注射用右雷佐生與幾種配伍溶媒的穩(wěn)定性考察

宗在偉，田帥華，劉紅偉，王押林，張高雅，陳虹宇*

1 江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司，211112；2 南京醫(yī)科大學，210029

右雷佐生（曾用名右丙亞胺），是消旋雷佐生（又名丙亞胺）的D-異構體，是螯合劑乙二胺四乙酸（EDTA）的親脂性衍生物。右雷佐生是目前唯一獲批的可以有效預防蒽環(huán)類藥物心臟毒性的保護劑，目前已在美國、歐盟等臨床上廣泛應用，其保護機制主要是通過減少氧自由基的產(chǎn)生、降低脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物含量和減輕心肌細胞凋亡[1-3]。循證醫(yī)學顯示，鐵螯合劑右雷佐生是唯一可以有效預防蒽環(huán)類藥物導致心臟毒性的藥物。右雷佐生已獲美國FDA授予孤兒藥地位和優(yōu)先審評資格，主要用于降低晚期乳腺癌患者多柔比星治療所致心肌病的發(fā)生率和嚴重程度，適用于接受多柔比星累積劑量達到300 mg·m-2且需繼續(xù)使用多柔比星的患者。國內(nèi)多中心Ⅱ期臨床試驗也證實右雷佐生對由多柔比星引起的心臟毒性具有明顯的保護作用。目前，右雷佐生已獲國內(nèi)外多個權威指南推薦用于降低蒽環(huán)類藥物的心臟毒性，如《美國腫瘤化療及放療保護劑臨床操作指南（2008 年）》、《NCCN 臨床實踐指南：老年腫瘤（2016.V2）》、《NCCN 臨床實踐指南：非霍奇金淋巴瘤（2019）》和中國《蒽環(huán)類藥物心臟毒性防治指南（2020 年）》等。

目前注射用右雷佐生僅兩家公司獲批在國內(nèi)上市，分別為江蘇奧賽康藥業(yè)（規(guī)格250 mg 和500 mg）和南京海潤醫(yī)藥有限公司（規(guī)格250 mg）；尚未有國外企業(yè)取得注射用右雷佐生進口上市批準。

在注射用右雷佐生原研產(chǎn)品Zinecard?說明書中，配伍溶媒為乳酸鈉林格注射液，且并未推薦其他溶媒。而于2014 年在日本上市的注射用右雷佐生，商品名SAVENE?說明書中指出，注射用右雷佐生的溶媒可為0.9%氯化鈉注射液、乳酸鈉林格注射液或5%葡萄糖注射液。國內(nèi)目前上市的注射用右雷佐生說明書規(guī)定與原研產(chǎn)品相同，即使用乳酸鈉林格注射液為溶媒；但目前乳酸鈉林格注射液在國內(nèi)普及度較差，近五成醫(yī)院無此品，難以充分滿足臨床患者用藥的需求。醋酸鈉林格注射液與乳酸鈉林格注射液化學組成相似，可以考慮作為乳酸鈉林格注射液的潛在替代溶媒。

本研究擬采用注射用右雷佐生與醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液進行配伍，于室溫和冷藏（2～8 ℃）兩個條件，進行配伍溶液穩(wěn)定性研究，并與乳酸鈉林格注射液配伍后溶液的穩(wěn)定性進行對比，以評估使用醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液替代乳酸鈉林格注射液的可行性。結(jié)合本品關鍵質(zhì)量屬性，從有關物質(zhì)、可見異物、不溶性微粒、溶液澄清度與顏色、pH 等角度進行評估，比較幾種不同溶媒配伍溶液穩(wěn)定性的差異，為臨床安全用藥提供依據(jù)。經(jīng)文獻調(diào)研，國內(nèi)外均無關于注射用右雷佐生質(zhì)量標準的相關報道，該品種也未收錄于國內(nèi)外各國藥典標準，因此選擇本公司獲得國家藥品監(jiān)督管理局批準的藥品注冊標準作為本品配伍后溶液穩(wěn)定性評價的標準。

1 儀器與藥品、試劑

1.1 儀器

SevenExcellence pH 計（瑞士梅特勒-托利多公司）；不溶性微粒儀、澄明度檢測儀（天津天大天發(fā)科技公司）；Agilent 1260 高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Waters Acquity Arc 高效液相色譜儀。

1.2 藥品與試劑

注射用右雷佐生（規(guī)格250 mg，江蘇奧賽康藥業(yè)有限公司）；醋酸鈉林格注射液（湖北多瑞藥業(yè)有限公司）；乳酸鈉林格注射液，0.9%氯化鈉注射液，5%葡萄糖注射液（均安徽雙鶴藥業(yè)）。

甲醇、鹽酸為色譜純；磷酸二氫鉀為AR 級。

2 方法與結(jié)果

2.1 配伍溶液的制備

2.1.1 溶媒為乳酸鈉林格注射液和醋酸鈉林格注射液配伍溶液 采用注射用右雷佐生注射液說明書中的配伍用法，先用25 mL 注射用水將注射用右雷佐生復溶成濃度為10 mg·mL-1溶液，參照本品說明書中載明的配伍溶液的濃度范圍，再用乳酸鈉林格注射液將復溶溶液稀釋成濃度為1.3 mg·mL-1（溶液A）和3.0 mg·mL-1（溶液B）配伍溶液，或用醋酸鈉林格注射液將復溶溶液稀釋成濃度為1.3 mg·mL-1（溶液C）和3.0 mg·mL-1（溶液D）配伍溶液，測定室溫下0、1、2 h 和2～8 ℃下0、2、4、6 h 溶液有關物質(zhì)、相對含量、可見異物、不溶性微粒、溶液澄清度與顏色、pH 值。

2.1.2 溶媒為0.9%氯化鈉注射液及5%葡萄糖注射液配伍溶液 參照日本上市的注射用右雷佐生注射液說明書的配伍用法，先用25 mL 注射用水將注射用右雷佐生復溶成濃度為10 mg·mL-1溶液，在本品說明書載明的配伍溶液的濃度范圍的基礎上，擴大濃度考察范圍至（1.0～5.0）mg·mL-1，用0.9%氯化鈉注射液將復溶溶液稀釋成濃度為1.0 mg·mL-1（溶液E）和5.0 mg·mL-1（溶液F）配伍溶液，或用5%葡萄糖注射液將復溶溶液稀釋成濃度為1.0 mg·mL-1（溶液G）和5.0 mg·mL-1（溶液H）配伍溶液，測定指標同“2.1.1”。

2.2 考察指標與判定標準

參照《中國藥典》2020 年版四部通則0102[5]注射劑項下相關規(guī)定，結(jié)合本公司最新獲批注射用右雷佐生國家藥品注冊標準（標準號：YBH15392021），對配伍后溶液進行有關物質(zhì)、可見異物、不溶性微粒、溶液澄清度與顏色及pH 的考察。各項考察指標均應符合注射用右雷佐生國家藥品注冊標準（標準號：YBH15392021）。

2.3 考察方法

2.3.1 pH值參照《中國藥典》2020 年版四部通則0631[4]，測定“2.1”項下配伍溶液在室溫下0、1、2 h和2～8 ℃下0、2、4、6 h 的pH 值。表明在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，配伍溶液A～H 的pH 值均保持穩(wěn)定。見表1。

表1 注射用右雷佐生與不同溶媒配伍在室溫和2～8 ℃條件下pH 值

2.3.2 可見異物和不溶性微粒 參照 《中國藥典》2020 年版四部通則0904 和0903[4]，測定“2.1”項下配伍溶液室溫下0、1、2 h 和2～8 ℃下0、2、4、6 h 的可見異物和不溶性微粒。在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h內(nèi)，配伍溶液均保持澄清，無肉眼可見漂浮物、混懸物等。按照《中國藥典》2020 年版不溶性微粒光阻法測定要求，測定直徑≥10 μm 和25 μm 的顆粒，在每個時間點，每次取配伍溶液1 mL，測定4 次，棄去第一次結(jié)果，后3 次平均值帶入計算，溶液中微粒直徑≥10 μm 應少于6000 粒，≥25 μm 應少于600粒，在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，配伍溶液A～H 不溶性微粒均在規(guī)定范圍內(nèi)。見表2。

表2 注射用右雷佐生與不同溶媒配伍在室溫和2～8 ℃條件下不溶性微粒

2.3.3 溶液澄清度與顏色 參照 《中國藥典》2020年版四部通則0902 和0901[4]，測定“2.1”項下配伍溶液室溫下0、1、2 h 和2～8 ℃下0、2、4、6 h 的溶液澄清度與顏色。在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，配伍溶液A～H 均保持澄清透明。顏色與《中國藥典》規(guī)定標準橙黃色色號依次對比，配伍溶液A～H 顏色均不深于橙黃色1 號標準比色液。

2.4 有關物質(zhì)測定

2.4.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相A：0.01 mol·L-1磷酸鹽緩沖液，流動相B：甲醇（梯度洗脫：0～15 min，100%A；15～45 min，100%→70%A；45～50 min，70%A；50～50.01分鐘70%→100%A；50.01～60 min，100%A）；檢測波長：210 nm；流速：1.0 mL·min-1；進樣量：10 μL。稀釋液：0.1 mol·L-1鹽酸溶液。

2.4.2 對照品溶液制備 精密稱取右雷佐生對照品適量，用0.1 mol·L-1鹽酸溶液溶解并稀釋，制成濃度為1.0 mg·mL-1的對照品溶液。

2.4.3 專屬性試驗 精密量取“2.4.2”項下對照品溶液，0.1 mol·L-1鹽酸溶液、乳酸鈉林格注射液、醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液各10 μL，按“2.4.1”色譜條件進樣測定，見圖1。

圖1 專屬性試驗高效液相色譜圖

結(jié)果表明，0.1 mol·L-1鹽酸溶液和各溶媒對注射用右雷佐生測定無干擾，該方法專屬性良好。

2.4.4 精密度試驗 精密量取“2.4.2”項下對照品溶液10 μL，于同一天內(nèi)，連續(xù)進樣6 次，按“2.4.1”色譜條件進樣測定，測得峰面積RSD%為0.77%。

2.4.5 準確度試驗 精密稱取樣品適量，共9 份，分別精密加入對照品溶液，搖勻。制備成供試品溶液后進樣測定，記錄結(jié)果，并計算回收率，結(jié)果測得回收率在99.51%～100.4%，平均值為99.96%，RSD為0.3%。表明本方法的準確度良好。

2.4.6 配伍溶液穩(wěn)定性考察 取“2.1”項下各溶液10 μL，按“2.4.1”色譜條件進樣測定，計算雜質(zhì)總量。在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ和其他雜質(zhì)總量隨時間變化逐漸緩慢增加，2～8 ℃條件顯著延緩了雜質(zhì)增長程度。見表3～表5。

表3 注射用右雷佐生配伍溶液在室溫和2～8℃條件下雜質(zhì)Ⅰ（%）

3 討論

本研究中對注射用右雷佐生與醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液進行配伍后，對配伍溶液室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，溶液穩(wěn)定性進行了有關物質(zhì)、可見異物、不溶性微粒、溶液澄清度與顏色及pH 的考察，以確定其在相關條件下溶液穩(wěn)定性，并與乳酸鈉林格注射液配伍后溶液的穩(wěn)定性進行對比。結(jié)果表明，配伍溶液C～H 在室溫2 h 內(nèi)和2～8 ℃6 h 內(nèi)，均能在規(guī)定范圍內(nèi)保持穩(wěn)定，且穩(wěn)定性趨勢與配伍溶液A～B 一致，未出現(xiàn)影響質(zhì)量的變化。

表4 注射用右雷佐生配伍溶液在室溫和2～8℃條件下雜質(zhì)Ⅱ（%）

表5 注射用右雷佐生配伍溶液在室溫和2～8 ℃條件下其他雜質(zhì)總量（%）

本研究表明，改變?nèi)苊讲⑽磳ψ⑸溆糜依鬃羯湮槿芤旱姆€(wěn)定性造成影響。影響配伍溶液穩(wěn)定性的主要是放置時間和放置條件。配伍后溶液在室溫條件下2 h 內(nèi)穩(wěn)定，在2～8 ℃條件下6 h 內(nèi)穩(wěn)定。冷藏可使配伍溶液保存時間更長，在臨床使用時，如遇到無法立刻使用的特殊情況，應將注射用右雷佐生的配伍溶液進行冷藏保存。使用不同溶媒出現(xiàn)的配伍溶液pH 值的變化，與相關溶媒的pH 調(diào)節(jié)能力有關；但配伍溶液A～H 的pH 值在考察時間內(nèi)基本無變化，且均符合使用要求，提示配伍溶液穩(wěn)定性并未發(fā)生改變。對有關物質(zhì)進行考察，雜質(zhì)Ⅰ和雜質(zhì)Ⅱ均為體內(nèi)代謝活性成分，不影響體內(nèi)的安全性，雜質(zhì)Ⅰ、雜質(zhì)Ⅱ和其他雜質(zhì)總量均符合本品的質(zhì)量標準。

本研究結(jié)果提示，注射用右雷佐生可與乳酸鈉林格注射液、醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液進行配伍，在說明書規(guī)定的時間和條件內(nèi)使用，均可保障其安全性和有效性。醋酸鈉林格注射液、0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液，均可以替代乳酸鈉林格注射液使用。