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    酒石酸泰萬菌素注射小鼠后LD5050 的測定

    2022-07-30 03:21:58楊海涵王思怡唐華僑胥世洪房春林
    四川畜牧獸醫(yī) 2022年7期
    關(guān)鍵詞:預(yù)試酒石酸菌素

    楊海涵,王思怡,唐華僑,胥世洪,房春林

    (1.成都乾坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司,四川 成都 611130;2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué),四川 成都 611130;3.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院,四川 成都 611130)

    酒石酸泰萬菌素作為目前獸醫(yī)臨床上常用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,主要用于防治豬支原體肺炎、細(xì)胞內(nèi)勞森菌引起的豬增生性腸炎(回腸炎)、豬痢疾短螺旋體引起的豬痢疾,但是其劑型只有可溶性粉,沒有注射劑,限制了其用于危重病例的救治。為了考察酒石酸泰萬菌素注射給藥的安全,筆者選用小鼠開展了相關(guān)急性毒性試驗(yàn)。

    1 材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠 昆明系SPF 級小鼠120 只,購自重慶醫(yī)科大學(xué),雌雄各半,體重18~20 g,給藥前禁食12 h,不禁水。

    1.2 藥品 酒石酸泰萬菌素由成都某動(dòng)物藥業(yè)股份有限公司提供,給藥時(shí)過濾除菌。

    2 試驗(yàn)方法

    采用改良寇氏法,并參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部新獸藥一般毒性實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求進(jìn)行[1-2]。

    2.1 預(yù)試試驗(yàn)

    2.1.1 給藥劑量換算 參照同族抗生素酒石酸泰樂菌素對豬的注射劑量(5~13 mg/kg 體重)[2],擬定本品的注射劑量為10 mg/kg 體重,換算成小鼠的注射劑量為100 mg/kg體重[3],即2 mg/20 g體重。

    2.1.2 分組 將小鼠隨機(jī)分成5組,每組6只,雌雄各半,給藥前各組小鼠禁食不禁水12 h,給藥2 h后自由飲食。

    2.1.3 試驗(yàn)方法 按照酒石酸泰萬菌素臨床給藥劑量的3 倍(300 mg/kg 體重)至18 倍(1 800 mg/kg體重)用注射用水稀釋后腹腔注射小鼠,注射體積約0.2 mL/只,確定實(shí)驗(yàn)小鼠0%和100%死亡的劑量范圍。當(dāng)零死亡的給藥劑量大于5 000 mg/kg體重時(shí),表明LD50大于5 000 mg/kg體重,不需進(jìn)行正式試驗(yàn),只需進(jìn)行最大耐受量測定和重復(fù)試驗(yàn)。

    2.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試結(jié)果將小鼠隨機(jī)分為7組,每組10只,雌雄各半,按照預(yù)試驗(yàn)得到的0%和100%死亡范圍,以1∶1.2~1.4的比值確定每組的給藥劑量。連續(xù)觀察7 d,每天上、下午各觀察1 次,包括精神狀態(tài)(不動(dòng)、過度興奮、萎靡、驚跳),肌肉狀態(tài)(四肢麻痹、震顫),步態(tài)(有無異常),皮毛情況(是否蓬松、無光),各天然孔狀態(tài)(有無異常分泌物、大小便是否正常)等。死亡小鼠解剖觀察內(nèi)臟器官病變。

    2.3 LD50的計(jì)算 采用改良寇氏法對酒石酸泰萬菌素的LD50進(jìn)行計(jì)算,如果LD50超出5000mg/kg體重,則進(jìn)行最大耐受量測定和重復(fù)試驗(yàn)。

    3 結(jié)果

    3.1 預(yù)試試驗(yàn) 按照小鼠注射給藥劑量2 mg/20 g體重,分別以3 倍遞加的劑量腹腔注射小鼠,根據(jù)實(shí)際體重調(diào)整注射劑量,得出酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的全部致死劑量(100%死亡)為40 mg/20 g 體重,全不致死劑量(0%死亡)為6 mg/20 g體重。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

    表1 酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的預(yù)試結(jié)果

    3.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試試驗(yàn)結(jié)果,以36 mg/20 g體重(藥液濃度為180mg/mL)為最高劑量,6mg/20g體重(藥液濃度為30 mg/mL)為最低劑量。設(shè)定給藥劑量相鄰兩組的比值為K=1.348,受試藥物溶液按“1∶K系列稀釋法”等容量配制。每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射體積為0.2 mL/20 g 體重,根據(jù)實(shí)際體重調(diào)整注射劑量。結(jié)果見表2。

    表2 酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的正試結(jié)果

    3.3 毒性反應(yīng) 小鼠給藥后,表現(xiàn)出蜷縮、活動(dòng)減少,腹腔注射后15~30 min 被毛凌亂、弓背、震顫、驚厥、迅速死亡,12 h后未發(fā)生死亡,未發(fā)現(xiàn)天然孔出血,解剖死亡鼠也無肉眼可見病變。未死亡小鼠自主活動(dòng)減少,出現(xiàn)蜷縮現(xiàn)象,被毛凌亂,弓背、食欲略為下降,嚴(yán)重者出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)、呼吸加深等癥狀,采食量下降,以上體征均在給藥12~24 h 后基本恢復(fù)正常,給藥后觀察7 d,小鼠未出現(xiàn)死亡。結(jié)果見表3。

    表3 注射后0~12 h、12~24 h小鼠的采食情況及7 d后體重

    3.4 LD50計(jì)算 數(shù)據(jù)整理結(jié)果見表4。

    表4 正式試驗(yàn)的數(shù)據(jù)整理

    按照改良寇氏法項(xiàng)下公式計(jì)算得出:酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的LD50為734.85 mg/kg體重,LD50的95%可信限為478.63~1 128.23 mg/kg體重。

    4 臟器系數(shù)測定

    采集死亡小鼠和未死亡小鼠7 d 后的肝臟、脾臟、腎臟,稱取重量及小鼠體重,計(jì)算臟器系數(shù),并與對照組比較,結(jié)果差異不顯著(表5、表6)。

    表5 死亡小鼠的臟器系數(shù)

    表6 未死亡小鼠的臟器系數(shù)

    5 未死亡小鼠的血常規(guī)檢查

    對未死亡小鼠進(jìn)行血常規(guī)檢查,發(fā)現(xiàn)7 d 觀察期后各組小鼠的白細(xì)胞相對較少,但均在正常范圍內(nèi),紅細(xì)胞和血小板差異不顯著。

    6 結(jié)論與分析

    本試驗(yàn)得出酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的LD50為734.85 mg/kg 體重,LD50的95%可信限為478.63~1 128.23 mg/kg 體重,可以判為低毒(501~5 000 mg/kg 體重)[2]。腹腔注射后出現(xiàn)急性死亡,12 h 基本耐過,24 h 后食欲恢復(fù),運(yùn)動(dòng)、呼吸等恢復(fù)正常。觀察7 d 后與對照組比較,體重差異不大,肝臟、脾臟、腎臟的臟器系數(shù)也與對照組無顯著差異。據(jù)報(bào)道[4-8],用泰萬菌素給小鼠口服時(shí)LD50小于同族抗生素泰樂菌素的LD50(12.22g/kg),小于泰妙菌素的LD50(1.58 g/kg),也小于替米考星口服給藥的LD50(2.071 g/kg),但注射給藥高于替米考星對小鼠注射給藥的LD50(595.36 mg/kg)。以上結(jié)果說明泰萬菌素口服安全,但注射給藥存在風(fēng)險(xiǎn),其安全性需要進(jìn)一步驗(yàn)證。■

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