3540 例女性泌尿生殖道標(biāo)本支原體檢測(cè)及耐藥性分析

劉前，余玥

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川 瀘州 646000）

0 引言

支原體是一群不具有細(xì)胞壁，能在無(wú)生命培養(yǎng)基中生長(zhǎng)繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物[1]，并且具有高度多形性。與人類生殖道感染有關(guān)的是解脲脲原體（U.urealyticum）和人型支原體（M.hominis）。兩者均屬于機(jī)會(huì)致病微生物,并且廣泛定植于育齡期女性生殖道,可通過(guò)垂直傳播造成胎兒感染。解脲脲原體與人型支原體能引起男性急、慢性非淋病奈瑟菌尿道炎、前列腺炎、附睪炎，引起女性非淋病奈瑟菌尿道炎、陰道炎、盆腔炎及宮頸炎。還可引起不孕不育、早產(chǎn)、流產(chǎn)和新生兒感染[2-3]。近年來(lái)，解脲脲原體和人型支原體感染檢出率升高，對(duì)抗菌藥物耐藥率也不斷增加，已引起大家廣泛關(guān)注和重視。本研究對(duì)2021 年我院全年婦產(chǎn)科門診患者及住院患者生殖道標(biāo)本，支原體雙相培養(yǎng)結(jié)果及抗菌藥物耐藥性進(jìn)行回顧性分析，為臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集我院2021 年1 月至2021 年12 月婦產(chǎn)科門診患者及住院患者生殖道分泌物支原體雙相培養(yǎng)標(biāo)本共3540 例。

1.1.2 試劑采用眾愛(ài)生河北生物有限公司生產(chǎn)的解脲支原體和人型支原體選擇分離固體培養(yǎng)試劑盒以及培養(yǎng)、鑒定、藥敏試劑盒。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集外陰消毒后，先用窺陰器暴露陰道，用無(wú)菌棉簽擦除宮頸外分泌物，再用無(wú)菌陰道拭子取宮頸口1-1.5cm 處分泌物，取樣后盡快送檢。

1.2.2 固體培養(yǎng)選擇分離固體培養(yǎng)基放在室溫下預(yù)溫5-10min，將標(biāo)本接種在固體選擇培養(yǎng)基表面，并在每個(gè)組套內(nèi)加一片CO2發(fā)生片，蓋上密封，置36℃±1℃培養(yǎng)箱中，24-48 小時(shí)觀察結(jié)果。

1.2.3 液體培養(yǎng)試劑盒復(fù)溫至室溫，從未接種樣本的培養(yǎng)基中取100μL培養(yǎng)基液加入藥敏板陰性孔。將采集的標(biāo)本拭子插入培養(yǎng)基液體中，充分洗滌，在瓶壁上擠干拭子，各取100μL 已接種后的培養(yǎng)基液體加入到除陰性孔外各孔中。每孔加石蠟油1-2 滴，36℃±1℃培養(yǎng)24-48 小時(shí)觀察結(jié)果。

1.2.4 結(jié)果判讀固體培養(yǎng)：經(jīng)培養(yǎng)后，在顯微鏡下可見(jiàn)棕褐色海膽樣菌落，為解脲脲原體。油煎蛋樣菌落，為人型支原體。液體培養(yǎng)：(+)孔為陽(yáng)性，Uu 鑒定孔為陽(yáng)性(培養(yǎng)24 小時(shí)，培養(yǎng)基由黃變紅，清亮無(wú)混濁)，表示Uu 計(jì)數(shù)(ccu ≥104)有臨床意義。(+)孔為陽(yáng)性，Mh 鑒定孔為陽(yáng)性(培養(yǎng)48 小時(shí)，培養(yǎng)基由黃變紅，清亮無(wú)混濁)，表示Mh 計(jì)數(shù)(ccu ≥104)有臨床意義。藥敏試驗(yàn)：若高濃度孔陰性(-)，低濃度孔陰性(-)，表示對(duì)該藥物敏感(S)；若高濃度孔陰性(-)，低濃度孔陽(yáng)性(+)，表示對(duì)該藥物中度敏感(I)；若高濃度孔陽(yáng)性(+)，低濃度孔陽(yáng)性(+)，表示對(duì)該藥耐藥。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 20.0 軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病原體分布及分離率

2021 年1 月2021 年12 月，我院婦產(chǎn)科門診及住院患者共送檢測(cè)3540 份支原體雙相培養(yǎng)，檢測(cè)出泌尿道支原體1495 例。陽(yáng)性率為42.0%。其中檢測(cè)到解脲脲原體（Uu）1333 例，占89.5%（1333/1495），分離率為37.6%（1333/3540）。解脲脲原體和人型支原體混合感染115 例，占7.7%（115/1495），分離率為3.2%（115/3540）。人型支原體47 例，占3.1%（47/1495），分離率為1.3%（47/3540）。1495例支原體感染類型分布見(jiàn)表1。

表1 1495 例支原體感染類型分布(n,%)

2.2 支原體感染耐藥性分析

從支原體藥敏結(jié)果分析可以看出，單一解脲脲原體（Uu）感染, 對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素、克拉霉素敏感性高，分別為98.1%、97.2%、95.1%。對(duì)環(huán)丙沙星、壯觀霉素、諾氟沙星耐藥率高，分別為92.6%、90.5%、90.1%。單一人型支原體（Mh）感染，對(duì)強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素敏感性高，分別為97.9%、97.9%、87.2%。對(duì)諾氟沙星不敏感，耐藥率為100%，對(duì)環(huán)丙沙星、氧氟沙星耐藥率為95.7%，對(duì)羅紅霉素亦有很高耐藥率，為91.5%。兩種支原體（Uu+Mh）混合感染，對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素敏感率高，分別為98.3%、96.5%。同樣對(duì)諾氟沙星不敏感，耐藥率為100%，對(duì)其他喹諾酮類環(huán)丙沙星、氧氟沙星耐藥率分別為98.3%、97.4%。對(duì)壯觀霉素、羅紅霉素、克拉霉素耐藥率為92.2%、91.3%、90.4%。1495 例支原體感染對(duì)常見(jiàn)12 種抗生素敏感性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 1495 例支原體感染藥物敏感性試驗(yàn)[n(%)]

3 討論

解脲脲原體和人型支原體是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，是引起人泌尿生殖系統(tǒng)感染重要病原菌之一。主要通過(guò)性接觸傳播和母嬰傳播，通常引起非淋病菌性尿道炎、男性前列腺炎或附睪炎以及女性陰道炎、盆腔炎、卵管炎、宮頸炎和腎盂腎炎等，亦可引起不孕不育、胎兒流產(chǎn)等[4]。解脲脲原體和人型支原體也是一類機(jī)會(huì)病原體，當(dāng)免疫力正常時(shí)，可正常寄居于人體腔道的黏膜上和女性生殖道，而不引起任何癥狀[5]，人感染后可成無(wú)癥狀攜帶者或臨床癥狀不明顯。當(dāng)機(jī)體免疫力低下或粘膜受損時(shí)可發(fā)展為致病菌[6]。所以支原體感染容易被忽略，造成病原菌的隱匿傳播。因此，對(duì)有癥狀者或癥狀不明顯患者應(yīng)考慮生殖道支原體檢測(cè)，以防漏診。當(dāng)部分患者支原體培養(yǎng)陽(yáng)性，但并無(wú)明顯感染癥狀，可能為正常人群攜帶者[7]。因此，臨床醫(yī)生應(yīng)根據(jù)患者臨床表現(xiàn)進(jìn)行判斷，并合理運(yùn)用抗生素干預(yù)，避免過(guò)度治療。近年來(lái)，支原體感染率逐年升高，加上抗生素不合理運(yùn)用，治療不規(guī)范等因素,支原體耐藥情況日益嚴(yán)重,在臨床上受到越來(lái)越多的關(guān)注。

本研究通過(guò)回顧性分析我院2020 年1 月到2020年12 月全年婦產(chǎn)科門診及住院患者解脲脲原體和人型支原體檢測(cè)。3540 例標(biāo)本，支原體檢出率為42.1%。其中解脲脲原體(Uu)在支原體中檢出率為89.5%，解脲脲原體和人型支原體混合感染在支原體中檢出率為7.4%，人型支原體在支原體中檢出率為3.1%。與宋秀軍[8]等人報(bào)道一致。解脲脲原體檢出率高于解脲脲原體和人型支原體混合感染，高于人型支原體。解脲脲原體檢出率較高,可能原因，是解脲脲原體能夠分解尿素而產(chǎn)氨，其降解產(chǎn)物可以提高陰道內(nèi)環(huán)境的PH 值，促使自身和其他病原菌的生長(zhǎng)[9]。同時(shí)，大部分患者感染后，癥狀不明顯或無(wú)癥狀。因此，解脲脲原體感染易反復(fù)，給治療帶來(lái)一定困難。

從數(shù)據(jù)分析可看出，單一解脲脲原體，對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素、克拉霉素敏感性高（＞97%）。人型支原體，對(duì)強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素敏感性高（＞97%）。解脲脲原體和人型支原體混合感染對(duì)美滿霉素、強(qiáng)力霉素敏感率高（＞96%）。由此可見(jiàn)，各類型支原體感染均對(duì)美滿霉素，強(qiáng)力霉素敏感率高。且各型之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所以強(qiáng)力霉素和美滿霉素可作為臨床支原體感染藥物經(jīng)驗(yàn)性治療首選藥物[10]。各類型支原體感染對(duì)喹諾酮類耐藥率均高（＞90%），并且人型支原體和混合感染者對(duì)諾氟沙星均不敏感，耐藥率為100%，臨床應(yīng)避免使用喹諾酮類藥物[11]。支原體對(duì)喹諾酮類藥物耐藥的主要機(jī)制是ParC 氨基酸序列改變[12]。此外，大環(huán)內(nèi)酯類藥物克拉霉素對(duì)解脲脲原體敏感性高，亦可選該藥物治療解脲脲原體引起的感染。

綜上所述，2021 年全年我院婦產(chǎn)科門診和住院患者生殖道支原體檢測(cè)，以單一解脲脲原體（Uu）感染為主，混合感染（Uu+Mh）次之，單一人型支原體（Mh）感染較少。從藥敏試驗(yàn)結(jié)果分析可看出，各類型支原體均對(duì)四環(huán)類藥物美滿霉素、強(qiáng)力霉素敏感率高，可作為臨床經(jīng)驗(yàn)性用藥首選。喹諾酮類藥物敏感率低，臨床應(yīng)避免使用該類藥物。為了避免耐藥菌的產(chǎn)生，臨床應(yīng)根據(jù)支原體培養(yǎng)結(jié)果及藥敏試驗(yàn)，并結(jié)合患者臨床癥狀，正確選擇抗生素，合理規(guī)范用藥，避免過(guò)度治療。