IGRT+TP方案對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者HAb18G、MMP-9水平的影響

麻發(fā)強(qiáng) 趙春龍 廖光輝 鄒茵 黃貴佳 楊完

(貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院，貴州 凱里 556000)

非小細(xì)胞肺癌與長(zhǎng)期的電離輻射、吸煙、遺傳、環(huán)境接觸、肺部慢性感染因素有關(guān)〔1〕。其中非小細(xì)胞癌包括腺癌、鱗狀細(xì)胞癌、大細(xì)胞癌、非小細(xì)胞肺癌占到肺癌的80%，當(dāng)發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在50%的非小細(xì)胞時(shí)就已經(jīng)處在中晚期了〔2〕。臨床表現(xiàn)為體重減輕、咳嗽、痰出血、胸部腹痛、疲乏、食欲缺乏、體重減輕、低熱等，治療非小細(xì)胞肺癌的治療方法主要有靶向治療、手術(shù)治療、免疫治療、放化療〔3，4〕。尤其要注意的是非小細(xì)胞肺癌嚴(yán)重影響患者的呼吸系統(tǒng)，給治療增加了難度，有些患者會(huì)嚴(yán)重的危害到患者的生命〔5，6〕。通過放療、化療的方法可以有效地延長(zhǎng)患者的生命，但是并不能很好地治愈非小細(xì)胞肺癌。且目前臨床中缺乏有效治療非小細(xì)胞肺癌的治療方法，本研究旨在探討引導(dǎo)放射治療(IGRT)+化療方案(TP)方案對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者HAb18G、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-9水平的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取2017年4月至2018年4月在貴州醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院收治的非小細(xì)胞肺癌病患82例，診斷標(biāo)準(zhǔn)：符合《NCCN非小細(xì)胞肺癌臨床實(shí)踐指南》〔7〕對(duì)非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：高血壓、合并糖尿病、心力衰竭、妊娠期、哺乳期、心力衰竭。隨機(jī)分為TP治療組和IGRT聯(lián)合組各41例，TP治療組年齡41～62歲，平均(48.92±9.98)歲，IGRT聯(lián)合組年齡42～63歲，平均(49.87±9.98)歲，兩組資料差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后，所有研究對(duì)象及家屬簽署了知情同意書。

藥物來源：順鉑注射劑(齊魯制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20023461)，規(guī)格：20 mg×5支/盒。紫杉醇注射劑(哈藥集團(tuán)生物工程有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字：H20059962)，規(guī)格：5 ml×3瓶/盒。

1.2治療方法 TP治療組采用化療方案治療：給予非小細(xì)胞肺癌患者紫杉醇135 mg/m2，加入氯化鈉溶液稀釋，靜脈滴注3 h，使用順鉑25 mg/m2，以靜脈滴注1～3 d，21 d為1個(gè)周期，以上均接受42 d的周期進(jìn)行化療。IGRT聯(lián)合組在TP治療組的基礎(chǔ)上采用圖像引導(dǎo)放射治療進(jìn)行治療：非小細(xì)胞肺癌患者雙手舉起并交叉抱頭將手放在額頭處，然后采用熱塑膜進(jìn)行固定，接著采用Philips 16排大孔徑螺旋CT模擬定位機(jī)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行掃描，著重掃描患者胸部，厚層為5 mm，接著從環(huán)甲膜掃描到肺底部，獲得定位圖像以后輸送到Varian工作站和Varian Eclipse逆向調(diào)強(qiáng)計(jì)劃系統(tǒng)，采用5野放療，計(jì)劃靶區(qū)(PTV)劑量為50 Gy，要求90%的PTV達(dá)到處方劑量，雙肺受照20 Gy劑量時(shí)體積<37%，脊髓最大劑量≤40 Gy。

1.3HAb18G檢測(cè) 抽取非小細(xì)胞肺癌患者的空腹靜脈血4.56 ml，離心半徑6 cm平均52 s轉(zhuǎn)速3 000 r/min進(jìn)行離心處理12 min，分離上層血清，在-66℃的環(huán)境下保存?zhèn)溆?，采用免疫熒光定量檢測(cè)法檢測(cè)HAb18G，將非小細(xì)胞肺癌患者血液放在不加抗凝劑的試管中。隨后將血液放在乙二胺四乙酸(EDTA)的試管中以后將血漿吸出。采集完成后馬上進(jìn)行檢測(cè)，將抽取非小細(xì)胞肺癌患者血放在取血器后加緩沖液，混勻61 s后，將試劑卡滴三滴混合液，插入試劑卡等待185 s，就可以出來HAb18G的檢測(cè)結(jié)果。反應(yīng)體系：8 μl cDNA模板、10 μl SYBRP Green mix、2 μl PCR Primer mix。反應(yīng)條件：95℃ 10 min；95℃ 10 s；60℃ 1 min；40個(gè)循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct方法計(jì)算HAb18G表達(dá)量。內(nèi)參引物序列：上游：5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′，下游：5′-GAGGATCTTCATGA-GGTAGTCAGT-3′。HAb18G引物序列：上游：5′-GAGGATCTTCATGAGGTAGTCAGT-3′，下游：5′-CTGGCACCACACCTTCTACAATGAGC-3′。

1.4血清MMP-9、細(xì)胞角質(zhì)素片段抗原(CYERA)21-1、糖類抗原(CA)125、癌胚抗原(CEA)水平檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)血清MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA，制作標(biāo)準(zhǔn)品，以1∶2的稀釋液稀釋樣品；在反應(yīng)孔中加入以稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品100 μl/孔，在37℃恒溫孵育箱中濕育2 h；用洗滌液將反應(yīng)板洗3次后，加入1∶100倍稀釋后的抗體工作液100 μl/孔，放于37℃恒溫孵育箱中濕育47 min；繼續(xù)清洗反應(yīng)板2次后，在反應(yīng)孔內(nèi)加入TMB溶液100 μl/孔，置于37℃恒溫孵育箱中濕育47 min后在反應(yīng)孔內(nèi)加入終止液100 μl/孔終止反應(yīng)，在451 nm波長(zhǎng)測(cè)定吸光度，顏色反應(yīng)深淺與MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA水平呈正比，經(jīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA水平。

1.5臨床療效評(píng)價(jià) 依據(jù)WHO的標(biāo)準(zhǔn)將臨床療效分為：完全緩解、部分緩解、穩(wěn)定、進(jìn)展。完全緩解：非小細(xì)胞肺癌腫瘤完全消失；部分緩解：非小細(xì)胞肺癌腫瘤縮小一半以上；穩(wěn)定：非小細(xì)胞肺癌中腫瘤縮小或者增大不超過腫瘤本身的25%，且沒有新病灶的出現(xiàn)；進(jìn)展：非小細(xì)胞肺癌中的腫瘤縮小或者增大超過腫瘤本身的25%，且有新病灶的出現(xiàn)。(有效為有效緩解+部分緩解)。

1.6不良反應(yīng)情況統(tǒng)計(jì) 統(tǒng)計(jì)出在治療非小細(xì)胞肺癌過程中非小細(xì)胞肺癌患者出現(xiàn)食欲不振、掉發(fā)、干嘔等不良反應(yīng)情況。

1.7生存周期統(tǒng)計(jì) 在非小細(xì)胞肺癌患者治療結(jié)束后行為期12個(gè)月的隨訪，統(tǒng)計(jì)中位生存期、生存率。

1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS20.0軟件行t、χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組HAb18G、MMP-9水平變化比較 兩組治療前HAb18G、MMP-9表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組HAb18G、MMP-9水平明顯低于治療前，且IGRT聯(lián)合組的HAb18G、MMP-9水平明顯低于TP治療組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組HAb18G、MMP-9水平變化比較

2.2兩組腫瘤標(biāo)志物水平變化比較 兩組治療前CYERA21-1、CA125、CEA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；治療后兩組CYERA21-1、CA125、CEA水平明顯低于治療前，且IGRT聯(lián)合組明顯低于TP治療組(P<0.05)。見表2。

表2 兩組腫瘤標(biāo)志物水平變化比較

2.3兩組臨床療效比較 IGRT聯(lián)合組治療總有效率(90.24%，完全緩解16例、部分緩解21例、穩(wěn)定2例、疾病進(jìn)展2例)明顯高于TP治療組(63.41%，完全緩解12例、部分緩解14例、穩(wěn)定8例、疾病進(jìn)展7例；χ2=8.289，P=0.003)。

2.4不良反應(yīng)發(fā)生情況比較 IGRT聯(lián)合組總不良反應(yīng)發(fā)生率(14.63%；食欲不振3例、掉發(fā)2例、干嘔1例)略高于TP治療組(12.19%，食欲不振2例、掉發(fā)2例、干嘔1例)，但兩組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(χ2=0.104，P=0.745)。

2.5兩組生存周期比較 IGRT聯(lián)合組中位生存期、生存率均明顯高于TP治療組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組生存周期比較

3 討 論

非小細(xì)胞肺癌在中國(guó)是最為常見的腫瘤，死亡率與發(fā)病率在惡性腫瘤的首位，男性的發(fā)病率要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于女性〔8〕。當(dāng)發(fā)現(xiàn)已經(jīng)患有非小細(xì)胞肺癌的時(shí)候一定要戒煙，原發(fā)病灶位置與轉(zhuǎn)移情況都會(huì)影響非小細(xì)胞肺癌的癥狀。非小細(xì)胞肺癌是源于支氣管腺體、支氣管黏膜、肺泡上皮的一類肺惡性腫瘤，按照組織病理學(xué)可以將癌分為多種亞型，比如：腺癌、腺鱗癌、鱗狀細(xì)胞癌、肉瘤樣癌等〔9〕。非小細(xì)胞肺癌與基因長(zhǎng)期、環(huán)境因素的長(zhǎng)期相互作用有關(guān)，環(huán)境抑素指的是自身因素、營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)等。非小細(xì)胞肺癌會(huì)出現(xiàn)遠(yuǎn)外轉(zhuǎn)移的癥狀，比如會(huì)出現(xiàn)肝臟轉(zhuǎn)移、腎上腺、中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)移、骨骼轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移〔10〕。

IGRT是一種利用放射線有效的治療腫瘤的局部治療方法，放射治療的療效取決于放射敏感性，不同的器官及腫瘤的位置在照射的位置出現(xiàn)變化的時(shí)候會(huì)出現(xiàn)不同的反應(yīng)，可以按照不同種類的腫瘤分類：比如消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、皮膚及軟組織惡性腫瘤、骨惡性腫瘤、淋巴類腫瘤等〔11，12〕。但是一般晚期腫瘤患者是絕對(duì)不可以進(jìn)行放射治療的，另外一些肺癌合并大量腔積液、食管癌穿孔也不可以使用放射來治療，尤其是肺功能嚴(yán)重不全的患者不可以放射治療〔13〕?；熓且环N可以全身治療的手段，通過口服、體腔給藥等途徑都會(huì)隨著血液循環(huán)至全身器官和組織，化療包括根治性化療、姑息性化療、術(shù)前輔助化療、術(shù)后輔助化療、腔內(nèi)化療〔14〕。通過規(guī)范的化療有極大的可能性治愈惡性腫瘤，敏感或者相對(duì)性敏感的惡性腫瘤是在術(shù)前或者術(shù)后進(jìn)行化療的，但是化療是有一定性的副作用的，比如會(huì)出現(xiàn)消化系統(tǒng)的反應(yīng)，嘔吐、惡心、便秘、腹瀉等，其中惡心嘔吐是最常見的，還會(huì)出現(xiàn)骨髓移植、脫發(fā)、肝腎功能損害等〔15〕。但是如果非小細(xì)胞肺癌患者的體質(zhì)太差或者年齡太大不建議采用化療，還有一些嚴(yán)重器官受損、早期癌癥、對(duì)化學(xué)藥物不敏感或者已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性的患者也不建議采用化療〔16〕。

HAb18G、MMP-9、CYERA21-1、CA125、CEA都會(huì)在非小細(xì)胞肺癌中出現(xiàn)異常表達(dá)的水平變化，都可以成為非小細(xì)胞肺癌新的腫瘤標(biāo)志物，都可以作為非小細(xì)胞肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔17〕。HAb18G在非小細(xì)胞肺癌中出現(xiàn)升高表達(dá)，與非小細(xì)胞肺癌病理、轉(zhuǎn)移、預(yù)后都有一定的相關(guān)性?？梢杂米鞣切〖?xì)胞肺癌中的參考指標(biāo)，表達(dá)越高越說明惡化程度越高，非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后感越差，可以為臨床提供一定的參考價(jià)值。MMP-9屬于MMPs家族，可以重塑或者降解細(xì)胞外基質(zhì)動(dòng)態(tài)的平衡〔18〕。MMP-9可以分解肺內(nèi)及呼吸道的結(jié)構(gòu)復(fù)合物，還可以參與肺和呼吸道的重建〔19〕。CYERA21-1可以作為一種新的肺癌腫瘤標(biāo)志物，對(duì)非小細(xì)胞肺癌有著較高的診斷價(jià)值，可以作為化療、放療早期有效的指標(biāo)。可以從血清、胃液、尿液等體液或者排泄物中檢出，對(duì)惡性腫瘤的病情檢測(cè)、療效評(píng)價(jià)有著極大的診斷價(jià)值〔20，21〕。本研究說明IGRT聯(lián)合TP可改善患者的預(yù)后情況，延長(zhǎng)患者的生命，有良好的治療效果。

綜上，IGRT聯(lián)合TP治療的效果可顯著改善非小細(xì)胞肺癌患者體內(nèi)的HAb18G、MMP-9水平，并改善臨床癥狀，對(duì)非小細(xì)胞肺癌有良好的療效。