白芍不同炮制品中5種成分差異研究

王新民　王晴　馮杰　魏志華

摘要：采用高效液相法（HPLC）測定了白芍生品及5種炮制品（清炒白芍、醋制白芍、酒制白芍、土炒白芍和麩炒白芍）中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟羌皟翰杷氐?種成分含量，結(jié)果表明白芍生品中芍藥苷含量高于其他炮制品含量，其高低順序為生品>酒制品>醋炒品>麩炒品>清炒品>土炒品，而白芍生品中芍藥內(nèi)酯苷含量低于其他炮制品;清炒白芍中沒食子酸含量最大為0.132%，酒制白芍中含量最小為0.106%，其含量順序為清炒品>麩炒品>土炒品>醋炒品>生品>酒制品;白芍生品中1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛孔畹停?.259%），而酒制白芍中最高（0.297%），其含量順序為酒制品>炒制品>麩制品>醋制品>土制品>生品;所有炮制品中兒茶素含量變化不大。

關(guān)鍵詞：白芍;炮制;HPLC;成分檢測

中圖分類號： 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A? 文章編號：

白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根，廣泛應(yīng)用于人及動物疾病的治療，但需經(jīng)炮制后入藥;其炮制方法多樣，常用炮制品有生白芍、清炒白芍、酒炙白芍、醋炙白芍、麩炒白芍、土炒白芍、硫磺熏蒸以及發(fā)酵等多種，不同的炮制方法對其化學(xué)成分會產(chǎn)生不同的影響，從而影響其臨床療效;2020版《中華人民共和國藥典》對生白芍、炒白芍和酒白芍有較完善的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，但對其炮制品沒有明確的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，容易造成炮制品在臨床應(yīng)用時質(zhì)量參差不齊，炮制品質(zhì)量難以得到保證。本研究通過對不同炮制品中多種標(biāo)示性成分進(jìn)行定量檢測，以期為白芍炮制加工提供依據(jù)，同時為完善白芍不同炮制品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供些許參考。

1儀器與材料

實驗所用主要儀器有Waters-e2695高效液相色譜儀、BSA224S-CW十萬分之一分析天平（賽多利斯特科學(xué)儀器有限公司）、FL-1封閉電爐、SC-1000Y型高速多功能粉碎機、101-3A型電熱鼓風(fēng)干燥箱、KQ-100DB型數(shù)控超聲波清洗器以及鐵鍋等。藥材及試劑有白芍生品（購于鄭州瑞龍飲片公司）、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛蛢翰杷氐葘φ掌罚ň徲谏虾Ｔ慈~生物科技有限公司）、黃土、麩皮、黃酒、白醋、甲醇（色譜純，3000 mL，Thermo Fisher Scientific Inc.），乙腈（色譜純，3000 mL，Thermo Fisher Scientific Inc.）、娃哈哈純凈水、乙醇及磷酸等。白芍炮制品及炮制方法見表1。將白芍生品及其5種炮制品放涼，使用高速多功能粉碎機將其粉碎后，過60目篩，裝入分裝袋，標(biāo)記，備用。

2樣品的制備

2.1 對照品溶液的制備

用十萬分之一分析天平分別精密稱取干燥至恒重的芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛蛢翰杷氐葘φ掌愤m量于6個10mL棕色容量瓶中，加75%甲醇溶解并定容，制成對照品儲備液;取各對照品儲備液配制成每1 mL含芍藥苷50.10 μg、芍藥內(nèi)酯苷50.20 μg、沒食子酸50.10μg、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟?0.10μg和兒茶素50.20 μg的混合對照品溶液，于4℃冰箱保存，上機測定前用0.22 μm微孔濾頭濾過。

2.2 供試品溶液的制備

分別取白芍生品及其5種炮制品粉末各0.1 g，精密稱定，分別倒入6個50 mL容量瓶中，向容量瓶中各加入稀乙醇溶液35 mL，使用超聲儀超聲30 min，溫度設(shè)定為30℃，然后放入離心機中進(jìn)行離心，取上清液轉(zhuǎn)移至容量瓶中，加稀乙醇定容，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，即得，保存于4℃冰箱。上機測定前用0.22μm微孔濾頭濾過。

3含量測定

3.1 色譜條件

GS-120-5-C-A色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相采用0.1%磷酸溶液（A）和乙腈（B），檢測波長設(shè)置為230nm，柱溫為30℃，流速為1.0 mL/min，進(jìn)樣量為10 μL;梯度洗脫程序為0～5 min，10%～15% B，5～25 min，15%～25% B，25～45 min，25%～65% B;理論板數(shù)按芍藥苷峰計算應(yīng)不低于2000。

3.2方法學(xué)考查

3.2.1穩(wěn)定性試驗

制備芍藥生品溶液后0、6、12、24和48 h，按照“3.1”項色譜條件分別測定芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛蛢翰杷氐?種成分，根據(jù)色譜參數(shù)，計算5種成分峰面積的RSD分別為1.36%、1.78%、1.69%、0.94%和1.68%。表明48 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定性良好。

3.2.2 精密度試驗

按照“3.1”項色譜條件進(jìn)樣測定芍藥苷對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)色譜峰參數(shù)，計算其峰面積的RSD為0.58%;同樣方法得對照品芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛蛢翰杷胤迕娣eRSD分別為0.76%、0.62%、0.88%和0.76%，均小于3%，表明HPLC儀器精密度良好。

3.2.3重復(fù)性試驗

按照“3.1”項色譜條件進(jìn)樣測定制備好的芍藥生品溶液6次，根據(jù)色譜參數(shù)，計算5種成分峰面積的RSD分別為2.18%、2.42%、1.85%、1.79%和1.88%，均小于3%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.2.4線性關(guān)系考察

芍藥苷對照品溶液稀釋處理后，按照其濃度的0.1、0.4、0.8、1.2、1.6和2.0倍依次上機，得到進(jìn)樣量X與峰面積Y的關(guān)系方程式為Y = 13469.568X-146.328，r = 0.9992，表明芍藥苷在0.1000 -1.2000 mg間成良好的線性關(guān)系;同樣方法得到對照品芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子酰基葡萄糖和兒茶素進(jìn)樣量X與峰面積Y的關(guān)系方程式分別為Y = 11398.684X-310.248（r = 0.9995）、Y = 10529.443X-136.448（r = 0.9992）、Y = 10785.426X-144.398（r = 0.9996）和Y = 10875.523X-156.287（r = 0.9994），其進(jìn)樣量和峰面積之間均為良好線性關(guān)系。

3.3 含量測定

將對照品和供試品溶液用0.22μm微孔有機濾頭濾過，分別注入高效液相色譜儀，得到HPLC色譜圖，根據(jù)色譜峰面積，利用外標(biāo)一點法計算各成分含量。

4 結(jié)果與分析

利用HPLC法測定白芍生品及5種白芍炮制品中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸、1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛蛢翰杷氐暮?，結(jié)果見表2。

4.1芍藥苷含量

由表2知，所有白芍供試品中，芍藥苷含量均大于1.6%，符合《中華人民共和國藥典》2020年版規(guī)定的白芍質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。白芍生品中芍藥苷含量高達(dá)2.98%，高于供試品中其他炮制品含量，說明白芍生品在不同的炮制過程中，芍藥苷均有不同程度的損失，其機制可能有兩種，一種是炮制過程中的高溫加熱條件使得芍藥苷部分分解，另一種可能是芍藥苷與炮制輔料發(fā)生反應(yīng)而損失。芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)從高到低順序為生品>酒制品>醋炒品>麩炒品>清炒品>土炒品，該趨勢與連德明、劉素香等研究結(jié)論相似，而連德明研究報道中所測定白芍生品中芍藥苷最高含量為1.95%，酒白芍中為1.92%。遠(yuǎn)低于本實驗相應(yīng)炮制品中芍藥苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)。芍藥苷作為《中華人民共和國藥典》2020年版收載白芍藥材的指標(biāo)性成分，其炮制工藝對其含量影響較大，所以制定炮制加工標(biāo)準(zhǔn)對中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定有重要意義。

4.2 芍藥內(nèi)酯苷含量

供試品中醋制品所含芍藥內(nèi)酯苷最多，麩制品中芍藥內(nèi)酯苷含量與其無差別，其次是酒制品、炒制品、土制品，而白芍生品中芍藥內(nèi)酯苷最少（見表2）。白芍經(jīng)炮制后，其臨床效果存在變化，與藥物本身成分含量變化相關(guān)。白芍生品中芍藥苷含量較高，而經(jīng)炮制后白芍炮制品酸性和寒性降低，具有了抗驚厥、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜之效，而該藥效正是芍藥內(nèi)酯苷所具有，推測可能是白芍生品中芍藥苷經(jīng)炮制后，促進(jìn)了芍藥內(nèi)酯苷成分含量的增加。劉素香等通過采用HPLC法測定白芍及其炮制品中芍藥內(nèi)酯苷含量，整體小于本次試驗測定結(jié)果，芍藥生品中芍藥內(nèi)酯苷含量最低，與本試驗結(jié)果一致;而土炒品中含量最高，麩炒品大于酒制品和醋炒品，與本試驗結(jié)論相左。由于本試驗和劉素香等測定方法相似，所以，造成結(jié)果不同的原因應(yīng)歸因于炮制過程中，而炮制方法、輔料成分、熱量等因素的差異，使得部分芍藥苷轉(zhuǎn)化為芍藥內(nèi)酯苷時比例不同。

4.3沒食子酸與1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛?/p>

白芍生品中沒食子酸含量為0.116%，高于酒制白芍，而低于其他炮制品，其中清炒白芍中沒食子酸含量最大為0.132%，而酒制白芍中含量僅為0.106%;沒食子酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)從高到低順序為清炒品>麩炒品>土炒品>醋炒品>生品>酒制品，該趨勢與于定榮等報道相似，而其研究結(jié)果中相應(yīng)炮制品沒食子酸含量均低于本實驗所測數(shù)據(jù)。沒食子酸是一種有機酸，易溶于醇，在酒制過程中，高溫條件下，可能會失去二氧化碳成焦性沒食子酸，使得檢測時沒食子酸含量降低。全部炮制品中的1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛烤劝咨稚犯撸浦瓢咨种?，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛孔罡邽?.297%，說明炮制過程中，輔料、溫度等因素促進(jìn)了1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟堑娜艹龌蛘呱?，其機制有待進(jìn)一步研究;其質(zhì)量分?jǐn)?shù)順序為酒制品>炒制品>麩制品>醋制品>土制品>生品。

4.4兒茶素含量

白芍生品、清炒白芍和土炒白芍中兒茶素含量均為0.035%，低于酒制白芍、麩炒白芍和醋制白芍，而后三者中兒茶素含量接近，本試驗中所用白芍生品直接購買于藥店，無白芍藥材，沒有測定白芍藥材中兒茶素含量。于定榮等研究證明白芍藥材（含兒茶素較高）切制后（為白芍生品），兒茶素含量明顯降低，而白芍生品炒制后含量基本保持不變，酒制和醋制后兒茶素含量均明顯增加，但沒有到達(dá)白芍藥材含量值。究其原因可能是兒茶素不穩(wěn)定，白芍藥材中含量較高，切制時，高溫使其分解，使得白芍生品中含量偏低;后經(jīng)輔料催化，在加熱條件下，兒茶素分解物又可能重新合成了部分兒茶素，具體機制可做更深層次研究。

5 結(jié)論與討論

中藥炮制是否得法對中藥藥效影響很大，在炮制過程中其諸多成分會發(fā)生變化，有些成分含量會增加或減少，甚至消失，有些成分可能是新生成物。因此，研究中藥炮制前后理化性質(zhì)的變化以及同種中藥不同炮制品的理化性質(zhì)的差異，對探討中藥炮制作用和原理具有重要意義。通過本次研究結(jié)果可看出，白芍炮制品中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、沒食子酸及1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟呛烤l(fā)生了不同程度的改變，原因除了與各成分自身物化特性有關(guān)外，輔料成分、用量、溫度及炒制火候的把握等炮制方法也起到關(guān)鍵性作用，比如芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷及兒茶素等成分易溶于水或醇等，在炒制（加熱）過程中不穩(wěn)定發(fā)生分解。所以，加強白芍炮制方法的規(guī)范與統(tǒng)一，有利于實現(xiàn)其飲片質(zhì)量控制，從而保障其質(zhì)量與臨床安全用藥。

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基金項目： 河南省教育廳重點項目（19B360002）;河南牧業(yè)經(jīng)濟學(xué)院院級重點培育學(xué)科-中獸藥生藥學(xué)項目（41000003）

作者簡介： 王新民（1970—），男，河南虞城人，博士，副教授，從事中藥制劑分析教學(xué)及相關(guān)科研工作