酒石酸泰萬菌素注射小鼠后LD5050 的測定

楊海涵，王思怡，唐華僑，胥世洪，房春林

（1.成都乾坤動(dòng)物藥業(yè)有限公司，四川 成都 611130；2.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，四川 成都 611130；3.成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院，四川 成都 611130）

酒石酸泰萬菌素作為目前獸醫(yī)臨床上常用的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要用于防治豬支原體肺炎、細(xì)胞內(nèi)勞森菌引起的豬增生性腸炎（回腸炎）、豬痢疾短螺旋體引起的豬痢疾，但是其劑型只有可溶性粉，沒有注射劑，限制了其用于危重病例的救治。為了考察酒石酸泰萬菌素注射給藥的安全，筆者選用小鼠開展了相關(guān)急性毒性試驗(yàn)。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)小鼠 昆明系SPF 級小鼠120 只，購自重慶醫(yī)科大學(xué)，雌雄各半，體重18～20 g，給藥前禁食12 h，不禁水。

1.2 藥品 酒石酸泰萬菌素由成都某動(dòng)物藥業(yè)股份有限公司提供，給藥時(shí)過濾除菌。

2 試驗(yàn)方法

采用改良寇氏法，并參照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部新獸藥一般毒性實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求進(jìn)行［1-2］。

2.1 預(yù)試試驗(yàn)

2.1.1 給藥劑量換算 參照同族抗生素酒石酸泰樂菌素對豬的注射劑量（5～13 mg/kg 體重）［2］，擬定本品的注射劑量為10 mg/kg 體重，換算成小鼠的注射劑量為100 mg/kg體重［3］，即2 mg/20 g體重。

2.1.2 分組 將小鼠隨機(jī)分成5組，每組6只，雌雄各半，給藥前各組小鼠禁食不禁水12 h，給藥2 h后自由飲食。

2.1.3 試驗(yàn)方法 按照酒石酸泰萬菌素臨床給藥劑量的3 倍（300 mg/kg 體重）至18 倍（1 800 mg/kg體重）用注射用水稀釋后腹腔注射小鼠，注射體積約0.2 mL/只，確定實(shí)驗(yàn)小鼠0%和100%死亡的劑量范圍。當(dāng)零死亡的給藥劑量大于5 000 mg/kg體重時(shí)，表明LD50大于5 000 mg/kg體重，不需進(jìn)行正式試驗(yàn)，只需進(jìn)行最大耐受量測定和重復(fù)試驗(yàn)。

2.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試結(jié)果將小鼠隨機(jī)分為7組，每組10只，雌雄各半，按照預(yù)試驗(yàn)得到的0%和100%死亡范圍，以1∶1.2～1.4的比值確定每組的給藥劑量。連續(xù)觀察7 d，每天上、下午各觀察1 次，包括精神狀態(tài)（不動(dòng)、過度興奮、萎靡、驚跳），肌肉狀態(tài)（四肢麻痹、震顫），步態(tài)（有無異常），皮毛情況（是否蓬松、無光），各天然孔狀態(tài)（有無異常分泌物、大小便是否正常）等。死亡小鼠解剖觀察內(nèi)臟器官病變。

2.3 LD50的計(jì)算 采用改良寇氏法對酒石酸泰萬菌素的LD50進(jìn)行計(jì)算，如果LD50超出5000mg/kg體重，則進(jìn)行最大耐受量測定和重復(fù)試驗(yàn)。

3 結(jié)果

3.1 預(yù)試試驗(yàn) 按照小鼠注射給藥劑量2 mg/20 g體重，分別以3 倍遞加的劑量腹腔注射小鼠，根據(jù)實(shí)際體重調(diào)整注射劑量，得出酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的全部致死劑量（100%死亡）為40 mg/20 g 體重，全不致死劑量（0%死亡）為6 mg/20 g體重。試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的預(yù)試結(jié)果

3.2 正式試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試試驗(yàn)結(jié)果，以36 mg/20 g體重（藥液濃度為180mg/mL）為最高劑量，6mg/20g體重（藥液濃度為30 mg/mL）為最低劑量。設(shè)定給藥劑量相鄰兩組的比值為K＝1.348，受試藥物溶液按“1∶K系列稀釋法”等容量配制。每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射體積為0.2 mL/20 g 體重，根據(jù)實(shí)際體重調(diào)整注射劑量。結(jié)果見表2。

表2 酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的正試結(jié)果

3.3 毒性反應(yīng) 小鼠給藥后，表現(xiàn)出蜷縮、活動(dòng)減少，腹腔注射后15～30 min 被毛凌亂、弓背、震顫、驚厥、迅速死亡，12 h后未發(fā)生死亡，未發(fā)現(xiàn)天然孔出血，解剖死亡鼠也無肉眼可見病變。未死亡小鼠自主活動(dòng)減少，出現(xiàn)蜷縮現(xiàn)象，被毛凌亂，弓背、食欲略為下降，嚴(yán)重者出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)、呼吸加深等癥狀，采食量下降，以上體征均在給藥12～24 h 后基本恢復(fù)正常，給藥后觀察7 d，小鼠未出現(xiàn)死亡。結(jié)果見表3。

表3 注射后0～12 h、12～24 h小鼠的采食情況及7 d后體重

3.4 LD50計(jì)算 數(shù)據(jù)整理結(jié)果見表4。

表4 正式試驗(yàn)的數(shù)據(jù)整理

按照改良寇氏法項(xiàng)下公式計(jì)算得出：酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的LD50為734.85 mg/kg體重，LD50的95%可信限為478.63～1 128.23 mg/kg體重。

4 臟器系數(shù)測定

采集死亡小鼠和未死亡小鼠7 d 后的肝臟、脾臟、腎臟，稱取重量及小鼠體重，計(jì)算臟器系數(shù)，并與對照組比較，結(jié)果差異不顯著（表5、表6）。

表5 死亡小鼠的臟器系數(shù)

表6 未死亡小鼠的臟器系數(shù)

5 未死亡小鼠的血常規(guī)檢查

對未死亡小鼠進(jìn)行血常規(guī)檢查，發(fā)現(xiàn)7 d 觀察期后各組小鼠的白細(xì)胞相對較少，但均在正常范圍內(nèi)，紅細(xì)胞和血小板差異不顯著。

6 結(jié)論與分析

本試驗(yàn)得出酒石酸泰萬菌素腹腔注射小鼠的LD50為734.85 mg/kg 體重，LD50的95%可信限為478.63～1 128.23 mg/kg 體重，可以判為低毒（501～5 000 mg/kg 體重）［2］。腹腔注射后出現(xiàn)急性死亡，12 h 基本耐過，24 h 后食欲恢復(fù)，運(yùn)動(dòng)、呼吸等恢復(fù)正常。觀察7 d 后與對照組比較，體重差異不大，肝臟、脾臟、腎臟的臟器系數(shù)也與對照組無顯著差異。據(jù)報(bào)道［4-8］，用泰萬菌素給小鼠口服時(shí)LD50小于同族抗生素泰樂菌素的LD50（12.22g/kg），小于泰妙菌素的LD50（1.58 g/kg），也小于替米考星口服給藥的LD50（2.071 g/kg），但注射給藥高于替米考星對小鼠注射給藥的LD50（595.36 mg/kg）。以上結(jié)果說明泰萬菌素口服安全，但注射給藥存在風(fēng)險(xiǎn)，其安全性需要進(jìn)一步驗(yàn)證。■