OPN、EGFL7在乳腺癌患者癌組織中的表達(dá)及臨床意義

趙帥華，楊敬，董衛(wèi)紅

（濮陽市安陽地區(qū)醫(yī)院 病理科，河南 安陽 455000）

乳腺癌主要指發(fā)生于乳腺上皮組織的惡性腫瘤，發(fā)病早期臨床治愈率較高，而晚期可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，致使全身多器官病變，病死率高，預(yù)后較差。文獻(xiàn)［1］報(bào)道，病灶分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分期等臨床病理特征與乳腺癌患者預(yù)后密切相關(guān)。骨橋蛋白（osteopontin,OPN）主要存在于細(xì)胞外基質(zhì)，是一種磷酸化糖蛋白，與多種惡性腫瘤生長(zhǎng)存在密切關(guān)系［2］。表皮生長(zhǎng)因子樣結(jié)構(gòu)域-7（epithelial growth factor-like domain 7,EGFL7）是一種表皮生長(zhǎng)因子，可調(diào)控血管的生成、發(fā)育及內(nèi)皮細(xì)胞遷移［3-4］。提示OPN、EGFL7 與乳腺癌患者臨床病理特征可能存在聯(lián)系。鑒于此，本研究旨在分析OPN、EGFL7 在乳腺癌患者癌組織中的表達(dá)及臨床意義，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

本研究已通過濮陽市安陽地區(qū)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審批。前瞻性選取2019 年1 月至2020 年12 月期間于濮陽市安陽地區(qū)醫(yī)院接受診療的82 例乳腺癌患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：①觀察組符合乳腺癌相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］；②近3 個(gè)月無嚴(yán)重外傷史、手術(shù)治療史；③簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①接受放射或化學(xué)治療；②合并認(rèn)知障礙或精神疾??；③合并其他惡性腫瘤。入選者年齡39～68 歲，平均（52.63±6.15）歲；體質(zhì)量指數(shù)19～26 kg/m2，平均（22.42±1.02）kg/m2；腫瘤直徑1.2～5.4 mm，平均（2.89±0.63）mm。

1.2 方法

1.2.1 乳腺癌組織OPN、EGFL7 檢測(cè) 采集所有入選者癌組織標(biāo)本，固定于10%甲醛溶液，常規(guī)脫水、石蠟包埋，連續(xù)切片，于80℃下烤片2 h備用，常規(guī)脫蠟、乙醇處理；使用磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，5 min/次，于95℃下采用乙二胺四乙酸抗原修復(fù)15 min，暴露抗原，滴加3%H2O2于37℃下孵育10 min，滴加正常山羊血清封閉15 min，加入一抗（兔抗人多克隆抗體，北京中杉金橋生物技術(shù)）150 mL，于4℃下孵育過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，3 min/次；添加二抗（羊抗鼠抗體，美國OriGene 公司），室溫下孵育15 min，磷酸鹽緩沖液沖洗3 次，3 min/次；添加免疫組織化學(xué)試劑（北京博奧森生物技術(shù)），磷酸鹽緩沖液沖洗3次，3 min/次，二氨基聯(lián)苯胺顯色10 min，蘇木精復(fù)染，用已知陽性切片作為對(duì)照。OPN、EGFL7陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕褐色、棕黃色、淺黃色，隨機(jī)選擇5 個(gè)高倍鏡視野，每個(gè)視野腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)200 個(gè)，共1 000個(gè)，依據(jù)視野中陽性細(xì)胞數(shù)占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比對(duì)其性質(zhì)進(jìn)行判斷，陽性：染色細(xì)胞數(shù)≥10%，陰性：染色細(xì)胞數(shù)＜10%。

1.2.2 乳腺癌臨床病理特征評(píng)估 結(jié)合影像學(xué)檢查、癌組織活檢結(jié)果評(píng)估乳腺癌患者臨床病理特征，主要包括TNM 分期（tumor node metastasis classification,TNM）（Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（有、無）、腫瘤直徑（≥2 cm、＜2 cm）、分化程度（低分化、中/高分化）等。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 24.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用百分率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)。分析乳腺癌癌組織中OPN、EGFL7 表達(dá)評(píng)估TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)價(jià)值，曲線下面積（AUC）評(píng)價(jià)：AUC≤0.50，無診斷價(jià)值；0.50＜AUC≤0.70，診斷價(jià)值較低；0.70＜AUC≤0.9，診斷價(jià)值中等；AUC＞0.9，診斷價(jià)值較高。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達(dá)率比較

TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達(dá)率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中OPN 陽性表達(dá)率比較 [n(%)]

2.2 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中EGFL7陽性表達(dá)率比較

TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者癌組織中EGFL7 陽性表達(dá)率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同病理特征乳腺癌患者癌組織中EGFL7 陽性表達(dá)率比較 [n(%)]

2.3 癌組織中OPN、EGFL7 表達(dá)評(píng)估乳腺癌患者TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移價(jià)值分析

將OPN、EGFL7 表達(dá)情況作為自變量，將乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況作為因變量（1=Ⅲ～Ⅳ期間、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，0=Ⅰ～Ⅲ期間，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移），繪制ROC 曲線（見圖1、圖2）結(jié)果顯示，OPN、EGFL7 表達(dá)評(píng)估乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC 均＞0.7，具有一定評(píng)估價(jià)值。見表3。

表3 癌組織中OPN、EGFL7 表達(dá)評(píng)估乳腺癌患者TNM 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移價(jià)值分析

圖1 OPN、EGFL7 對(duì)乳腺癌患者TNM 分期評(píng)估的ROC 曲線圖

圖2 OPN、EGFL7 對(duì)乳腺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移評(píng)估的ROC 曲線圖

3 討論

目前臨床針對(duì)乳腺癌主要以手術(shù)治療為主，化療為輔的方式，但不同病理特征的乳腺癌患者治療方案存在差異性［6-7］。因此早期評(píng)估乳腺癌患者臨床病理特征，在治療方案的選擇、預(yù)后評(píng)估等方面有重要意義。

有研究指出，腫瘤血管形成在乳腺癌發(fā)生、增長(zhǎng)、浸潤(rùn)、侵襲過程中發(fā)揮重要作用，一方面腫瘤新生血管細(xì)胞間缺少平滑肌的連接，致使血管基膜不完整、血管壁較薄，癌細(xì)胞易通過新生血管基底膜向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；另一方面腫瘤血管可提供癌細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖所必需的氧及其他營養(yǎng)物質(zhì)［8-9］。OPN 廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，介導(dǎo)骨基質(zhì)與骨組織細(xì)胞的連接，在骨基質(zhì)重吸收和礦化過程中起到重要作用［10］。EGFL7 屬分泌蛋白，在血管內(nèi)皮中呈特異性表達(dá)，可調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附作用［11］。本研究結(jié)果顯示，TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者癌組織中OPN、EGFL7 陽性表達(dá)率高于TNM 分期為Ⅰ～Ⅱ期、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移乳腺癌患者，提示OPN、EGFL7乳腺癌TNM 分期Ⅲ～Ⅳ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者癌組織中呈高表達(dá)。分析其原因，OPN 在血管再生、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞粘附、細(xì)胞免疫等方面具有多種生物功能，在特定的病理、生理環(huán)境下，OPN 可與CD44 蛋白及多種整合素受體相結(jié)合，加速腫瘤細(xì)胞生成與分裂，對(duì)腫瘤細(xì)胞的異常增殖產(chǎn)生誘導(dǎo)作用，其在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、促進(jìn)腫瘤血管形成、抑制腫瘤細(xì)胞凋亡等多個(gè)環(huán)節(jié)中起到重要作用［12-13］。EGFL7 可對(duì)細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases,ERK）信號(hào)通路產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用，將信號(hào)從表面受體傳導(dǎo)至細(xì)胞核，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移［14］。此外，EGFL7 還可調(diào)控β-連環(huán)蛋白信號(hào)通路，對(duì)乳腺癌細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程產(chǎn)生促進(jìn)作用，強(qiáng)化腫瘤細(xì)胞侵襲能力，加速疾病進(jìn)程［15］。繪制ROC 曲線發(fā)現(xiàn)OPN、EGFL7 表達(dá)評(píng)估乳腺癌患者TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的AUC 均＞0.7，具有一定評(píng)估價(jià)值。提示乳腺癌患者癌組織中OPN、EGFL7 表達(dá)與腫瘤病理特征相關(guān)。

綜上所述，OPN、EGFL7 在乳腺癌患者癌組織中陽性表達(dá)率較高，與乳腺癌TNM 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。