• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于高通量分析泰山白首烏根際土壤細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)

    2022-07-21 06:51:26徐凌川
    廣東農(nóng)業(yè)科學(xué) 2022年5期
    關(guān)鍵詞:根際泰山單胞菌

    李 潔,王 飛,徐凌川

    (1.山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東御華景宸生態(tài)農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司,山東 費(fèi)縣 273418)

    【研究意義】泰山白首烏(Cynanchum bungeiDecne)是中藥材白首烏的正品來源植物,屬于蘿藦科鵝絨藤屬植物[1],是中國特有物種,因其善于增補(bǔ)人體精血,增強(qiáng)免疫力而延緩衰老,素有白人參的美稱[2]。白首烏為多年生植物,生長周期長,野生品種的開花率和結(jié)果率均較低,人工栽培技術(shù)尚不足,種植白首烏較困難,為解決這一問題,目前關(guān)于白首烏的仿野生種植正在興起[3]。植物的生長與土壤和環(huán)境的理化因素有關(guān),也與其根系微環(huán)境有很大關(guān)系,尤其是根際土壤微生物,對(duì)植物的生長發(fā)育起到重要作用[4]。根際是指能受植物根系影響的范圍,一般離根軸表面數(shù)毫米,是土壤-根系-微生物相互作用的微區(qū)域,也是不同植物種類、土壤和環(huán)境條件形成的特定的微生態(tài)系統(tǒng)[5]。根際微生物緊密存于根際土壤內(nèi),是根際土的重要組成部分[6],微生物群落的多樣性對(duì)植物的生長有重要作用,植物生長過程中產(chǎn)生的分泌物也會(huì)影響微生物的種類、數(shù)量和分布,兩者之間起到協(xié)同互助作用,共同促進(jìn)這個(gè)微生態(tài)系統(tǒng)的循環(huán)[7]。【前人研究進(jìn)展】研究發(fā)現(xiàn),大部分根際微生物能提高土壤再利用率和促進(jìn)植物生長發(fā)育,對(duì)植物可能產(chǎn)生的病蟲害有很好的防治效果,能增強(qiáng)植物對(duì)外界環(huán)境的抗逆性和抗病性[8-9]。張艷琪等[10]從泰山白首烏的根際土壤中培養(yǎng)出具有抗菌活性的7 株菌株,這也為研究開發(fā)新型抗菌藥物提供了原材料的理論指導(dǎo)。然而,關(guān)于泰山白首烏根際土壤微生物多樣性的研究,目前尚未有報(bào)道,因此,探究微生物群落的多樣性,對(duì)泰山白首烏的人工栽培以及仿野生種植都有一定的理論指導(dǎo)意義。

    【本研究切入點(diǎn)】隨著近年來分子生物技術(shù)的發(fā)展[11],高通量測(cè)序技術(shù)被越來越多的應(yīng)用于微生物多樣性分析,這種方法具有準(zhǔn)確率高、測(cè)序時(shí)間快、價(jià)格低等優(yōu)勢(shì),已經(jīng)成為一種新型的實(shí)驗(yàn)方式[12]?;诖?,本研究通過Illumina MiSeq 高通量測(cè)序技術(shù),以不同產(chǎn)地的泰山白首烏根際土壤為研究對(duì)象,對(duì)微生物群落的組成結(jié)構(gòu)和分布規(guī)律進(jìn)行研究分析。【擬解決關(guān)鍵問題】探討泰山白首烏的生長與微生物菌群結(jié)構(gòu)變化之間的相互關(guān)系,為創(chuàng)造更好的仿野生種植條件、培育品質(zhì)優(yōu)良的泰山白首烏提供科學(xué)且有效的理論指導(dǎo)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    1.1.1 土壤樣地條件 供試6 份泰山白首烏根際土壤采自3 個(gè)產(chǎn)地:(1)濟(jì)南市萊蕪區(qū)蓮花山,海拔999 m,年平均氣溫13 ℃,年降水量1 290 mm,植被為灌 木,土壤為砂壤土;(2)濟(jì)南市歷 下區(qū)大壩 頭,海拔285 m,年平均氣 溫13.8 ℃,年降水量685 mm,植被為灌木叢,土壤為砂壤土+巖石土;(3)濟(jì)南市長清區(qū)五峰山,海拔395 m,年平均氣溫14.7 ℃,年降水量671 mm,植被為灌木叢,土壤為砂壤土+巖石土。

    1.1.2 土壤樣品采集 土樣于2021 年8 月11—13 日采集,采集地的泰山白首烏均為野生品種,且由山東中醫(yī)藥大學(xué)徐凌川教授鑒定為正品原植物。選取生長旺盛的植株,用鐵鏟挖至植物根部,用滅菌的刷子和不銹鋼勺收集附著于根上0~4 mm范圍內(nèi)的土,每個(gè)樣地采集地下深度10、20 cm的根際土,分別編號(hào)為LW10、LW20、LX10、LX20、CQ10、CQ20,去除大塊顆粒和雜質(zhì)后密封于無菌袋中,冰袋保存帶回實(shí)驗(yàn)室,-20 ℃冰箱保存,用于后續(xù)試驗(yàn)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 根際土壤微生物DNA 提取 提取DNA前,對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理:稱取300 mg 混勻后的樣品,放入滅菌的2 mL 離心管中,加入1×PBS 溶液,震蕩混勻,10 000 r/min 室溫離心3 min,棄上層液體;將樣品管放入55 ℃金屬浴10 min,使殘留液體完全揮發(fā),保證后續(xù)試驗(yàn)操作。使用OMEGA 試劑盒(E.Z.N.A? Mag-Bind Soil DNA Kit)提取根際土壤微生物的總DNA,操作流程按照說明書進(jìn)行,對(duì)提取的DNA 進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),并用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其濃度和純度,合格的DNA 置于-20 ℃冰箱保存,備用。

    1.2.2 PCR 擴(kuò)增及高通量測(cè)序 以提取的總DNA 為模板,對(duì)基因組中的V3~V4 區(qū)域進(jìn)行擴(kuò)增,通過Qubit3.0 DNA 檢測(cè)盒對(duì)基因組DNA進(jìn)行準(zhǔn)確定量,明確PCR 反應(yīng)體系中應(yīng)加入的DNA 量。PCR 反應(yīng)所采用的引物為細(xì)菌V3~V4通用引物(341F:CCTACGGGNGGCWGCAG;805R:GACTACHVGGGTATCTAATCC),反應(yīng)體系按照總體積30 μL 的比例配制,PCR 反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃,3 min →→(94 ℃,30 s → 45 ℃,20 s→ 65 ℃,30 s)5 →→(94 ℃,20 s → 55 ℃,20 s→ 72 ℃,30 s)20 →→ 72 ℃,5 min →→10 ℃,∞。PCR 反應(yīng)體系為:2xTrans Taq Fidelity(HiFi)PCRSuperMix 15 μL,Primer(10 μmol/L)各1 μL,Genomic DNA 1-3 μL,補(bǔ)充雙蒸水至30 μL。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè),合格產(chǎn)物用天根膠回收試劑盒進(jìn)行回收純化,回收物送往上海生工生物股份有限公司,通過Illumina MiSeq 測(cè)序平臺(tái)進(jìn)行高通量測(cè)序[13]。

    1.2.3 生物信息學(xué)統(tǒng)計(jì)分析 將高通量測(cè)序結(jié)果得到的序列根據(jù)overlap 關(guān)系進(jìn)行拼接,區(qū)分樣本后對(duì)序列質(zhì)量進(jìn)行質(zhì)控和過濾,然后進(jìn)行OTU(Operational Taxonomic Units)聚類(ASV 去噪)分析和物種分類學(xué)分析[14]?;趯?duì)97%相似水平下的OTU 聚類和分類學(xué)信息,對(duì)OTU 進(jìn)行多樣性指數(shù)分析并對(duì)群落在各個(gè)分類水平上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,可對(duì)多個(gè)群落的結(jié)構(gòu)和組成進(jìn)行Alpha多樣性分析、分組檢驗(yàn)分析、差異顯著性檢驗(yàn)等一系列統(tǒng)計(jì)學(xué)和可視化分析[15]。最終將優(yōu)化的序列根據(jù)數(shù)據(jù)庫中的參考序列在門、綱、科、屬的水平上進(jìn)行鑒定,比較分析其群落組成、豐度以及多樣性。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌測(cè)序分析和OTU分布

    對(duì)6 個(gè)樣品的泰山白首烏根際土壤細(xì)菌微生物進(jìn)行測(cè)序分析,結(jié)果(表1)顯示,經(jīng)檢測(cè)合格的樣品LW10、LW20、LX10、LX20、CQ10、CQ20 最終有效序列片段分別為62 660、63 115、61 948、49 683、60 920、56 095 條,對(duì)所有的序列以97%的一致性進(jìn)行OTUs 聚類分析,共得到5 404 個(gè)OTU。由軟件處理得到的Veen 圖(圖1)可知,6 個(gè)樣品之間共同擁有134 個(gè)OTU,不同產(chǎn)地地下10 cm 位置的樣品之間共有438 個(gè)OTU,不同產(chǎn)地地下20 cm 位置的樣品之間有152個(gè)OTU,每個(gè)樣品含有的OTU 數(shù)不盡相同,其中樣品CQ10 中含有的OTU 最多、為1 032 個(gè),樣品LW20 中含有的OTU 最少、為494 個(gè)。

    表1 泰山白首烏根際土壤檢測(cè)序列結(jié)果Table 1 Test sequence results of rhizosphere soil of Cynanchum bungei Decne

    圖1 泰山白首烏根際土壤樣品間Veen 圖Fig.1 Veen diagram of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    2.2 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌豐富度和指數(shù)多樣性

    在高通量測(cè)序技術(shù)研究微生物多樣性中,通過單樣品的多樣性分析 (Alpha 多樣性) 可以反映微生物群落的豐度和多樣性,從表2 可以看出,樣品CQ10 的Chao 和Ace 指數(shù)最大,表明該樣品中微生物豐富度最高;樣品LX10 的Shannon 指數(shù)最大且Simpson 指數(shù)最小,表明該樣品中微生物多樣性最高;樣品LX10 的Shannoneven 指數(shù)最大,表明該樣品中微生物在群落分布的均勻度最高;6 個(gè)樣品的Coverage 指數(shù)均為1,表明本次測(cè)序結(jié)果基本能代表泰山白首烏樣品中根際細(xì)菌微生物存在的真實(shí)情況。從測(cè)序數(shù)據(jù)得到的稀釋性曲線(圖2)可以看出,隨著樣品測(cè)序數(shù)量的增多,Alpha 多樣性指數(shù)值變化越來越緩慢,當(dāng)達(dá)到足夠的數(shù)量之后,曲線趨向于平緩,因此本次測(cè)序的深度基本能夠覆蓋樣品根際土壤中的全部細(xì)菌微生物。Rank-abundance 曲線主要是用來解釋樣品多樣性中的多樣性和均勻度,曲線越寬物種多樣性越高,曲線越平坦物種組成越均勻,從測(cè)序結(jié)果(圖3)可以看出,樣品LX10 的多樣性和均勻度略高于其他樣品。

    圖2 泰山白首烏根際土壤樣品的稀釋曲線Fig.2 Dilution curve of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    圖3 泰山白首烏根際土壤樣品的Rank-abundance 曲線Fig.3 Rank-abundance curve of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    表2 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果Table 2 Statistical results of rhizosphere soil bacteria diversity indexes of Cynanchum bungei Decne

    2.3 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌相關(guān)性和主成分分析

    生物學(xué)重復(fù)是生物實(shí)驗(yàn)中常見現(xiàn)象,因此選擇樣本間相關(guān)性指標(biāo)來檢驗(yàn)測(cè)序數(shù)據(jù)的可靠性和合理性,相關(guān)系數(shù)越接近1,顏色越黃表明樣本間的相似度越高,顏色越灰表示樣本間相關(guān)性指數(shù)越低。由樣本相關(guān)性熱圖(圖4)顯示,相同地點(diǎn)不同深度的樣品間相關(guān)性強(qiáng),不同地點(diǎn)樣品間相關(guān)性弱,樣品LX 與CQ 的相關(guān)性強(qiáng)于樣品LW 與LX 和CQ 的相關(guān)性。由Bray-Curtis 距離算法得到的樣本間距離熱圖(圖5)可以代表樣本間物種差異程度,顏色塊代表距離值,顏色越灰表示物種間距離越近,可以看出相同地點(diǎn)不同深度的物種間距離小、不同地點(diǎn)物種間距離大,這與樣本相關(guān)性熱圖相符合。

    圖4 泰山白首烏根際土壤樣品相關(guān)性熱圖Fig.4 Correlation heat map of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    圖5 泰山白首烏根際土壤樣品距離熱圖Fig.5 Distance heat map of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    PCA主成分分析可以有效的找出數(shù)據(jù)中最“主要”的元素和結(jié)構(gòu),充分反映不同樣本群落組成的差異和距離,不同顏色或形狀的點(diǎn)代表不同樣本,兩點(diǎn)越接近表明兩樣本物種組成越相似。從圖6 可以看出,不同產(chǎn)地對(duì)泰山白首烏根際土壤細(xì)菌微生物的多樣性影響強(qiáng)于地下根莖深度不同的影響,驗(yàn)證了樣本相關(guān)性和距離熱圖表明的不同產(chǎn)地間根際土壤細(xì)菌群落組成差異明顯。

    圖6 泰山白首烏根際土壤樣品間PCA 圖Fig.6 PCA diagram of rhizosphere soil samples of Cynanchum bungei Decne

    2.4 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌組成及分布規(guī)律

    從表3 可以看出,6 個(gè)樣品的泰山白首烏根際土壤細(xì)菌微生物的組成和結(jié)構(gòu)存在很大差異。不同產(chǎn)地的泰山白首烏樣品根際土壤細(xì)菌分析結(jié)構(gòu)顯示,樣品LW10、LX10、CQ10 分別有21、20、20 門,54、53、56 綱,75、84、85 目,129、135、136 科,206、218、216 屬,表明產(chǎn)地因素在不同分類水平上影響泰山白首烏根際土壤微生物的多樣性和豐富度;不同地下根莖深度的泰山白首烏樣品根際土壤細(xì)菌分析結(jié)構(gòu)顯示,樣品LW10、LW20 分別有21、18 門,54、36 綱,75、58 目,129、100 科,206、134 屬,表明地下根際深度因素在不同分類水平上影響泰山白首烏根際土壤微生物的多樣性和豐富度。

    表3 泰山白首烏樣品在不同分類水平上的數(shù)目Table 3 Number of Cynanchum bungei Decne samples at different classification levels

    由圖7 可知,3 個(gè)產(chǎn)地6 份樣本中共擁17 個(gè)菌門,但只有7 個(gè)菌門相對(duì)豐度均大于1%,包括酸桿菌門Acidobacteria、放線菌門Actinobacteria、擬桿菌門Bacteroidetes、芽單胞菌門Gemmatimonadetes、浮霉菌門Planctomycetes、變形菌門Proteobacteria、疣微菌門Verrucomicrobia,占總土壤細(xì)菌序列的90%以上。6 份樣品共擁的優(yōu)勢(shì)菌門為酸桿菌門和變形菌門,其中樣品LW20 的優(yōu)勢(shì)菌門為酸桿菌門,相對(duì)豐度為24.76%;樣品LW10、LX10、LX20、CQ10、CQ20 的優(yōu)勢(shì)菌門均為變形菌門,相對(duì)豐度分別為57.89%、46.00%、38.22%、27.29%、31.05%。另外,樣品中均有未知菌門占一定的比例。優(yōu)勢(shì)物種豐度熱圖(圖8)也可以通過顏色直觀地表達(dá)出物種的豐富度,顏色越紅,豐富度越大,結(jié)果與相對(duì)豐度圖符合,表明測(cè)序結(jié)果真實(shí)可靠。

    圖7 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌種類相對(duì)豐度Fig.7 Relative abundance of bacterial species in rhizosphere soil of Cynanchum bungei Decne

    圖8 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌豐度熱圖Fig.8 Heatmap of bacterial abundance in rhizosphere soil of Cynanchum bungei Decne

    通過比較不同分類水平上根際土壤細(xì)菌組成(圖9)發(fā)現(xiàn),在綱分類水平上,優(yōu)勢(shì)菌綱為放線菌綱Actinobacteria、變形菌綱Alphaproteobacteria、低溫丙型變性綱Gammaproteobacteria、芽單胞菌 綱Gemmatimonadetes、斯巴桿菌 綱Spartobacteria、Acidobacteria-Gp4、Betaproteobacteria,其中樣品LW10、LX10、LX20、CQ10 的優(yōu)勢(shì)綱均為變形菌綱,相對(duì)豐度分別為28.48%、33.11%、24.26%、19.07;樣品LW20 的優(yōu)勢(shì)綱為斯巴桿菌綱,相對(duì)豐度為21.38%;樣品CQ20 的優(yōu)勢(shì)綱為Acidobacteria-Gp4,相對(duì)豐度為13.54%。在目分類水平上,優(yōu)勢(shì)菌目為微酸菌目Acidimicrobiales、放線菌目Actinomycetales、假單胞菌目Pseudomonadales、根瘤菌目Rhizobiales、鞘脂單胞菌目Sphingomonadales、Acidobacteria-Gp4、norank-Spartobacteria,其中樣品LW10 的優(yōu)勢(shì)目為假單胞菌目,相對(duì)豐度為22.39%;樣品LW20 的優(yōu)勢(shì)目為norank-Spartobacteria,相對(duì)豐度為21.38%;樣品LX10 的優(yōu)勢(shì)目為放線菌目,相對(duì)豐度為12.72%;樣品LX20、CQ10 的優(yōu)勢(shì)目均為鞘脂單胞菌目,相對(duì)豐度分別為8.02%和10.23%;樣品CQ20 的優(yōu)勢(shì)目為Acidobacteria-Gp4,相對(duì)豐度為13.54%。在科分類水平上,優(yōu)勢(shì)菌科為芽單胞菌科Gemmatimonadaceae、假單胞菌科Pseudomonadaceae、紅螺菌科Rhodospirillaceae、土壤紅桿菌科Solirubrobacteraceae、鞘脂單胞菌科Sphingomonadaceae、Acidobacteria-Gp4、Spartobacteria,其中樣品LW10 的優(yōu)勢(shì)科為假單胞菌科,相對(duì)豐度為22.35%;樣品LW20 的優(yōu)勢(shì)科為Spartobacteria,相對(duì)豐度為21.38%;樣品LX10 的優(yōu)勢(shì)科為土壤紅桿菌科,相對(duì)豐度為5.57%;樣品LX20、CQ10 的優(yōu)勢(shì)科為鞘脂單胞菌科,相對(duì)豐度分別為7.62%和9.78%;樣品CQ20 的優(yōu)勢(shì)科為Acidobacteria-Gp4,相對(duì)豐度為13.54%。在屬分類水平上,優(yōu)勢(shì)菌屬為芽孢單菌屬Gemmatimonas、Gp4、假單胞菌屬Pseudomonas、土壤紅桿菌屬Solirubrobacter、Spartobacteria-genera-incertae-sedis、鞘氨醇單胞菌屬Sphingomonas、Streptophyta,其中樣品LW10 的優(yōu)勢(shì)屬為假單胞菌屬,相對(duì)豐度為22.35%;樣品LW20 的優(yōu)勢(shì)屬為Spartobacteriagenera-incertae-sedis,相對(duì)豐度為21.37%;樣品LX10 的優(yōu)勢(shì)屬為土壤紅桿菌屬,相對(duì)豐度為5.57%;樣品LX20 的優(yōu)勢(shì)屬為鞘氨醇單胞菌屬,相對(duì)豐度為4.31%;樣品CQ10 的優(yōu)勢(shì)屬為Gp4,相對(duì)豐度為9.58%;樣品CQ20 的優(yōu)勢(shì)屬為Streptophyta,相對(duì)豐度為9.02%。

    圖9 泰山白首烏根際土壤細(xì)菌群落組成相對(duì)豐度Fig.9 Relative abundance of bacterial community composition in rhizosphere soil of Cynanchum bungei Decne

    3 討論

    土壤微生物多樣性、豐富度和均勻度等指標(biāo)能夠影響土壤質(zhì)量和植物生長狀況,高通量技術(shù)作為新型測(cè)序方式,能克服傳統(tǒng)測(cè)序技術(shù)的限制性,得到準(zhǔn)確、系統(tǒng)、全面的土壤微生物群落信息[16]。有關(guān)研究報(bào)道,土壤根際微生物群落的組成和分布在一定程度上與植物種類、生長年限、海拔高度、土層深度和產(chǎn)地等因素有關(guān)[17]。陳冉等[18]研究發(fā)現(xiàn),根際微生物群落多樣性與產(chǎn)地因素關(guān)系密切,主要受生態(tài)區(qū)的氣候和地理位置影響。官鑫等[19]研究發(fā)現(xiàn),不同土層深度與土壤微生物群落的結(jié)構(gòu)多樣性有密切聯(lián)系。本研究首次選擇不同產(chǎn)地、不同根莖深度的泰山白首烏根際土壤樣品,通過高通量16S 基因Illumina MiSeq 技術(shù)對(duì)土壤微生物細(xì)菌群落的組成和分布規(guī)律進(jìn)行比較分析。通過對(duì)V3~V4 區(qū)域測(cè)序后,共獲得354 421 條有效序列,平均每個(gè)樣本59 071 條序列,然后以97%的相似度聚類成5 404 個(gè)OTUs。通過與數(shù)據(jù)庫的比較,發(fā)現(xiàn)不同根莖深度的樣品微生物群落的組成在門水平上相似度較高,但地下10 cm 位置高于地下20 cm 位置處。泰山白首烏在生長成熟過程中,地下根莖會(huì)有兩部分橫向生長成膨大的團(tuán)塊狀,這是其作為中藥材具有最大藥用價(jià)值的組織部位[20],深度約為地下10 cm 和20 cm 右。土壤微生物優(yōu)勢(shì)菌群在不同地下深度具有一定的相似性,這可能與相同植株在生長過程中適應(yīng)微生物協(xié)同互助的關(guān)聯(lián)性有關(guān)[21],也有研究發(fā)現(xiàn)這類細(xì)菌微生物具有分布廣泛、適應(yīng)環(huán)境強(qiáng)的特點(diǎn),易于直接或間接地影響藥用植物的生長發(fā)育和品質(zhì)形成[22]。同時(shí),由于不同土層深度的土壤碳源和有機(jī)質(zhì)等理化因子存在一定差異,微生物對(duì)不同碳源的利用能力存在差異[23],因此使得不同深度的土壤微生物群落多樣性存在一定的差異。

    泰山白首烏產(chǎn)地的不同,導(dǎo)致其根際土壤樣品中各水平微生物相對(duì)豐度有所不同。不同地域的細(xì)菌優(yōu)勢(shì)群落存在差異性,這可能與植株的產(chǎn)地生境環(huán)境有關(guān)[24],土壤理化性質(zhì)的改變和生態(tài)因子的變化會(huì)導(dǎo)致部分微生物的生長繁殖受到限制,影響群落的豐富度、多樣性和均勻度,同時(shí)微生物菌種適應(yīng)環(huán)境變化的能力強(qiáng)弱也會(huì)影響群落多樣性[25]。在各類數(shù)據(jù)比對(duì)下發(fā)現(xiàn)產(chǎn)地因素對(duì)微生物群落多樣性差異的影響強(qiáng)于地下根莖深度對(duì)其差異的影響。

    綜合兩個(gè)變量研究泰山白首烏根際土壤,發(fā)現(xiàn)變形菌門、酸桿菌門和放線菌門是各種條件下均存在的優(yōu)勢(shì)菌門。變形菌門是所有樣品中豐富度最高的優(yōu)勢(shì)菌,可能是因?yàn)樗鼈兩L快、分布范圍廣且活動(dòng)自由,易于在各類植物生長環(huán)境中存在,且該門類有多種可以進(jìn)行固氮的細(xì)菌,這為植物的生長提供了有利條件[26]。酸桿菌門作為一類新型菌門,在生態(tài)系統(tǒng)中具有重要作用,尤其是土壤中[27]。放線菌門作為一類原核生物,大部分是腐生菌,普遍存在于土壤中,主要促進(jìn)土壤中動(dòng)植物遺體的腐爛和分解,并促進(jìn)氮元素在自然界中的循環(huán)[28]。

    植物與根際微生物之間存在著復(fù)雜的相互作用關(guān)系,根際具有極其豐富的微生物多樣性,這些微生物能夠影響植物的光合作用、呼吸代謝等生理過程,進(jìn)而對(duì)藥用植物的生長發(fā)育及根系功能產(chǎn)生影響,還可以通過改變藥用植物根系分泌物的組成,改善土壤理化性質(zhì)甚至緩解藥用植物連作障礙。因此研究不同因素下根際微生物與植物的生存關(guān)系,充分利用微生物的有效促生機(jī)制以及對(duì)植物生長過程的生物防治作用,對(duì)提高植物的產(chǎn)量和品質(zhì)具有重要的意義。充分利用新興科技手段[29],加強(qiáng)對(duì)藥用植物根際微生物多樣性的研究,深入挖掘根際土壤菌群與植物生長的關(guān)聯(lián)性,進(jìn)一步探究根際微生物與藥材藥效成分含量的相關(guān)性,為更好地創(chuàng)造仿野生種植條件、培育品質(zhì)優(yōu)良的泰山白首烏提供科學(xué)且有效的理論指導(dǎo)。

    4 結(jié)論

    本研究結(jié)果表明,6 個(gè)泰山白首烏根際土壤樣本共獲得354 421 條有效序列,平均每個(gè)樣本59 071 條序列,以97%的相似度聚類成5 404 個(gè)OTUs,分屬于22 門63 綱98 目170 科274 屬。通過樣品間比較,發(fā)現(xiàn)不同根莖深度的樣品微生物群落的組成在門水平上相似度較高,但地下10 cm 位置高于地下20 cm 位置處,這可能是因?yàn)椴煌翆由疃鹊耐寥捞荚春陀袡C(jī)質(zhì)等理化因子存在一定差異,深度越深,土壤成分越單一,供微生物生存的有利條件減少,且微生物對(duì)不同碳源的利用能力存在差異,造成群落多樣性和豐富度的差異。3 個(gè)產(chǎn)地中,濟(jì)南市長清區(qū)的樣本菌群多樣性最高,萊蕪區(qū)蓮花山的樣本菌群多樣性最低,這可能與當(dāng)?shù)氐耐寥篮蜌夂驐l件有關(guān),長清區(qū)的年降水量低,且土質(zhì)類型為砂壤土+巖石土,適合泰山白首烏耐寒耐堿的生活條件,因此植株生長發(fā)育狀況良好可以為微生物的生存提供充足且適宜的營養(yǎng)條件。而萊蕪區(qū)的年降水量多且土壤較濕潤,在一定程度上限制了泰山白首烏的生長,從而降低了根際微生物的存活。變形菌門、酸桿菌門和放線菌門是各種條件下均存在的優(yōu)勢(shì)菌門,這類菌群對(duì)研發(fā)泰山白首烏生長所需的生物菌肥有著重要作用。

    猜你喜歡
    根際泰山單胞菌
    根際微生物對(duì)植物與土壤交互調(diào)控的研究進(jìn)展
    泰山之行
    泰山日出
    《登泰山記》的打開方式
    泰山崩于前,你瞟一眼
    文苑(2018年21期)2018-11-09 01:22:42
    黃花蒿葉水提物對(duì)三七根際尖孢鐮刀菌生長的抑制作用
    槲皮素改善大鼠銅綠假單胞菌肺感染
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:21
    持續(xù)性根尖周炎中牙齦卟啉單胞菌的分離與鑒定
    促植物生長根際細(xì)菌HG28-5對(duì)黃瓜苗期生長及根際土壤微生態(tài)的影響
    中國蔬菜(2016年8期)2017-01-15 14:23:38
    銅綠假單胞菌金屬酶及整合酶的檢測(cè)
    一级毛片久久久久久久久女| 日韩人妻高清精品专区| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 国产成人aa在线观看| av视频在线观看入口| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 色哟哟·www| 97超视频在线观看视频| av免费在线看不卡| 香蕉av资源在线| 91av网一区二区| 久久精品人妻少妇| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 国产午夜福利久久久久久| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 99久久精品一区二区三区| 精品久久久久久久久久久久久| 中出人妻视频一区二区| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 免费人成在线观看视频色| h日本视频在线播放| 午夜影院日韩av| 九色成人免费人妻av| 天天躁日日操中文字幕| 99国产极品粉嫩在线观看| 国产精品,欧美在线| 日本免费a在线| 精品一区二区三区视频在线| 精品久久久久久久久久免费视频| 中文亚洲av片在线观看爽| 亚洲欧美日韩无卡精品| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩一区二区视频免费看| 波野结衣二区三区在线| 日本 av在线| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜福利视频1000在线观看| 内地一区二区视频在线| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产一区二区三区av在线 | 久久久久国内视频| 国产91av在线免费观看| 国产精品亚洲美女久久久| 免费观看在线日韩| 国产伦精品一区二区三区视频9| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一本一本综合久久| 精品国内亚洲2022精品成人| 身体一侧抽搐| 久久人人爽人人爽人人片va| 成人无遮挡网站| 亚洲精品456在线播放app| 看黄色毛片网站| 黄色日韩在线| 网址你懂的国产日韩在线| 春色校园在线视频观看| 日韩欧美精品免费久久| 91久久精品国产一区二区成人| 性色avwww在线观看| 最近手机中文字幕大全| aaaaa片日本免费| 精品日产1卡2卡| 又爽又黄a免费视频| 亚洲人成网站在线观看播放| 成人精品一区二区免费| a级一级毛片免费在线观看| 人人妻人人看人人澡| 18+在线观看网站| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 亚洲乱码一区二区免费版| 蜜臀久久99精品久久宅男| 嫩草影视91久久| 欧美又色又爽又黄视频| 嫩草影视91久久| 悠悠久久av| 一区二区三区高清视频在线| 身体一侧抽搐| 亚洲成人久久性| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产男靠女视频免费网站| 五月伊人婷婷丁香| 无遮挡黄片免费观看| 91av网一区二区| 日韩精品有码人妻一区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲熟妇熟女久久| 精品久久久久久久久av| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产黄a三级三级三级人| 波多野结衣高清作品| 亚洲综合色惰| 欧美bdsm另类| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 一a级毛片在线观看| 深夜a级毛片| 3wmmmm亚洲av在线观看| 深夜a级毛片| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 麻豆国产av国片精品| 高清毛片免费观看视频网站| av女优亚洲男人天堂| 成人亚洲精品av一区二区| 国内精品久久久久精免费| 国内精品一区二区在线观看| 久久鲁丝午夜福利片| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美bdsm另类| 丰满人妻一区二区三区视频av| 午夜a级毛片| 热99在线观看视频| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 男女之事视频高清在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 变态另类丝袜制服| av视频在线观看入口| 99riav亚洲国产免费| 久99久视频精品免费| 欧美中文日本在线观看视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 久久精品国产自在天天线| 最新中文字幕久久久久| 国产成人91sexporn| 亚洲无线在线观看| 国产日本99.免费观看| 99久久精品一区二区三区| 久久久久久九九精品二区国产| 十八禁网站免费在线| 国产片特级美女逼逼视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 免费观看在线日韩| 国产精品日韩av在线免费观看| 午夜爱爱视频在线播放| 久久久a久久爽久久v久久| 精品福利观看| 亚洲av.av天堂| 一边摸一边抽搐一进一小说| 久久久久久久久久久丰满| 免费人成在线观看视频色| 国产精品人妻久久久久久| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲色图av天堂| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 日韩一本色道免费dvd| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | a级一级毛片免费在线观看| 内射极品少妇av片p| av天堂中文字幕网| 亚洲美女黄片视频| 国产精品人妻久久久影院| 97在线视频观看| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲成人av在线免费| 两个人的视频大全免费| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品人妻久久久影院| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲精品456在线播放app| 国内精品一区二区在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 在线免费观看不下载黄p国产| 欧美高清成人免费视频www| 国产男靠女视频免费网站| 久久综合国产亚洲精品| 久久精品国产亚洲av天美| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久久久午夜电影| 女的被弄到高潮叫床怎么办| av.在线天堂| 国产av不卡久久| 日韩 亚洲 欧美在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 一本久久中文字幕| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产不卡一卡二| 午夜免费激情av| 黄色欧美视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 男人的好看免费观看在线视频| 99热精品在线国产| 欧美日韩在线观看h| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲国产精品合色在线| 亚洲精品色激情综合| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 日本一本二区三区精品| 国产精品福利在线免费观看| 99riav亚洲国产免费| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲,欧美,日韩| 久久久成人免费电影| 日本欧美国产在线视频| 欧美日本视频| av免费在线看不卡| 免费看av在线观看网站| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲欧美精品综合久久99| 一个人看的www免费观看视频| 精品乱码久久久久久99久播| 久久久久性生活片| 一级黄色大片毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 又爽又黄无遮挡网站| 国语自产精品视频在线第100页| 日日撸夜夜添| 亚洲一区高清亚洲精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 久久久精品94久久精品| 亚洲不卡免费看| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美一区二区亚洲| 国产精品一区二区免费欧美| 九九在线视频观看精品| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| or卡值多少钱| 最近的中文字幕免费完整| 国产在视频线在精品| 欧美人与善性xxx| 亚洲成人久久性| 一进一出好大好爽视频| а√天堂www在线а√下载| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产免费男女视频| 亚洲自拍偷在线| 国产精品日韩av在线免费观看| 精品免费久久久久久久清纯| 91精品国产九色| 亚洲中文日韩欧美视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产乱人视频| 色哟哟·www| 一级毛片我不卡| 色av中文字幕| 亚洲av五月六月丁香网| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 麻豆国产av国片精品| 直男gayav资源| 内射极品少妇av片p| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黄片wwwwww| 老司机影院成人| 国产亚洲精品av在线| 99久久九九国产精品国产免费| 深夜精品福利| 国产av一区在线观看免费| 91久久精品电影网| 久久韩国三级中文字幕| 国内精品久久久久精免费| 无遮挡黄片免费观看| 一本久久中文字幕| 国产精品亚洲美女久久久| 婷婷六月久久综合丁香| 久久人人爽人人片av| 国语自产精品视频在线第100页| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 色哟哟哟哟哟哟| 观看美女的网站| 国产在线精品亚洲第一网站| 色噜噜av男人的天堂激情| 99在线视频只有这里精品首页| 搞女人的毛片| 亚洲18禁久久av| 最新在线观看一区二区三区| 精品一区二区三区人妻视频| 天美传媒精品一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 精品国产三级普通话版| aaaaa片日本免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 精品免费久久久久久久清纯| 青春草视频在线免费观看| av国产免费在线观看| 99久国产av精品国产电影| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 国产精品一区二区三区四区久久| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品人妻偷拍中文字幕| 岛国在线免费视频观看| 国产亚洲精品av在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲av不卡在线观看| 我的老师免费观看完整版| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 久久午夜福利片| 亚洲成av人片在线播放无| 国产伦精品一区二区三区视频9| 午夜激情福利司机影院| 国产熟女欧美一区二区| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品电影一区二区三区| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产美女午夜福利| 国产精品久久久久久久电影| а√天堂www在线а√下载| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 此物有八面人人有两片| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产视频一区二区在线看| 免费看美女性在线毛片视频| 成人一区二区视频在线观看| 在线免费观看的www视频| 成人二区视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 午夜精品在线福利| 小说图片视频综合网站| 嫩草影院新地址| 联通29元200g的流量卡| 精品乱码久久久久久99久播| 高清毛片免费看| 国产男靠女视频免费网站| 国内精品宾馆在线| 在线观看66精品国产| 国产精品精品国产色婷婷| 欧美一级a爱片免费观看看| 午夜a级毛片| 国产日本99.免费观看| 国产成人精品久久久久久| 色播亚洲综合网| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲内射少妇av| 久久久久久久久久久丰满| 国产一区二区三区av在线 | 99热这里只有精品一区| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 国内精品宾馆在线| 在线播放无遮挡| 国产真实伦视频高清在线观看| а√天堂www在线а√下载| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 精品不卡国产一区二区三区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 能在线免费观看的黄片| 亚洲最大成人中文| 我的女老师完整版在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 久久久久久久久久成人| 日本成人三级电影网站| 精品福利观看| 热99re8久久精品国产| 内地一区二区视频在线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| av在线亚洲专区| 免费av不卡在线播放| 日韩精品有码人妻一区| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产高清三级在线| 国产高潮美女av| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线播| 日本黄色视频三级网站网址| 久久久久久国产a免费观看| 久久草成人影院| 一级黄色大片毛片| 国产黄a三级三级三级人| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久亚洲精品不卡| 亚洲五月天丁香| 国内精品一区二区在线观看| 色播亚洲综合网| 黄色一级大片看看| av视频在线观看入口| 亚洲欧美日韩东京热| 亚洲av一区综合| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲国产欧美人成| 99精品在免费线老司机午夜| 久久久久久久午夜电影| 人人妻人人看人人澡| 九色成人免费人妻av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产成年人精品一区二区| 乱码一卡2卡4卡精品| 久久99热这里只有精品18| 亚洲久久久久久中文字幕| 日韩精品有码人妻一区| 国产久久久一区二区三区| 看非洲黑人一级黄片| 免费看日本二区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 精品午夜福利视频在线观看一区| 看非洲黑人一级黄片| 老司机福利观看| 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 日韩精品中文字幕看吧| 午夜a级毛片| 日本 av在线| 51国产日韩欧美| 黄色日韩在线| 午夜激情福利司机影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 欧美bdsm另类| videossex国产| 麻豆一二三区av精品| 国产不卡一卡二| 简卡轻食公司| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 天堂动漫精品| 久久久国产成人精品二区| 在线观看免费视频日本深夜| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产精品一区www在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| .国产精品久久| 香蕉av资源在线| 一进一出抽搐动态| 亚洲精品亚洲一区二区| 老司机影院成人| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 欧美性猛交黑人性爽| 真实男女啪啪啪动态图| 97超视频在线观看视频| av黄色大香蕉| 日日撸夜夜添| 成年av动漫网址| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产单亲对白刺激| 久久精品人妻少妇| 日本黄色片子视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 精品无人区乱码1区二区| 永久网站在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产一级毛片七仙女欲春2| 久久韩国三级中文字幕| av天堂中文字幕网| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产高清不卡午夜福利| 日本a在线网址| 欧美潮喷喷水| av在线天堂中文字幕| a级一级毛片免费在线观看| 日韩强制内射视频| 麻豆一二三区av精品| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产av不卡久久| 国产激情偷乱视频一区二区| 天堂动漫精品| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 在线国产一区二区在线| 日韩制服骚丝袜av| 成熟少妇高潮喷水视频| 日日撸夜夜添| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 亚洲精品456在线播放app| 1000部很黄的大片| 亚洲国产色片| 色哟哟哟哟哟哟| 乱系列少妇在线播放| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 色综合色国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 搡老熟女国产l中国老女人| 一个人免费在线观看电影| 日韩欧美在线乱码| 我要搜黄色片| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产午夜精品论理片| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 国语自产精品视频在线第100页| 成人午夜高清在线视频| av在线亚洲专区| 欧美成人a在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 亚洲欧美清纯卡通| 成人特级黄色片久久久久久久| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产精品久久久久久久电影| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日本在线视频免费播放| 国产不卡一卡二| 免费看日本二区| www.色视频.com| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品午夜福利在线看| 午夜久久久久精精品| 欧美精品国产亚洲| 可以在线观看毛片的网站| 美女黄网站色视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 3wmmmm亚洲av在线观看| 如何舔出高潮| www.色视频.com| 欧美极品一区二区三区四区| 日本 av在线| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国产一区二区在线av高清观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲国产欧美人成| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 69人妻影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 俺也久久电影网| 亚洲色图av天堂| 在线免费十八禁| 12—13女人毛片做爰片一| 久久草成人影院| 五月伊人婷婷丁香| 国内精品久久久久精免费| 亚洲内射少妇av| 久久久久国产网址| 久久6这里有精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 春色校园在线视频观看| 亚洲精品在线观看二区| a级毛色黄片| 悠悠久久av| 国产视频内射| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲欧美成人精品一区二区| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲性久久影院| av在线天堂中文字幕| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久午夜欧美精品| 成人鲁丝片一二三区免费| 久久久久久久久久黄片| 天堂网av新在线| 99在线人妻在线中文字幕| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 日韩成人av中文字幕在线观看 | 免费搜索国产男女视频| 日韩精品中文字幕看吧| 成人特级av手机在线观看| 欧美一级a爱片免费观看看| 床上黄色一级片| 看十八女毛片水多多多| 日日撸夜夜添| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产精品,欧美在线| 成人美女网站在线观看视频| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 最近手机中文字幕大全| 午夜福利18| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲av成人av| 人人妻人人看人人澡| 黄色视频,在线免费观看| 日本成人三级电影网站| 亚洲精品国产av成人精品 | 国产黄色小视频在线观看| 婷婷亚洲欧美| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 看十八女毛片水多多多| 91在线精品国自产拍蜜月| 成年版毛片免费区| 俄罗斯特黄特色一大片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 看非洲黑人一级黄片| 寂寞人妻少妇视频99o| 搡老妇女老女人老熟妇| 天堂网av新在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 99热这里只有是精品在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 变态另类丝袜制服| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 看黄色毛片网站| 免费高清视频大片| 中出人妻视频一区二区| 久久人人精品亚洲av| 六月丁香七月| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 在线免费观看不下载黄p国产| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲精品国产av成人精品 | 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美在线一区亚洲| 国产成人一区二区在线| 波多野结衣高清无吗| 国产真实乱freesex| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 午夜久久久久精精品| 哪里可以看免费的av片|