NSCLC患者病灶及癌旁組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)水平與病理學(xué)參數(shù)的關(guān)聯(lián)性①

王 寧， 張全武，劉芮菡，康華麗，劉俊玲

(鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院病理科， 河南 鄭州 450000)

非小細(xì)胞肺癌(Non Small Cell Lung Cance，NSCLC)是臨床常見惡性腫瘤，約占肺癌的85%，其中約75%患者確診時(shí)已為中晚期，治療難度較大，預(yù)后效果普遍較差，嚴(yán)重威脅患者生命安全[1]。NSCLC的發(fā)病過程是多步驟、多因素過程，與多種癌基因、抑癌基因、轉(zhuǎn)錄因子具有相關(guān)性。其中叉頭框蛋白C2(FOXC2)是重要調(diào)節(jié)因子，在上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮重要作用，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中易被激活，與多種惡性腫瘤具有相關(guān)性[2]。膠質(zhì)瘤相關(guān)癌基因同源蛋白-1(Gli-1)是Hedgehog信號(hào)通路下游轉(zhuǎn)錄因子，是信號(hào)傳導(dǎo)通路活化的標(biāo)志，在惡性腫瘤中異?；罨c侵襲轉(zhuǎn)移具有密切相關(guān)[3]。本研究選取我院NSCLC患者116例，旨在分析Gli-1、FOXC2表達(dá)水平與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)的關(guān)聯(lián)性。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選取2019-03～2020-03鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院NSCLC患者116例，男63例，女53例；年齡48～76歲，平均(62.59±6.57)歲；組織學(xué)類型：54例鱗癌，62例腺癌；分化程度：43例高分化，39例中分化，34例低分化；臨床分期：37例Ⅰ期，40例Ⅱ期，39例Ⅲ期；55例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，61例淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

(1)納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)腫瘤標(biāo)志物、細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)、肺部CT等影像學(xué)檢查確診為NSCLC；預(yù)計(jì)生存期>3個(gè)月；均未接受任何治療；均簽署知情同意書。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他部位惡性腫瘤；合并消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)或感染性疾病；精神或意識(shí)障礙無法配合治療；合并嚴(yán)重出血傾向；心肝腎等臟器功能障礙。

1.3 方法

1.3.1 Gli-1、FOXC2表達(dá)：采集病灶組織及癌旁組織(距病灶邊緣5cm外)，采用福爾馬林緩沖液10%進(jìn)行固定，脫水、浸蠟，采用石蠟包埋切片，厚度為4μm，然后采用二甲苯脫蠟，用乙醇脫苯，修復(fù)抗原；采用過氧化氫3%封閉10min，滴入稀釋后一抗，于4℃下過夜，二抗于37℃下水浴孵育20min，采用二氨基聯(lián)苯胺(Diaminobenzidine，DAB)進(jìn)行顯色，并利用蘇木素復(fù)染，脫水后進(jìn)行透明封片。陰性對(duì)照采用磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)代替一抗，陽(yáng)性對(duì)照為已知陽(yáng)性組織。

1.3.2 結(jié)果判定：采用400倍視野下光學(xué)顯微鏡，隨機(jī)選取5個(gè)視野，計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，計(jì)算抗體陽(yáng)性細(xì)胞百分率；采用半定量積分法分級(jí)，若陽(yáng)性細(xì)胞百分率×陽(yáng)性著色程度<3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。其中陽(yáng)性細(xì)胞百分率≤4%記0分，5%～25%記1分，26%～50%記2分，51%～75%記3分，≥76%記4分；陽(yáng)性著色程度：無色記0分，黃色記1分，棕黃色記2分，棕褐色記3分。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)比較病灶組織、癌旁組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)水平。(2)比較不同病理學(xué)參數(shù)病灶組織中Gli-1、FOXC2的陽(yáng)性表達(dá)率。(3)分析病灶組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以n(%)表示，行χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Spearman分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Gli-1、FOXC2表達(dá)水平

病灶組織FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率71.55%、Gli-1表達(dá)陽(yáng)性率90.52%高于癌旁組織17.24%、12.93%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組Gli-1、FOXC2表達(dá)水平對(duì)比[n=116,n(%)]

2.2 不同病理學(xué)參數(shù)病灶組織中Gli-1、FOXC2的陽(yáng)性表達(dá)率

臨床分期Ⅱ～Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者病灶組織中Gli-1、FOXC2陽(yáng)性表達(dá)率較高，且中低分化程度Gli-1陽(yáng)性表達(dá)率較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同病理學(xué)參數(shù)病灶組織中Gli-1、FOXC2的陽(yáng)性表達(dá)率

2.3 病灶組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)與相關(guān)病理學(xué)參數(shù)相關(guān)性

經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，Gli-1表達(dá)與分化程度呈負(fù)相關(guān)，Gli-1、FOXC2表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 相關(guān)性分析

3 討論

近年來隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步與發(fā)展，NSCLC在治療策略上有極大進(jìn)展，但5年生存率低于15%，預(yù)后較差，臨床應(yīng)進(jìn)一步采取積極措施盡早診斷，改善治療效果。

NSCLC發(fā)病是多基因參與過程，常伴有抑癌基因失活、癌基因激活、DNA修復(fù)基因改變等，且其轉(zhuǎn)移機(jī)制與細(xì)胞增殖、侵襲、分化等過程相關(guān)，臨床可通過檢測(cè)基因或分子的表達(dá)情況，從而判斷病情進(jìn)展[4]。劉曙光等[5]學(xué)者研究表明，F(xiàn)OXC2能促進(jìn)NSCLC發(fā)生發(fā)展，可作為評(píng)估肺癌預(yù)后的指標(biāo)?；诖?，本研究對(duì)NSCLC患者病灶及癌旁組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示病灶組織FOXC2表達(dá)陽(yáng)性率71.55%、Gli-1表達(dá)陽(yáng)性率90.52%高于癌旁組織17.24%、12.93%(P<0.05)。FOXC2是在DNA轉(zhuǎn)錄過程中發(fā)揮重要作用；Gli-1是Hh信號(hào)通路中重要激活因子，是其活化的可靠指標(biāo)。正常生理狀態(tài)下，F(xiàn)OXC2參與血管、淋巴生成及脂肪代謝，Hh信號(hào)通路對(duì)胚胎期組織細(xì)胞生長(zhǎng)分化具有調(diào)控作用，癌旁正常組織中二者表達(dá)較低。NSCLC患者中FOXC2可通過誘導(dǎo)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)錄因子Snail、Twist、Goosecoi表達(dá)，促進(jìn)間質(zhì)分化，與腫瘤遷徙侵襲具有密切聯(lián)系；并異常激活Hh信號(hào)通路，Gli蛋白可轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄激活因子作用，促進(jìn)靶基因表達(dá)，細(xì)胞繁殖，從而引發(fā)腫瘤[6]。因此病灶組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)水平呈明顯上調(diào)狀態(tài)。

本研究結(jié)果還顯示，臨床分期Ⅱ～Ⅲ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者病灶組織中Gli-1、FOXC2陽(yáng)性表達(dá)率較高，且中低分化程度Gli-1陽(yáng)性表達(dá)率較高，且經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，Gli-1表達(dá)與分化程度呈負(fù)相關(guān)，Gli-1、FOXC2表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)(P<0.05)。臨床分期越高，腫瘤侵襲越嚴(yán)重，對(duì)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化誘導(dǎo)越嚴(yán)重，Gli-1、FOXC2表達(dá)水平會(huì)逐漸升高，且對(duì)于Gli-1來說，Hh信號(hào)通路活化異常，會(huì)影響細(xì)胞分化，分化程度越低，Gli-1表達(dá)水平越高。另外，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者表達(dá)水平升高是由于FOXC2能促進(jìn)血管及淋巴管生成，有助于肺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，且參與上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，促進(jìn)轉(zhuǎn)移；而Gli-1可通過增強(qiáng)基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)或減少E-cadherin的表達(dá)減弱腫瘤細(xì)胞間黏附能力，增加基底膜降解，從而參與腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移[7]。因此，病灶組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等具有相關(guān)性，臨床可通過監(jiān)測(cè)Gli-1、FOXC2表達(dá)水平評(píng)估病情及轉(zhuǎn)移能力，并可通過降低二者水平調(diào)控癌細(xì)胞的增殖與凋亡，為臨床治療提供新思路，從而采取針對(duì)性措施改善預(yù)后效果。

綜上所述，NSCLC患者病灶組織中Gli-1、FOXC2表達(dá)水平明顯上調(diào)，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等病理學(xué)參數(shù)具有關(guān)聯(lián)性，有助于病情判斷及預(yù)后評(píng)估。