異常表達(dá)CD13的B細(xì)胞惡性腫瘤患者形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果分析

劉訓(xùn)濤，王 霞，趙 飛，郭迪媛，張 斌

（河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院檢驗科，河北 張家口 075000）

CD13（氨肽酶N）作為粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的標(biāo)記被廣泛使用。CD13的表達(dá)在淋巴細(xì)胞的造血干細(xì)胞早期可以被觀察到，但隨著淋巴細(xì)胞的成熟而逐漸消失。有研究結(jié)果顯示，急性B淋巴（母）細(xì)胞白血病（acute B-lymphocytic leukemia，B-ALL）患兒和少數(shù)成熟B細(xì)胞惡性腫瘤患者CD13異常表達(dá)[1]。本研究回顧性分析18例異常表達(dá)CD13的B細(xì)胞惡性腫瘤患者形態(tài)學(xué)和流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果，以提高該類疾病的診斷率。

1 材料和方法

1.1 研究對象

選取2016年9月—2019年11月河北北方學(xué)院附屬第一醫(yī)院血液科經(jīng)MICM分型標(biāo)準(zhǔn)診斷為異常表達(dá)CD13的B細(xì)胞惡性腫瘤的患者18例，其中男9例、女9例，年齡19～80歲，包括B-ALL 12例、慢性B淋巴細(xì)胞白血?。╟hronic B-lymphocytic leukemia，B-CLL）5例、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥（Waldenstr?m'macroglobulinemia，WM）1例。

1.2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測

將18例患者骨髓涂片標(biāo)本經(jīng)瑞氏染色后，顯微鏡鏡檢200個細(xì)胞；同時進(jìn)行組織化學(xué)染色，再行顯微鏡鏡檢。

1.3 免疫分型檢測

取乙二胺四乙酸抗凝骨髓樣本1.5～2.0 mL，分離單個核細(xì)胞，采用四色免疫熒光標(biāo)記[異硫氰酸熒光素/藻藍(lán)蛋白/藻紅蛋白/CD45多甲藻黃素-葉綠素-蛋白質(zhì)復(fù)合物]。所用抗體包括：B系列CD19、CD9、CD10、 CD20、CD22、CD23、Kappa、Lambda、cyCD79a，T系列CD2、 CD5、CD7、cCD3，髓系CD13、CD117、CD33、cMPO，非系列標(biāo)志CD34、 CD38、HLA-DR（美國BD公司）。采用FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測（美國BD公司）。

1.4 診斷標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)胞形態(tài)學(xué)分析參考2015年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（the International Council for Standardization in Haematology，ICSH）標(biāo)準(zhǔn)和法國、美國 、英國（French-American-British，F(xiàn)AB） 標(biāo)準(zhǔn)，流式細(xì)胞免疫分型分析參考?xì)W洲白血病免疫學(xué)分型協(xié)作組（European Group for the Immunological Classification of Leukemias，EGIL）標(biāo)準(zhǔn)[2]。

2 結(jié)果

2.1 形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果

12例B-ALL患者胞核不規(guī)則，呈扭曲折疊，染色質(zhì)疏松，核仁1～2個，胞質(zhì)豐富，部分可見空泡，呈灰藍(lán)色或灰紅色，胞質(zhì)中可見細(xì)小的紫紅色顆粒，具有較高異質(zhì)性（圖1），形態(tài)學(xué)誤診率為41.6%，流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果CD13呈較強(qiáng)表達(dá)（32.47%～98.73%，圖2），CD34占52.64%～96.85%（表1），側(cè)向散射（side scatter，SSC）呈不均一表現(xiàn)，等高線圖顯示呈斜形擴(kuò)散（圖3、圖4）。5例B-CLL患者CD13占33.35%～70.97% ；1例WM患者CD13占20.11%，其共同特點為胞質(zhì)中存在細(xì)小的紫紅色顆粒（圖5），SSC呈不均一表現(xiàn)。

圖1 原始細(xì)胞形態(tài)（×1 000）

圖2 B-ALL異常表達(dá)CD13流式散點圖

圖3 B-ALL患者CD13異常表達(dá)散點圖和等高線圖

圖4 B-CLL異常表達(dá)CD13的細(xì)胞形態(tài)（×1 000）

圖5 WM異常表達(dá)CD13的細(xì)胞形態(tài)（×1 000）

表1 12例B-ALL患者檢測與診斷結(jié)果

2.2 免疫分型結(jié)果

B-ALL患者免疫表型為CD34、CD38、HLADR、CD19、CD22、CD9、cCD79a陽性，異常表達(dá)CD13；CLL患者免疫表型為HLA-DR、CD19、CD5、CD20、CD22、CD9、cCD79a陽性，異常表達(dá)CD13；WM患者免疫表型為CD38、HLA-DR、CD19、CD5、CD20、CD22、CD9、cCD79a、 CD25陽性，異常表達(dá)CD13。

12例B-ALL患者中，1例EVI1陽性，1例MLL/AF4陽性，1例HOX11陽性，有2例患者入院5 d內(nèi)死亡，未行基因型檢測，其他7例患者均為BCR-ABL1（P210）陽性；5例B-CLL患者和1例WM患者未行基因檢測。

3 討論

骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類是診斷B細(xì)胞惡性腫瘤的重要方法。本研究異常表達(dá)CD13的12例B-ALL患者中，骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果均顯示骨髓增生極度活躍，細(xì)胞胞體體積中等或較大，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，胞核較疏松，呈粗顆粒感，胞核不規(guī)則，呈現(xiàn)出扭曲折疊，染色質(zhì)疏松，核仁1～2個易見，胞質(zhì)量豐富，部分可見空泡，因為顆粒的存在，胞質(zhì)顏色呈灰藍(lán)色或灰紅色，顆粒分布不均，顆粒顏色、大小與原始粒細(xì)胞非特異性顆粒相似，較難區(qū)分，與文獻(xiàn)報道[3]一致。細(xì)胞胞核顆粒感、染色質(zhì)疏松程度、胞質(zhì)顏色和形態(tài)、是否有空泡、胞質(zhì)中出現(xiàn)顆粒是分辨原始淋巴細(xì)胞和髓系原始細(xì)胞的重要鑒別點，B-ALL患者細(xì)胞異質(zhì)性改變和胞質(zhì)中出現(xiàn)異常的細(xì)小顆粒給形態(tài)學(xué)檢測人員帶來了挑戰(zhàn)，極易造成誤診，本實驗室形態(tài)學(xué)診斷率為59.4%，低于崔華等[1]對異常表達(dá)的B-ALL的診斷率（84.4%），可能與實驗室異常表達(dá)病例數(shù)較少有關(guān)，隨著經(jīng)驗的積累，診斷率會逐步提高。

本研究結(jié)果顯示，CD13占32.47%～98.73%，但呈強(qiáng)表達(dá)，與髓系CD13表達(dá)相似，SSC呈不均一性表現(xiàn)，與部分混合白血病[4]特點類似，但未達(dá)到診斷標(biāo)準(zhǔn)；還發(fā)現(xiàn)等高線圖整體出現(xiàn)斜形趨勢，非常接近髓系白血病SSC的特點（呈不均一表現(xiàn)），但B-ALL異常表達(dá)CD13圖形中，SSC起點較髓系SSC起點小，可能與其胞質(zhì)中顆粒較小有關(guān)。成熟淋巴增殖性疾病流式細(xì)胞術(shù)檢測很少加入髓系抗體，我們在觀察患者外周血時發(fā)現(xiàn)大量異型淋巴細(xì)胞，抽取骨髓染色后發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)中存在異常的細(xì)小紫紅色顆粒，考慮到異常表達(dá)CD13的B-ALL胞質(zhì)中出現(xiàn)同樣細(xì)小紫紅色顆粒情況，加做了髓系相關(guān)標(biāo)記，發(fā)現(xiàn)了5例B-CLL和1例WM異常表達(dá)CD13的情況。RAIMBAULT等[5]在對3個中心的1 037例B淋巴慢性增殖疾病患者CD13表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)，CD13的表達(dá)與WM的診斷有顯著相關(guān)性，CD13可能在IgM副蛋白分泌中起作用。鑒于AGARWAL等[6]提出骨髓微環(huán)境在WM發(fā)病機(jī)制中具有重要意義，CD13可能在淋巴漿細(xì)胞與基質(zhì)的相互作用中發(fā)揮重要作用，與漿細(xì)胞分化有關(guān)。

綜上所述，細(xì)胞胞核考慮淋系但胞質(zhì)出現(xiàn)異常顆粒，應(yīng)考慮淋系異常表達(dá)CD13，可降低誤診率；CD13在成熟淋巴細(xì)胞增殖性疾病中的表達(dá)可能與其功能有關(guān)。