎn)區(qū)均有“黃連之鄉(xiāng)”之稱，合計產(chǎn)量占全國黃連產(chǎn)量的80%以上。重慶石柱縣擁有全國最大的黃連交易市場。利川與石柱同處武陵山脈，種植的黃連也為同一基源，兩地雖歸屬不同省市，但互為鄰區(qū)，自然條件、生態(tài)環(huán)境都十分相似[1]。在歷史上，利川在春秋時屬巴國，后又歸古“四川”管轄，其所產(chǎn)黃連與石柱黃連統(tǒng)稱川黃連[2]。許多利川黃連的生產(chǎn)商為了迎合市場，將利川黃連運到重慶石柱[3]，對外以“石柱黃連”的名義進行銷售，故有必要對利川黃連和石柱黃連的質(zhì)量進行評價研究。

小檗堿、巴馬汀、表小檗堿、黃連堿等生物堿類成分是黃連的主要有效活性成分，本文主要分析利川黃連與石柱黃連中這4種生物堿的含量，對兩者的質(zhì)量狀況進行初步研究[4-8]。

2 材料、儀器與試藥

2.1 實驗材料

利川黃連不同產(chǎn)地樣品（5份）由湖北利川市箭竹溪黃連專業(yè)合作社的徐澤剛收集；重慶石柱黃連（3份）由重慶石柱縣楓木鄉(xiāng)蓮花村的劉學(xué)生采集。樣品收集地點信息見表1。

表1 樣品采集點信息

2.2 儀器

高效液相色譜儀（戴安3000，在線脫氣機、二元泵、自動進樣器、柱溫箱、VWD檢測器、Chromeleon色譜工作站）；電子天平（BP211D型，德國）；超聲波清洗器（KQ-500E型，昆山市超聲儀器有限公司）；0.45 μm微孔濾膜（天津津騰實驗設(shè)備有限公司）；色譜柱（HypersilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm））；萬分之一分析天平（CP214，奧豪斯儀器有限公司）。

2.3 試藥

甲醇（分析純）、磷酸（優(yōu)級純）、磷酸二氫鉀（分析純）、十二烷基硫酸鈉（化學(xué)純）（國藥集團化學(xué)試劑有限公司）；乙腈（色譜純）（西格瑪奧德里奇（上海）貿(mào)易有限公司）；小檗堿對照品（歸一化法檢測其純度為98.7%）；表小檗堿對照品（歸一化法檢測其純度為98.88%）；巴馬汀對照品（歸一化法檢測其純度為98.53%）；黃連堿對照品（歸一化法檢測其純度為98.17%）（上海源葉生物科技有限公司）；實驗用水為超純水。

3 方法

3.1 混合對照品溶液的制備

精密稱取表小檗堿對照品、巴馬汀對照品、黃連堿對照品和小檗堿對照品適量，均加入甲醇，分別制成每1 mL含表小檗堿53.3 μg、巴馬汀33.3 μg、黃連堿40.0 μg和小檗堿33.3 μg的混合對照品溶液。

3.2 供試品溶液制備

取各樣品粉末（過2號篩）約0.2 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中；精密加入甲醇-鹽酸（100∶1）的混合溶液50 mL，密塞；稱定重量，超聲處理（功率250 W，頻率40 kHz）30 min；放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過；精密量取續(xù)濾液2 mL，置于10 ml量瓶中；加入甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3 色譜條件

采用HPLC色譜法測定。填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠；流動相：乙腈-0.05 moL/L磷酸二氫鉀溶液（50∶50）（每100 ml中加十二烷基硫酸鈉0.4 g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0）；檢測波長：345 nm；流速：1 mL/min；柱溫：30℃；進樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算，不低于5 000。

混合對照品溶液色譜圖見圖1，代表性樣品利川市汪營鎮(zhèn)黃連樣品色譜圖見圖2，石柱縣沙子鎮(zhèn)沙子村黃連樣品色譜圖見圖3。

圖1 混合對照品溶液HPLC色譜圖

圖2 利川汪營鎮(zhèn)黃連樣品HPLC色譜圖

圖3 石柱沙子鎮(zhèn)沙子村黃連樣品HPLC色譜圖

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線

配制表小檗堿對照品溶液系列濃度（μg/mL）為10.6、21.2、42.4、84.8、169.6、339.2，采用高效液相色譜法，在波長345 nm處分別測定，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程：Y=0.0205X+0.0094（r2=0.999 4），表明在10.6～339.2 μg/mL范圍內(nèi)，小檗堿濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

配制黃連堿對照品溶液系列濃度（μg/mL）為4.0、8.0、16.0、32.0、64.0、128.0，采用高效液相色譜法，在波長345 nm處分別測定，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程：Y=0.0221X+0.007（r2=0.999 8），表明在4.0～128.0 μg/mL范圍內(nèi)，黃連堿濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

配制小檗堿對照品溶液系列濃度（μg/mL）為8.7、17.4、34.8、69.6、139.2、278.4，采用高效液相色譜法，在波長345 nm處分別測定，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程：Y=0.0204X+0.0037（r2=0.999 8），表明在8.7～278.4 μg/mL范圍內(nèi)，小檗堿濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

配制巴馬汀對照品溶液系列濃度（μg/mL）為8.7、17.4、34.8、69.6、139.2、278.4，采用高效液相色譜法，在波長345 nm處分別測定，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)（Y），對照品溶液的濃度為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程：Y=0.0235X+0.0015（r2=0.999 8），表明在8.7～278.4 μg/mL范圍內(nèi)，巴馬汀濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度考察

取2號供試品溶液在“3.3”項色譜條件下連續(xù)進樣6次，測定峰面積。結(jié)果顯示，小檗堿、巴馬汀、表小檗堿、黃連堿峰面積的RSD依次為0.33%、0.52%、0.25%和1.21%，表明儀器的精密度良好。

3.6 重復(fù)性實驗

精密稱取2號黃連樣品粗粉0.2 g共6份，按照前述方法分別制備供試品溶液，依法進樣，分別記錄小檗堿、巴馬汀、表小檗堿、黃連堿的峰面積。結(jié)果顯示，峰面積的RSD依次為0.80%、1.19%、1.03%和1.95%，表明測定結(jié)果的重復(fù)性良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗

精密稱取2號黃連樣品粗粉0.2 g，按照前述方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、12、24 h進樣，分別記錄小檗堿、巴馬汀、表小檗堿、黃連堿的峰面積。結(jié)果顯示，峰面積的RSD依次為0.64%、0.93%、1.27%和1.26%，表明黃連供試品溶液中各有關(guān)成分的含量在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.8 加樣回收率試驗

精密稱取2號黃連樣品粗粉0.2 g，共6份，分別加入與樣品中各成分量等量的對照品，按照前述方法制備供試品溶液并進樣分析，計算回收率。結(jié)果顯示，小檗堿、巴馬汀、表小檗堿、黃連堿的平均回收率分別為104.41%、98.33%、100.54%和101.17%，表明樣品中各成分測定的準(zhǔn)確度高。

4 結(jié)果與分析

按照上述方法對不同產(chǎn)地的黃連樣品進行4種生物堿含量的測定，檢測結(jié)果均按干燥品計，檢測數(shù)據(jù)見表2。

表2 不同產(chǎn)地的黃連樣品有關(guān)物質(zhì)的含量測定結(jié)果

由表中檢測數(shù)據(jù)可知，8批黃連樣品中小檗堿含量為7.91%～9.72%，均高于中國藥典規(guī)定最低5.5%的含量限度；黃連堿含量為2.40%～2.94%，均高于中國藥典規(guī)定最低1.6%的含量限度；巴馬汀含量為1.85%～2.73%，均高于中國藥典規(guī)定最低1.5%的含量限度；表小檗堿含量為1.52%～2.12%，均高于中國藥典規(guī)定最低0.80%的含量限度。說明產(chǎn)于湖北利川及重慶石柱的黃連質(zhì)量均為良好。

湖北利川黃連5個地區(qū)的小檗堿、巴馬汀、表小檗堿的平均含量分別為8.83%、2.44%和1.90%，明顯高于重慶石柱黃連3個地區(qū)的平均含量8.25%、1.94%和1.65%，但利川黃連黃連堿含量為2.59%，低于石柱黃連黃連堿含量2.73%。按含量最高的主要生物堿成分小檗堿以及黃連堿、巴馬汀、表小檗堿三者的總量平均值來看，湖北利川黃連的平均含量分布為8.83%和6.93%，顯著高于重慶石柱的8.25%和6.31%，說明利川黃連的品質(zhì)在總體上優(yōu)于重慶石柱黃連。

利川市汪營鎮(zhèn)黃連樣品小檗堿、巴馬汀、表小檗堿3種生物堿的含量分別為9.72%、2.73%和2.12%，均為最高。利川市建南鎮(zhèn)箭竹溪黃連樣品小檗堿、巴馬汀、表小檗堿3種生物堿的含量分別為9.50%、2.59%和1.95%，僅次于利川市汪營鎮(zhèn)黃連樣品。石柱縣楓木鎮(zhèn)昌平村黃連樣品中小檗堿含量為7.91%，且黃連堿、巴馬汀、表小檗堿三者的生物堿含量總值為5.97%，均為最低。利川黃連在性狀上普遍成雞爪狀，抱團成簇，團簇直徑較大，單枝粗細較均勻，而石柱黃連抱團略松散，單枝多較細較短。

5 討論

湖北利川5個地點黃連樣品的生物堿含量平均值顯著高于重慶石柱3個地點黃連樣品的平均值，初步推斷湖北利川黃連的質(zhì)量略優(yōu)于重慶石柱黃連。

根據(jù)樣品收集者提供的信息，湖北利川汪營、箭竹溪及重慶石柱縣沙子鄉(xiāng)的黃連樣品生長期為6年，其余為5年，根據(jù)檢測數(shù)據(jù)可知，生長6年者生物堿類成分含量較高，質(zhì)量優(yōu)于生長5年者，這一結(jié)論已有同類文獻的支持[9]。另有文獻記載，“味連”宜產(chǎn)地域覆蓋利川各鄉(xiāng)鎮(zhèn)和石柱黃水鎮(zhèn)（石柱黃連最集中地區(qū)），根據(jù)《原產(chǎn)地域產(chǎn)品保護規(guī)定》和《地理標(biāo)志產(chǎn)品保護規(guī)定》，原國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局分別于2004年10月10日、2004年12月23日，宣布對石柱黃連和利川黃連實施國家地理標(biāo)志產(chǎn)品保護[10]，說明利川和石柱均為我國黃連（味連）傳統(tǒng)特色產(chǎn)區(qū)。但利川黃連品質(zhì)優(yōu)異，其藥材運至重慶市石柱縣黃水鎮(zhèn)作“石柱黃連”銷售并不適宜，不僅造成人力物力資源的浪費，也影響利川黃連的品牌建設(shè)。

此外，因為各黃連采集地的海拔高度差別不大，因此本文無法分析出海拔高度對黃連生物堿含量是否有直接影響。