大孔吸附樹(shù)脂分離純化巴豆中佛波醇

黃從波，高意，范杰平

(南昌大學(xué)化學(xué)工程系，江西 南昌 330031)

prostratin(12-deoxyphorbol-13-acetate)是一種非常復(fù)雜的二萜天然產(chǎn)物，也是一種極具代表性的佛波醇酯類化合物[1]，在誘導(dǎo)潛在感染的細(xì)胞系和原代細(xì)胞的HIV表達(dá)方面表現(xiàn)出強(qiáng)大的體外活性，且無(wú)促腫瘤作用[2-5]。雖然prostratin及其類似物可以作為治療HIV的藥物，但是它們的獲取難度極大[6]。Wender等[7]以佛波醇為前體，經(jīng)五步反應(yīng)，合成得到prostratin和其他類似化合物。

由于佛波醇是佛波醇酯類化合物的前體，因此具有巨大的藥用潛力，吸引了眾多學(xué)者的關(guān)注[8-9]，其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。盡管進(jìn)行了40年的努力，但由于化學(xué)合成的復(fù)雜性和氧原子的特殊位置，所以從天然產(chǎn)物中分離獲取佛波醇具備明顯優(yōu)勢(shì)[10]。富含佛波醇酯的天然植物是獲取佛波醇的主要來(lái)源，例如巴豆、麻瘋樹(shù)、大戟、下垂澳楊[11-12]，其中巴豆中佛波醇酯的含量最高[13]。David以巴豆油為原料，將佛波醇酯在堿性條件下醇解得到佛波醇[14]。巴豆主要產(chǎn)自我國(guó)的福建、云南、廣東、廣西等省份，且產(chǎn)量較大[15]，因此在我國(guó)以巴豆作為原料制備佛波醇，能為其工業(yè)化生產(chǎn)降低成本、縮短生產(chǎn)周期。

在已報(bào)道的研究中，佛波醇的純化方法有兩種：硅膠柱層析和制備色譜法，硅膠柱層析中大量使用乙醚、乙酸乙醇和石油醚等低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，這給工業(yè)生產(chǎn)帶來(lái)較大安全隱患[16]；而制備色譜法對(duì)設(shè)備要求高、生產(chǎn)成本昂貴。大孔樹(shù)脂具有吸附性能好、選擇性高、機(jī)械強(qiáng)度大、價(jià)格低廉、能夠處理再生等優(yōu)勢(shì)，在目標(biāo)組分的富集上有良好的效果，因而在制藥工業(yè)的分離純化領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。本文以巴豆為原料，提取得到巴豆油，經(jīng)醇解后得到佛波醇粗提液，再通過(guò)大孔樹(shù)脂對(duì)粗提液進(jìn)行純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大孔吸附樹(shù)脂取得了很好的分離效果，且回收率也比較高，所得的佛波醇樣品具有較高的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

圖1 佛波醇的結(jié)構(gòu)式Fig.1 Structural formula of phorbol

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)藥品

巴豆購(gòu)自江西樟樹(shù)天齊堂中藥飲片有限公司)；佛波醇(質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%)購(gòu)自南京春秋生物技術(shù)有限公司；無(wú)水碳酸鉀(分析純)購(gòu)自天津風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司；石油醚(分析純)、無(wú)水乙醇(分析純)、甲醇(色譜純)均購(gòu)自天津大茂化學(xué)試劑廠；甲醇(分析純)、鹽酸(分析純)、氫氧化鈉(分析純)均購(gòu)自西隴化工股份有限公司；NKA-Ⅱ型、ADS-800型、S-8型、ADS-7型、AB-8型、D101、ADS-17型大孔樹(shù)脂均購(gòu)自鄭州和成新材料有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

DFY-5L/40型低溫恒溫反應(yīng)浴(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；BSA124S型電子分析天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)；85-1A型磁力攪拌器(上海馳久有限公司)；DDHZ-300型恒溫振蕩器(國(guó)華電器有限公司)；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；BT300-2J蠕動(dòng)泵(蘭格恒流泵有限公司)；Agilent1260型高效液相色譜儀(安捷倫科技有限公司)。

1.3 佛波醇的定量分析

1.3.1 高效液相色譜(HPLC)條件

色譜柱：Amethyst C18-H(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流速：1 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：28 ℃；DAD紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：234 nm[16]；流動(dòng)相：甲醇-水梯度洗脫，0～5 min甲醇與水比例為V(甲醇)：V(水)=15：100，5～20 min逐漸上升到35：100，20～25 min逐漸上升到100：0，25～35 min保持100%甲醇等度洗脫，35～40 min逐漸下降到15：100，40～45 min維持15：100以平衡色譜柱。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定

稱取35 mg佛波醇標(biāo)準(zhǔn)品，倒入25 mL容量瓶中(1.4 mg·mL-1)，加入少量甲醇，超聲使其完全溶解，甲醇定容，搖勻靜置。用1 mL移液槍分別量取1，2，3，4，5，6 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于10 mL容量瓶中。甲醇定容后取0.5～1 mL溶液過(guò)濾，HPLC分別測(cè)量峰面積。繪制質(zhì)量濃度(y)對(duì)應(yīng)峰面積(x)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性擬合方程：y=7031.9x，在0.14～0.84 mg·mL-1的佛波醇質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，擬合方程線性關(guān)系良好(R2=0.999 6)。

1.4 佛波醇酯的提取

將巴豆去殼，在粉碎機(jī)中粉碎，以石油醚作為溶劑從巴豆粉末中提取佛波醇酯，浸泡過(guò)夜后，抽濾，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45 ℃揮干石油醚得到巴豆油，巴豆油于室溫下保存即可[16-17]。

1.5 佛波醇酯的醇解

堿性甲醇的制備：稱取45 g無(wú)水K2CO3倒入燒瓶中，并加入1 500 mL甲醇，開(kāi)啟冷凝水，在60 ℃下攪拌3 h，取出燒瓶后置于室溫下冷卻，抽濾，倒入錐形瓶中密封備用。

稱取3 g巴豆油于雙層反應(yīng)釜中，接上恒溫水浴接頭，設(shè)置反應(yīng)溫度20 ℃，待溫度穩(wěn)定后倒入30 mL堿性甲醇溶液，充入氮?dú)獠⒂脷馇蛎芊?，反?yīng)完成后將醇解液倒入燒杯，利用1 mol·L-1的HCl-CH3OH調(diào)節(jié)pH為6.5～7，抽濾除去KCl沉淀，倒入容量瓶中定容，最后利用HPLC進(jìn)行定量分析。

1.6 大孔樹(shù)脂的預(yù)處理

將大孔樹(shù)脂倒入燒杯中，倒入乙醇浸泡24 h，每隔一段時(shí)間攪拌一次，隨后倒入玻璃層析柱中，用乙醇-水溶液梯度洗脫，再使用超純水置換掉樹(shù)脂內(nèi)部的乙醇，當(dāng)流出液加水不再渾濁或無(wú)乙醇?xì)馕稙橹筟18]。

將醇洗過(guò)的樹(shù)脂倒入燒杯中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5% NaOH溶液浸泡6 h，每隔一段時(shí)間攪拌一次，將樹(shù)脂上柱，用超純水洗脫至中性。

將堿性溶液處理過(guò)后的大孔樹(shù)脂倒入燒杯，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)5% HCl溶液浸泡6 h，每隔一段時(shí)間攪拌一次，上柱后用超純水洗至中性。最后倒入燒杯中，并加入低濃度乙醇浸泡備用。

1.7 靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)

1.7.1 吸附過(guò)程

將樹(shù)脂于50 ℃烘箱中烘干，分別稱取1 g預(yù)處理過(guò)的干樹(shù)脂于錐形瓶中，加入少量乙醇活化12 h，抽濾除去乙醇待用。將粗提液旋干，加入20%乙醇溶液使之溶解，并通過(guò)HPLC測(cè)定佛波醇的初始質(zhì)量濃度，記為C0。將等量的醇解液和樹(shù)脂加入到錐形瓶，密封置于恒溫振蕩器中(25 ℃，135 r·min-1)吸附12 h，取樣測(cè)HPLC，分別計(jì)算各種型號(hào)樹(shù)脂對(duì)粗提液中佛波醇的吸附Q:

式中：C0為粗提液中佛波醇的質(zhì)量濃度，mg·mL-1；C為吸附完成后佛波醇在溶液中的質(zhì)量濃度，mg·mL-1；V為溶液體積，mL；M為大孔樹(shù)脂的干重，g。

1.7.2 解吸過(guò)程

吸附完成后，為考察各個(gè)大孔樹(shù)脂的解吸性能，將樹(shù)脂和粗提液抽濾除去溶液后倒入原錐形瓶，加等量純乙醇密封，在恒溫振蕩器中(25 ℃，135 r·min-1)解吸12 h，測(cè)定溶液中的佛波醇的濃度，并計(jì)算各個(gè)型號(hào)樹(shù)脂對(duì)佛波醇的解吸量Qd：

式中：Cd為解吸完成后溶液中佛波醇的質(zhì)量濃度，mg·mL-1；Vd為溶液的體積，mL；Md為大孔樹(shù)脂的干重，g。

1.7.3 靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)

將預(yù)處理后的樹(shù)脂于50 ℃烘箱中烘干，稱取1 g預(yù)處理過(guò)的干樹(shù)脂于錐形瓶中，加入少量乙醇浸泡活化12 h，抽濾除去乙醇待用。取30 mL佛波醇溶液(溶劑：16%乙醇，佛波醇質(zhì)量濃度：1 mg·mL-1)加入到錐形瓶中，倒入1 g樹(shù)脂后密封。將錐形瓶固定于恒溫振蕩器中，在25 ℃、156 r·min-1的轉(zhuǎn)速下振蕩，在不同的時(shí)間點(diǎn)測(cè)量溶液中佛波醇的濃度，并計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)的吸附量(Qt，mg·g-1)。

1.7.4 靜態(tài)吸附熱力學(xué)實(shí)驗(yàn)

將預(yù)處理過(guò)的樹(shù)脂于50 ℃烘箱中烘干，分別稱取1 g干樹(shù)脂倒入7個(gè)錐形瓶中，配制(0.1～1 mg·mL-1)7個(gè)不同質(zhì)量濃度的佛波醇溶液并加入錐形瓶中，防水膜封住玻璃塞和瓶口。將錐形瓶置于15，25，35 ℃恒溫振蕩器中，振蕩12 h使其達(dá)到吸附平衡，最后，HPLC測(cè)溶液濃度，并計(jì)算不同初始濃度下的平衡吸附量Qe。

1.8 梯度洗脫

將佛波醇解液和少量樹(shù)脂倒入梨形燒瓶，利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在50 ℃下去除溶劑，密封備用。將預(yù)處理過(guò)的大孔樹(shù)脂按一定的高徑比裝柱，洗耳球敲實(shí)，緊接著倒入旋干后的樹(shù)脂。配制各個(gè)濃度的洗脫液(4%，8%，12%，16%，20%乙醇-水)，蠕動(dòng)泵加壓洗脫。按照固定體積間隔收集餾分，分別取少量樣品，并用HPLC測(cè)定溶液中佛波醇含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 大孔樹(shù)脂的初步篩選

大孔樹(shù)脂的初步篩選主要是根據(jù)樹(shù)脂的吸附解吸性能，通常樹(shù)脂對(duì)目標(biāo)組分需有較大吸附量和較高的解吸率。因此，我們初步考察了7種大孔樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附解吸性能。

由表1可知，NKA-Ⅱ、ADS-800、ADS-7、D101對(duì)佛波醇的吸附量較大，也有較好的解吸率，故后續(xù)用于對(duì)佛波醇進(jìn)行純化試驗(yàn)。

表1 7種大孔樹(shù)脂結(jié)構(gòu)參數(shù)Tab.1 Performance parameters of 7 kinds of macroporous adsorption resins

2.2 D101樹(shù)脂吸附動(dòng)力學(xué)考察

D101樹(shù)脂吸附動(dòng)力學(xué)曲線如圖2所示，在80 min前吸附速率很快，D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附量呈快速上升的趨勢(shì)；80 min后，吸附速率緩慢，在300 min左右達(dá)到平衡。這可以是因?yàn)榍捌谌芤号c大孔樹(shù)脂間的濃度差較大，傳質(zhì)推動(dòng)力大，且大孔樹(shù)脂內(nèi)外表面有大量的吸附位點(diǎn)，對(duì)佛波醇具有較強(qiáng)的吸附作用，使得前期的吸附速率很大。80 min后吸附速率緩慢的原因可能是液-固間濃度差減小，且此時(shí)起吸附作用的主要是一些小孔道內(nèi)的吸附位點(diǎn)。為研究D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附機(jī)制，利用一級(jí)動(dòng)力學(xué)和二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程進(jìn)行擬合，一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程如下：

ln(Qe-Qt)=lnQt-k1t

二級(jí)動(dòng)力學(xué)方程如下：

式中：Qt為時(shí)間t時(shí)的吸附量，mg·g-1；Qe,cal為擬合的平衡吸附量，mg·g-1；k1和k2分別為一級(jí)和二級(jí)動(dòng)力學(xué)速率常數(shù)。

采用直線擬合的方法得到初始值，進(jìn)而將實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行動(dòng)力學(xué)擬合，研究D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附機(jī)制，擬合結(jié)果如表2所示。

t/min圖2 D101樹(shù)脂吸附動(dòng)力學(xué)、一級(jí)和二級(jí)模型擬合曲線Fig.2 Adsorption kinetic curve and fitting curves by the first-order kinetic equations and second-order kinetic equations for D101 resin

表2 D101樹(shù)脂吸附佛波醇的動(dòng)力學(xué)模型參數(shù)Tab.2 Kinetic model fitting parameters of phorbol adsorption on D101 resin

由表2可以看出，一級(jí)動(dòng)力學(xué)與二級(jí)動(dòng)力學(xué)對(duì)佛波醇吸附過(guò)程都具有很好的擬合效果，且一級(jí)動(dòng)力學(xué)擬合曲線的相關(guān)系數(shù)大于二級(jí)動(dòng)力學(xué)擬合曲線的相關(guān)系數(shù)。一級(jí)動(dòng)力學(xué)主要是更符合物理吸附過(guò)程，而二級(jí)動(dòng)力學(xué)則更符合化學(xué)吸附過(guò)程，因此可以證明D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附過(guò)程主要受物理吸附的影響。

2.3 D101樹(shù)脂吸附熱力學(xué)考察

等溫吸附曲線如圖3所示，由于傳質(zhì)推動(dòng)力的差異，隨著佛波醇質(zhì)量濃度的增加，吸附量也呈上升趨勢(shì)，且隨著溫度的增加，大孔樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附量下降，說(shuō)明該吸附過(guò)程可能為放熱過(guò)程，降低溫度能夠提高樹(shù)脂吸附量。

Ce/(mg·mL-1)圖3 D101樹(shù)脂的Langmuir和Freundlich等溫吸附模型曲線Fig.3 Langmuir and Freundlich isotherm models fitting for D101 resin

進(jìn)一步研究樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附機(jī)制，將吸附數(shù)據(jù)通過(guò)Langmuir方程擬合，方程如下：

式中：Ce為吸附平衡時(shí)吸附液中佛波醇的質(zhì)量濃度，mg·mL-1；Qe為不同質(zhì)量濃度下的平衡吸附量，mg·g-1；Qmax為理論上的最大吸附量，mg·g-1；KL為吸附平衡常數(shù)，mL·mg-1。

對(duì)數(shù)據(jù)也采用Freundlich方程進(jìn)行擬合，方程如下：

式中：Ce為吸附平衡時(shí)吸附液中佛波醇的質(zhì)量濃度，mg·mL-1；Qe為不同質(zhì)量濃度下的平衡吸附量，mg·g-1；KF為平衡吸附常數(shù)；1/n為異質(zhì)因子。

Langmuir和Freundlich擬合結(jié)果如表3所示。Freundlich方程中的1/n表示被吸附物與吸附劑的吸附強(qiáng)度,當(dāng)0.1<1/n<1.0表示吸附良好，低于1.0時(shí)，吸附強(qiáng)度隨著1/n越來(lái)越接近1而增大，而1/n>1.0則表明吸附能力差。由表3可以看出擬合曲線參數(shù)1/n均在0.1～1之間，表明該樹(shù)脂對(duì)佛波醇具有良好的吸附能力。Langmuir模型的相關(guān)系數(shù)為0.994 5，0.983 2，0.962 2，擬合效果較好，按照Langmuir等溫吸附模型的假定，該樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附是各處吸附能相同的單分子層等溫吸附。

2.4 大孔樹(shù)脂柱層析純化工藝

2.4.1 極性大孔樹(shù)脂柱層析

根據(jù)大孔樹(shù)脂篩選的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，先采用3種極性大孔樹(shù)脂(NKA-Ⅱ、ADS-800、ADS-7)對(duì)佛波醇進(jìn)行純化。上樣方式可采用靜態(tài)吸附上樣：取適量大孔樹(shù)脂和佛波醇粗提液于燒杯中，保鮮膜密封，在恒溫振蕩器中靜態(tài)吸附12 h；也可采用干法上樣：將醇解液與大孔樹(shù)脂混合后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑(不完全旋干，以確保內(nèi)腔含溶劑利于洗脫劑的進(jìn)入)。上樣完成后，將樹(shù)脂邊攪拌邊倒入層析柱中，緊接著利用洗耳球?qū)?shù)脂柱敲緊至無(wú)明顯孔洞(柱高18 cm，直徑約3 cm)。設(shè)置蠕動(dòng)泵流速為4 mL·min-1，洗脫方式采用乙醇-水梯度洗脫(純水、10%～100%乙醇，步長(zhǎng)為10%，每個(gè)濃度體積為兩倍床層體積)，每50 mL收集一次，取樣測(cè)餾分中佛波醇的含量。3種極性大孔樹(shù)脂的純化效果均不理想，且增大洗脫液中水的比例也無(wú)法改善。純化后的樣品的色譜圖如圖4所示。

表3 D101樹(shù)脂吸附佛波醇的Langmuir、Freundlich模型參數(shù)Tab.3 Langmuir and Freundlich model fitting parameters for phorbol adsorption on D101 resin

t/min(a) ADS-7大孔樹(shù)脂純化后樣品液相色譜

t/min(b) NKA-Ⅱ大孔樹(shù)脂純化后樣品液相色譜

t/min(c) ADS-800大孔樹(shù)脂純化后樣品液相色譜

t/min(d) 粗佛波醇提取液液相色譜圖4 粗佛波醇提取液和3種極性大孔樹(shù)脂純化后樣品液相色譜Fig.4 Liquid chromatograms of crude phorbol extracts and samples after purification with three polar macroporous resins

2.4.2 D101樹(shù)脂梯度洗脫

從靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，D101大孔樹(shù)脂對(duì)佛波醇也具有較好的吸附效果，且從粗提液的液相色譜圖可以看出，粗提液存在很多弱極性雜質(zhì)，也存在一部分強(qiáng)極性雜質(zhì)，因此采用D101大孔樹(shù)脂既能使佛波醇具有較長(zhǎng)的保留時(shí)間，除去強(qiáng)極性雜質(zhì)；又能保證佛波醇與弱極性雜質(zhì)間有較大的分離度。

經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用靜態(tài)吸附上樣、動(dòng)態(tài)上樣的方式達(dá)不到理想的效果。因此采用干法上樣。將活化后的樹(shù)脂裝柱(邊攪拌邊倒入)，用洗耳球?qū)⒅?Φ30 mm)敲緊，乙醇-水梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?50 mL(兩倍床層體積)4%乙醇-水、250 mL 8%乙醇-水，250 mL 12%乙醇-水，350 mL 16%乙醇-水，250 mL 20%乙醇-水，250 mL 24%乙醇-水，每50 mL收集一次餾分，利用HPLC檢測(cè)洗脫液中佛波醇的含量(md)，并繪制以洗脫液體積(Vd)為橫坐標(biāo)的洗脫曲線(圖5)。

由圖5可知，佛波醇主要在12%，16%乙醇-水洗脫劑中富集，餾分液相結(jié)合色譜圖(圖6)可以看出，經(jīng)洗脫后，佛波醇既能得到有效的富集，也能保證與雜質(zhì)完全分離。最終實(shí)驗(yàn)收集650～1 000 mL部分的餾分，回收率為62.16%。

Vd/mL圖5 D101樹(shù)脂梯度洗脫曲線Fig.5 D101 resin gradient elution curve

t/min圖6 650～1 100 mL餾分液相色譜圖Fig.6 HPLC of 650-1 100 mL fractions in the eluent

2.4.3 大孔樹(shù)脂分離梯度洗脫工藝放大

為提高分離過(guò)程中的處理量，在固定高徑比和流速的條件下，采用直徑更大的層析柱(Φ45 mm)進(jìn)行放大實(shí)驗(yàn)。梯度洗脫程序中各個(gè)濃度的洗脫劑體積對(duì)應(yīng)床層體積比(1：3.38)增加，洗脫程序?yàn)椋?50 mL(兩倍床層體積)4%乙醇-水、850 mL 8%乙醇-水、850 mL 12%乙醇-水、1350 mL 16%乙醇-水、850 mL 20%乙醇-水。

在固定高徑比、流速，增大樹(shù)脂用量和上樣量的情況下，進(jìn)行梯度洗脫，洗脫曲線和分離效果具有很高的重現(xiàn)性。

2.5 后處理

利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在70 ℃下除去餾分中的溶劑，加入60 mL丙酮，攪拌，色素與雜質(zhì)溶于丙酮，佛波醇在丙酮中的溶解度不大，會(huì)以沉淀的形式存在，抽濾得到的佛波醇固體放置在50 ℃烘箱中干燥6 h得到黃白色粉末樣品，置于4～8 ℃冰箱中密封保存，以V(水)：V(丙酮)=2：8混合溶液作為溶劑，45 ℃下加熱將樣品完全溶解，4 ℃下佛波醇冷卻析出，抽濾，于50 ℃烘箱中干燥8 h，得到佛波醇產(chǎn)品(如圖7所示)，經(jīng)HPLC分析，測(cè)得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為91.08%。

圖7 佛波醇產(chǎn)品照片F(xiàn)ig.7 Photography of phorbol product

3 結(jié)論

根據(jù)靜態(tài)吸附解吸實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇NKA-Ⅱ、ADS-800、ADS-7、D101對(duì)佛波醇進(jìn)行純化。在實(shí)際分離過(guò)程中，NKA-Ⅱ、ADS-800、ADS-7大孔樹(shù)脂柱層析分離效果不佳，而D101樹(shù)脂能取得很好的分離效果。

根據(jù)動(dòng)力學(xué)擬合結(jié)果表明，一級(jí)動(dòng)力學(xué)擬合曲線的相關(guān)系數(shù)大于二級(jí)動(dòng)力學(xué)擬合曲線的相關(guān)系數(shù)，證明D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附過(guò)程主要受物理吸附的影響。由Freundlich、Langmuir方程擬合曲線得出D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇具有良好的吸附能力，且D101樹(shù)脂對(duì)佛波醇的吸附是各處吸附能相同的單分子層等溫吸附。

實(shí)驗(yàn)中采用乙醇-水梯度洗脫方式、干法上樣，對(duì)佛波醇粗品進(jìn)行分離，取得了很好的分離效果，且回收率較高(62.16%)，再經(jīng)后處理，得到佛波醇產(chǎn)品，HPLC測(cè)得質(zhì)量分?jǐn)?shù)為91.08%。

本文采用大孔吸附樹(shù)脂柱層析的方法，以乙醇-水為溶劑系統(tǒng)，通過(guò)梯度洗脫的方法可實(shí)現(xiàn)快速分離，得到純度較高的佛波醇。與傳統(tǒng)硅膠柱層析分離方法相比，本文的分離方法不使用低沸點(diǎn)有機(jī)溶劑，所以更加綠色安全。在后續(xù)的研究中，我們將進(jìn)一步擴(kuò)大分離規(guī)模，優(yōu)化后續(xù)處理方法，希望得到純度更高的產(chǎn)品。