結(jié)直腸癌患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達及其臨床意義

李軍彥 陳文超 李中輝 王騰飛 盧少峰 丁東哲 趙守魁

結(jié)直腸癌是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來，隨著我國環(huán)境的變化和人民生活習慣的改變，該病發(fā)病率逐年升高。在早期，患者臨床體征不甚明顯，許多患者以腹痛、消化不良而就診，導致病情延誤。目前對于直腸癌的發(fā)生原因尚不明確，雖然通過放療、化療、免疫治療等多種方法不斷改善結(jié)直腸癌患者預后，但是手術(shù)切除仍是根治結(jié)直腸癌的唯一方法，有研究表明，直腸癌Ⅳ期的患者5年生存率低至10%[1]。近年來隨著分子生物學的飛速發(fā)展，越來越多的指標被發(fā)現(xiàn)在臨床評價直腸癌患者病情發(fā)生和發(fā)展中具有重要意義?；|(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)屬于分泌型的蛋白，一般表達在細胞腺上皮，在腫瘤組織中由腫瘤細胞表達，因此在多種惡性腫瘤中均存在表達升高。Survivin屬于新型凋亡抑制蛋白，可以抑制細胞凋亡并對細胞分裂進行調(diào)節(jié)，多數(shù)在細胞G2/M期表達，能夠與有絲分裂過程中紡錘體微管相結(jié)合，有研究指出其表達異常是結(jié)直腸癌發(fā)生早期必然事件，因此對于腫瘤預后具有一定的判斷價值[2]。過氧化物酶增殖物激活受體屬于核轉(zhuǎn)錄因子，生理狀態(tài)下可以參與人體脂肪細胞分化與脂質(zhì)代謝，通過與其配體結(jié)合可以誘導細胞分化與凋亡，因此對于腫瘤生長和增殖具有一定的價值。透明質(zhì)酸受體屬于可以介導細胞與細胞、細胞和細胞外基質(zhì)黏附并作用的黏附分子，廣泛存在于各種細胞表面跨膜蛋白，其中CD44v7是變異型的透明質(zhì)酸受體，其表達同腫瘤發(fā)生、發(fā)展以及轉(zhuǎn)移之間關(guān)系密切[3]。本研究分析了MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達水平變化對結(jié)直腸癌患者病情發(fā)生與發(fā)展的影響，現(xiàn)將結(jié)果進行如下報告。

1 材料與方法

1.1 臨床資料

收集了我院在2015年7月至2016年12月期間接受治療的結(jié)直腸癌患者89例，其中男性46例，女性43例，平均年齡(63.72±8.93)歲。TNM分期：Ⅰ期患者22例，Ⅱ期患者21例，Ⅲ期患者22例，Ⅳ期患者24例。同時選取88例正常健康體檢者作為對照組，其中男性45例，女性43例，平均年齡(64.86±9.53)歲。納入標準：①結(jié)直腸癌患者符合結(jié)直腸癌的相關(guān)診斷標準。②患者及家屬知情并同意。2組研究對象的一般資料比較，無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 試驗方法 抽取2組研究對象空腹靜脈血5 ml，以2000 r/min離心30 min后分離血清待檢，采用免疫組織化學法測定血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達情況，嚴格按照試劑盒說明書操作，試劑均由北京中杉生物技術(shù)有限公司提供。

1.2.2 治療方法 手術(shù)方法：89例結(jié)直腸癌患者均采取開腹直腸癌切除治療，具體操作如下：取患者截石位，麻醉后進入腹腔，對是否存在遠處轉(zhuǎn)移和腫瘤的局部狀況進行確認了解。在患者的近端腸管開展結(jié)扎，充分暴露腸系膜下血管根部，然后切斷并游離Toldt間隙，將直腸和系膜游離至腫瘤的遠端5 cm處后，開展Dixon手術(shù)。使用閉合器關(guān)閉遠端腸管，在離斷腸管后行端端吻合，再采用Miles手術(shù)將患者肛門挖除并在近端腸管造瘺，術(shù)后均給予常規(guī)的抗炎支持。

化療方法：采用卡培他濱聯(lián)合奧沙利鉑治療，奧沙利鉑130 mg/m2+5%葡萄糖注射液500 ml靜脈滴注治療，時間控制在3～4 h，d1，停藥20 d，3個周期后觀察患者的臨床療效。

1.2.3 隨訪方法 定期進行電話、家訪或者微信等形式隨訪，內(nèi)容主要包括患者的生活質(zhì)量、不良反應(yīng)及生存時間等情況，并將結(jié)果錄入計算機后進行相關(guān)的分析。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

2.1 2組血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率比較

結(jié)直腸癌患者血清中MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于對照組，具有統(tǒng)計學差異(P<0.05)，見表1。

表1 2組血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達情況比較(例，%)

2.2 直腸癌不同階段患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率比較

對腫瘤患者進行TNM分期后發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05)，見表2。

表2 不同分期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達情況比較(例，%)

2.3 血清MMP7、CD44v7、Survivin和PPARγ陽性表達與腫瘤患者死亡的關(guān)系

治療后4年進行隨訪，死亡37例(41.6%)。死亡患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率均明顯高于存活患者(P<0.05)。以死亡為應(yīng)變量(1=存活，2=死亡)，各因子表達為自變量進行回歸分析，發(fā)現(xiàn)Survivin陽性表達與腫瘤患者治療后4年死亡密切相關(guān)(P<0.05)，見表3、表4。

表3 血清MMP7、CD44v7、Survivin和PPARγ陽性表達與腫瘤患者死亡的關(guān)系(例，%)

表4 各因子陽性表達與腫瘤患者死亡關(guān)系

3 討論

腸癌是一種屬于大腸中直乙交界部位到肛管之間的惡性腫瘤，是臨床上常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，近年來直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)升高的趨勢。有報道顯示大腸癌發(fā)病率在全球范圍內(nèi)位列所有惡性腫瘤的第3位，在消化道腫瘤中位列第2位[4]。直腸癌有增生-腺瘤-惡性腫瘤的演變過程，雖然該病的發(fā)病機制尚未十分明確，但是目前可知其應(yīng)該是與遺傳易感性、生活習慣改變等多種因素相關(guān)。采用手術(shù)治療是目前臨床上根治直腸癌的主要方法，但是由于人體直腸和附近的臟器缺乏漿膜層的覆蓋，以致直腸部位腫瘤容易出現(xiàn)浸潤，因此需要對直腸癌患者進行全面的綜合治療[5]。近年來隨著分子生物學發(fā)展，越來越多的分子生物學指標在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展和預后評判方面發(fā)揮重要作用，為臨床提供指導。

MMP7屬于MMPs家族中分子量最小的分泌型蛋白，通過活化可以降解細胞外基質(zhì)，其細胞外基質(zhì)水解和降解的活性極強，同時具備較強的底物特異性，能夠?qū)δz原、可溶性彈性蛋白、蛋白多糖的底物進行水解與降解，有報道指出在多種腫瘤組織中呈現(xiàn)特異性表達，尤其和結(jié)直腸癌的侵犯和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切[6]。Survivin是目前發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制因子，可以同Caspases基因結(jié)合并抑制活性，對細胞周期進程進行調(diào)節(jié)，參與到受體介導信號傳導途徑中，結(jié)直腸癌腫瘤細胞通過對Survivin過量表達會上調(diào)細胞有絲分裂抗凋亡作用，可以保持腫瘤細胞增殖與生長[7]。有學者報道Survivin同結(jié)直腸癌病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤分期密切相關(guān)，Survivin在結(jié)直腸癌組織中高度表達，但是在癌旁組織中則未發(fā)現(xiàn)[8]。CD44屬于具有多種功能、多結(jié)構(gòu)細胞表面跨膜糖蛋白，是未分類細胞黏附分子，可以促進腫瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞的黏附及對細胞基底膜的浸潤，對細胞的骨架蛋白分布和構(gòu)型產(chǎn)生影響，加強了腫瘤細胞的運動能力，促進腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移[9]。有報道指出CD44v7是淋巴細胞歸巢受體，可以參與到淋巴細胞激活過程，被激活的淋巴細胞與轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞可以通過CD44v7進行結(jié)合在淋巴細胞特異性受體導致在腫瘤細胞在淋巴結(jié)生長分化[10-11]。PPARγ具有廣泛的生物學功能，可以對脂肪與糖代謝和脂肪細胞分化以及單核細胞成熟過程進行調(diào)控，同時可以誘導細胞凋亡并抑制體內(nèi)炎癥反應(yīng)過程，在一定程度對腫瘤細胞分化、凋亡以及腫瘤血管生成產(chǎn)生影響[12-13]。有報道指出PPARγ可以結(jié)合相應(yīng)配體發(fā)揮抑制腫瘤生長作用，被激活后下調(diào)Bcl-2家族蛋白發(fā)揮促凋亡作用，因此該通路被認為是誘導結(jié)直腸癌腫瘤細胞凋亡的途徑之一[14-15]。

本研究顯示，結(jié)直腸癌患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率明顯高于對照組，說明在結(jié)直腸癌患者中存在血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ高表達。對腫瘤患者進行TNM分期后發(fā)現(xiàn)，Ⅲ～Ⅳ期患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率較Ⅰ～Ⅱ患者明顯增高，說明患者分期越晚血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性率升高越顯著。通過長期隨訪發(fā)現(xiàn)，死亡患者血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ陽性表達率均明顯高于存活患者，而回歸分析顯示Survivin陽性表達與腫瘤患者死亡的密切相關(guān)，說明血清Survivin陽性表達對結(jié)直腸癌預后的判斷更具臨床價值。本研究優(yōu)勢在于證實了血清MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ對結(jié)直腸癌患者預后具有一定的判斷意義，但是本研究入組病例有限，影響因素未能完全排除，因此還需擴充病例進行深入論證分析。

綜上所述，MMP7、CD44v7、Survivin、PPARγ表達水平變化可以有效地提示患者疾病的發(fā)生發(fā)展程度，為下一步更好的治療提供了保障。