二氫楊梅素對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)小鼠心肌纖維化的影響及機(jī)制研究

張?jiān)略拢S曉樂(lè)

1 南通大學(xué)附屬第三醫(yī)院 藥學(xué)部，南通 226001;2 南通大學(xué)藥學(xué)院 藥理系，南通226001

心肌纖維化是與心臟損傷和疾病相關(guān)的常見(jiàn)病理變化。盡管在某些情況下，膠原和其他細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的沉積可能具有一定的保護(hù)作用；但延長(zhǎng)的纖維化通常會(huì)對(duì)心臟功能產(chǎn)生負(fù)面影響，并導(dǎo)致有害的后果。抑制心臟纖維化可以改善心血管疾病、尤其是心衰患者的預(yù)后。二氫楊梅素（DMY）是藤茶中含量最豐富的天然黃酮類(lèi)化合物，具有多種有效的生物和藥理活性。在心血管方面，DMY 能抑制動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成[1]，改善糖尿病小鼠心肌和血管內(nèi)皮功能[2，3]，減輕阿霉素誘導(dǎo)的心臟毒性[4]，改善心肌缺血/再灌注損傷[5]，減輕主動(dòng)脈縮窄引起的心肌肥厚[6]等。DMY 對(duì)心肌纖維化作用及機(jī)制研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究首次采用皮下注射異丙腎上腺素建立小鼠心肌纖維化模型，觀察DMY 對(duì)心肌纖維的防治作用及初步探討其作用機(jī)制，為DMY 在心血管疾病方面的開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)和理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 健康雄性C57BL/6 小鼠，22-25 克，購(gòu)買(mǎi)于南通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)是：SYXK（蘇）2017-0046。

1.1.2 藥品及試劑 DMY 購(gòu)自西安天豐生物科技有限公司，含量為98%，批號(hào)NF-20 151110；美托洛爾（Met）購(gòu)于Selleck 公司；異丙腎上腺素（ISO）購(gòu)于Sigma-Aldrich 公司；乳酸脫氫酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、羥脯氨酸（HYP）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）、丙二醛（MDA）試劑盒均購(gòu)于南京建成生物公司；腫瘤壞死因子α（TNFα）、白介素-6（IL-6）ELISA 試劑盒、組織總蛋白和核蛋白提取試劑盒、BCA 蛋白定量試劑盒均購(gòu)于江蘇海門(mén)碧云天生物技術(shù)研究所；總RNA 提取試劑盒購(gòu)于北京天根生物技術(shù)公司；組蛋白H2A（Histone H2A）抗體（#2578）和核因子紅細(xì)胞素相關(guān)因子2（Nrf2）抗體（#12721）均購(gòu)自美國(guó)Cell signaling 公司；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）抗體（21898-1-AP）、膠原蛋白Ⅰ（Collagen Ⅰ）抗體（67288-1-Ig）、膠原蛋白Ⅲ（Collagen Ⅲ）抗體（22734-1-AP）、平滑肌肌動(dòng)蛋白α（α-SMA）抗體（55135-1-AP）均購(gòu)自中國(guó)ProteinTech 公司；核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB p65）抗體（ab7970），抗體p-Smad2（ab53100）、p-Smad3（ab52903）、Smad2（ab40855）Smad3（ab40854）均購(gòu)自美國(guó)Abcam 公司；抗體GAPDH（kc5G4）購(gòu)自中國(guó)Kangchen 公司；其它試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.1.3 儀器 全套BIO-RAD 電泳及轉(zhuǎn)膜系統(tǒng)（美國(guó)Bio-Rad L 公司）；Synergy H1 全功能微孔板檢測(cè)儀（美國(guó)Bio-TEK 公司）；實(shí)時(shí)定量PCR 系統(tǒng)（Thermo Fisher 公司）；Odyssey 雙色紅外激光成像系統(tǒng)（LI-COR 公司）。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型建立 小鼠背部皮下注射ISO，第1天劑量為5 mg·kg-1·d-1，之后以2.5 mg·kg-1·d-1劑量維持30 天，自由進(jìn)食、給水；正常對(duì)照組小鼠皮下注射相同體積的生理鹽水。小鼠隨機(jī)分為5 組，即正常對(duì)照組、模型組、DMY 高（DMYH，200 mg·kg-1·d-1）、低劑量組(DMYL，100 mg·kg-1·d-1）、陽(yáng)性對(duì)照藥美托洛爾組（50 mg·kg-1·d-1）；每組10 只。各組小鼠均每日灌胃給藥1 次，連續(xù)給藥30 天。藥物混懸于0.5%羧甲基纖維素鈉溶液中。正常對(duì)照組和模型組給予相同體積的溶媒。

建模結(jié)束，取鼠眼眶血與鼠心臟。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)取材 造模結(jié)束前，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食12 h，給以充足的水。取材前，小鼠稱(chēng)重。眼眶取血，將鼠心臟放入冷生理鹽水中洗滌，心臟用濾紙吸干后稱(chēng)重，計(jì)算心重指數(shù)（CWI）。取部分左心室組織置入4%的多聚甲醛中固定待切片染色，其余部分液氮速凍。

CWI（mg·g-1）=全心重/體重

1.2.3 血清中LDH 和CK 含量檢測(cè) 血清中LDH活性測(cè)定采用丙酮酸法，CK 活性測(cè)定采用肌酸顯色法,按照試劑盒說(shuō)明書(shū)配制試劑及操作，分別在波長(zhǎng)440 nm 和660 nm 處測(cè)定血清LDH 和CK 活性。

1.2.4 血清中TNF-α、IL-6 含量檢測(cè) 按照試劑盒說(shuō)明書(shū)用ELISA 法檢測(cè)血清中TNF-α、IL-6 含量。

1.2.5 Masson 染色 小鼠心臟樣本在10%甲醛溶液中固定、石蠟包埋、切片心肌組織進(jìn)行Masson 染色，具體方法參照本研究以往的報(bào)道[7]。用Image J軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，計(jì)算心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）。CVF 為膠原陽(yáng)性藍(lán)色的面積占組織總面積的比值。

1.2.6 心肌組織HYP、MDA、SOD 及GSH-Px 測(cè)定 取適量心肌組織，準(zhǔn)確稱(chēng)重。按照重量體積比1∶9 加入9 倍體積生理鹽水，剪碎組織，冰浴中制備10%組織勻漿，3000 r·min-1離心10 min，取上清液。心肌組織HYP、MDA、SOD、GSH-Px 測(cè)定分別按照相關(guān)檢測(cè)試劑盒的說(shuō)明書(shū)操作。

1.2.7 Western blot 檢測(cè) 組織總蛋白和核蛋白提取，以及BCA 蛋白定量按各自試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。將蛋白樣品配平后加上樣緩沖液，95 ℃、5 min 滅活，備用。按需配制凝膠，加樣后，80 V 電泳至Marker 分離后換100 V 電泳。轉(zhuǎn)膜后，將膜放入封閉液中，4 ℃過(guò)夜。漂洗后，一抗4 ℃孵育過(guò)夜；二抗室溫避光孵育2 h。漂洗后，以紅外激光成像掃描儀掃膜顯影，并用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行灰度分析。

1.2.8 實(shí)時(shí)定量熒光PCR 檢測(cè) 小鼠左心室勻漿后，參照RNA 提取試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，置于實(shí)時(shí)定量PCR 儀中進(jìn)行PCR 檢測(cè)，具體方法參照本研究以往的報(bào)道[7]。以18 s 作為內(nèi)參基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以2-ΔΔCT法計(jì)算基因的相對(duì)表達(dá)量。

引物序列如下：TNF -α：5’ -CGTCAGCCGATTTGCTATCT-3’（Forward）和5’-CGGACTCCGCAAAGTCTAAG -3’（Reverse）；IL -6：5’ -AGTTGCCTTCTTGGGACTGA-3’（Forward）和5’-AGTTGCCTTCTTGGGACTGA -3’（Reverse）；18s：5’ -CGCGGTTCTATTTTGTTGGT-3’（Forward）和5’-AGTCGGCATCGTTTATGGTC-3’（Reverse）。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié)果

2.1 DMY 對(duì)小鼠血清LDH 和CK 的影響

與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血清LDH 和CK 含量均顯著增加（見(jiàn)圖1A 和圖1B）；與模型組相比，給予DMY 高、低劑量及美托洛爾均能顯著降低小鼠血清LDH 和CK 含量，表明DMY 能減輕異丙腎上腺素引起的心肌損傷。

圖1 DMY 對(duì)小鼠血清LDH 和CK 的影響

2.2 DMY 對(duì)小鼠體重和心重指數(shù)的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組小鼠體重未出現(xiàn)顯著性差異（見(jiàn)圖2A）。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠心臟變大，心重指數(shù)（CWI）顯著增加。與模型組相比，給予DMY 高劑量和美托洛爾能顯著降低CWI（見(jiàn)圖2B）。

圖2 DMY 對(duì)小鼠心重指數(shù)的影響

2.3 DMY 對(duì)小鼠心肌纖維化的影響

Masson 結(jié)果顯示，正常對(duì)照組心肌間質(zhì)纖維組織較少，與正常對(duì)照組相比，模型組心肌間質(zhì)可見(jiàn)較多纖維組織（見(jiàn)圖3A）。膠原容積分?jǐn)?shù)CVF 計(jì)算結(jié)果顯示，模型組較正常對(duì)照組顯著增加（見(jiàn)圖3B）。與模型組相比，給予DMY 高、低劑量及美托洛爾能減輕心肌間質(zhì)纖維組織，顯著減少CVF（見(jiàn)圖3A 和圖3B）。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠心肌組織中羥脯氨酸含量顯著增加，而給予DMY 高、低劑量和美托洛爾能顯著降低小鼠心肌組織中羥脯氨酸的含量（見(jiàn)圖3C）。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠心肌組織中Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ和α-SMA 蛋白表達(dá)顯著增高；與模型組相比，給予DMY 高、低劑量和美托洛爾均顯著降低小鼠心肌組織中CollagenⅠ、Collagen Ⅲ和α-SMA 蛋白表達(dá)（見(jiàn)圖3D-F）。

圖3 DMY 對(duì)小鼠心肌纖維化的影響

2.4 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中TGF-β1/Smad 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

與正常對(duì)照組相比，模型組TGF-β1 蛋白表達(dá)顯著增高，同時(shí)TGF-β1 下游信號(hào)通路中Smad2 和Smad3 的磷酸化表達(dá)顯著增高；與模型組相比，給予DMY 高、低劑量和美托洛爾均顯著降低小鼠心肌組織中TGF-β1 蛋白表達(dá)以及Smad2 和Smad3 的磷酸化表達(dá)（見(jiàn)圖4）。

圖4 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中TGF-β1/Smad 信號(hào)通路相關(guān)蛋白表達(dá)的影響

2.5 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中氧化應(yīng)激的影響

與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠心肌組織中MDA 含量顯著增高，抗氧化物酶SOD 和GSH-Px活性顯著降低。與模型組相比，給予DMY 高、低劑量和美托洛爾均顯著減少M(fèi)DA 含量，增強(qiáng)抗氧化物酶SOD 和GSH-Px 活性。Nrf2 是抗氧化信號(hào)通路關(guān)鍵因子，結(jié)果顯示，與正常組相比，模型組小鼠肝臟Nrf2 入核顯著減少，而給予DMY 高、低劑量和美托洛爾均顯著增加Nrf2 的入核（見(jiàn)圖5）。

圖5 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中氧化應(yīng)激的影響

2.6 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中炎癥反應(yīng)的影響

與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠血清中TNFα、IL-6 含量顯著增加，同時(shí)心肌組織中TNF-α、IL-6 mRNA 表達(dá)顯著提高；與模型組相比，給予DMY高、低劑量和美托洛爾均顯著減少血清中TNF-α、IL-6 含量和心肌組織中TNF-α、IL-6 mRNA 表達(dá)。與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠心肌組織中炎癥轉(zhuǎn)錄因子p65-NF-κB 入核顯著增加；與模型組相比，給予DMY 高、低劑量和美托洛爾均顯著減少p65-NF-κB 入核（見(jiàn)圖6）。

圖6 DMY 對(duì)小鼠心肌組織中炎癥反應(yīng)的影響

3 討論

心臟纖維化是幾乎所有類(lèi)型心臟病終末期的特征。心肌細(xì)胞外基質(zhì)的積累導(dǎo)致心律失常和心功能受損的風(fēng)險(xiǎn)增加，最終發(fā)展為心力衰竭。因此，尋找和開(kāi)發(fā)減輕心肌纖維化的藥物對(duì)防治心肌纖維化、降低死亡率具有重要意義[8]。

心臟病的臨床前模型是揭示心臟纖維化發(fā)展過(guò)程中涉及的復(fù)雜發(fā)病機(jī)制的重要工具，進(jìn)而可以確定新的治療靶點(diǎn)和促進(jìn)抗纖維化藥物的發(fā)現(xiàn)。許多臨床前模型已被用于研究心臟纖維化，一般來(lái)說(shuō)，臨床前模型可以根據(jù)誘導(dǎo)方式大致分為手術(shù)誘導(dǎo)、化學(xué)誘導(dǎo)和遺傳模型三大類(lèi)。每種模型都有其自身的優(yōu)勢(shì)和局限性。ISO 皮下注射誘導(dǎo)的心肌纖維化模型優(yōu)勢(shì)在于方法簡(jiǎn)單且無(wú)創(chuàng)接近自然病理進(jìn)程。ISO 作用于β1-腎上腺素受體以增加心臟收縮力和速率，激活腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)，促進(jìn)了心臟肥大和心肌纖維化的發(fā)生發(fā)展[9]，該模型已用于篩選大量植物藥產(chǎn)品及其活性成分[10]。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[11]，本研究采用給小鼠皮下注射ISO 30 d的方法建立小鼠心肌纖維化模型。ISO 模型組小鼠血清LDH 和CK 含量均顯著增加，說(shuō)明ISO 導(dǎo)致了心肌損傷；模型組小鼠心臟變大，CWI 顯著增加，說(shuō)明長(zhǎng)期注射ISO 導(dǎo)致心肌肥大；模型組小鼠心肌間質(zhì)纖維組織顯著增多，反映結(jié)締組織疾病的膠原代謝情況的羥脯氨酸含量顯著增加，提示成功復(fù)制了ISO 致心肌纖維化模型，該方法簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠。在小鼠心肌纖維化模型制備成功的基礎(chǔ)上，觀察了DMY 對(duì)ISO 誘導(dǎo)的心肌纖維化的作用。結(jié)果顯示，DMY 能降低血清LDH 和CK 含量，減輕心肌損傷；降低小鼠CWI 和心肌中羥脯氨酸含量；病理染色結(jié)果顯示，DMY 可以減輕小鼠心肌纖維化程度，降低心肌組織中膠原沉積，具有防治心肌纖維化的作用。

實(shí)驗(yàn)研究已證實(shí)ISO 能通過(guò)多種途徑增加TGF-β1 這一關(guān)鍵的致心肌纖維化細(xì)胞因子的表達(dá)和其在心肌中的含量[9，10]。TGF-β1 能通過(guò)自分泌和旁分泌方式刺激心肌成纖維細(xì)胞增殖，并使心肌成纖維細(xì)胞向α-SMA 高表達(dá)的肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，從而使Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ等膠原蛋白在心肌中大量生成并沉積，許多促纖維化因子均通過(guò)它們起到作用。此外，TGF-β1 還通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響其他細(xì)胞因子，形成細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，使其致纖維化效應(yīng)增強(qiáng)。因此，TGF-β1 過(guò)度表達(dá)在纖維化機(jī)制中起到關(guān)鍵作用，TGF-β1 也多作為治療纖維化病變的靶標(biāo)[12]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DMY 能抑制ISO 導(dǎo)致的小鼠心肌中TGF-β1 蛋白表達(dá)及α-SMA、CollagenⅠ和Collagen Ⅲ蛋白表達(dá)。研究表明，Smad2/3蛋白復(fù)合物是纖維化過(guò)程中TGF-β1 的經(jīng)典的下游靶標(biāo)。過(guò)度的TGF-β1/Smad2/3 信號(hào)或心臟成纖維細(xì)胞中TGF-β1 刺激的長(zhǎng)期效應(yīng)，被認(rèn)為是心臟纖維化的生理、病理基礎(chǔ)[12]。以往實(shí)驗(yàn)已證明，抑制Smad2/3 可抑制心臟成纖維細(xì)胞中的纖維化基因程序和細(xì)胞外基質(zhì)重塑[12]。考慮到這一點(diǎn)，Smad 蛋白亦是減少纖維化的重要靶點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DMY能降低注射ISO 導(dǎo)致的小鼠心肌組織中Smad2 和Smad3 的磷酸化表達(dá)。以上結(jié)果表明，對(duì)TGF-β1/Smad2/3 信號(hào)通路的抑制機(jī)制參與了DMY 減弱心肌纖維化的作用。

氧化應(yīng)激參與心肌梗死后左心室重構(gòu)和心力衰竭的發(fā)生和發(fā)展。這些發(fā)現(xiàn)表明，氧化損傷和纖維化相互作用，并在惡化的心臟重塑過(guò)程中加速結(jié)構(gòu)改變和心室功能障礙?？寡趸瘎┍蛔C明能改善心臟功能并產(chǎn)生抗纖維化作用[13]。大量實(shí)驗(yàn)已證明，ISO 通過(guò)誘導(dǎo)心臟組織中的氧化應(yīng)激而引起毒理學(xué)變化，從而導(dǎo)致抗氧化物酶的消耗，促進(jìn)心肌纖維化的發(fā)生[9，10，13]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，ISO 誘導(dǎo)的小鼠心肌組織中脂質(zhì)過(guò)氧化損傷的生物標(biāo)記物MDA 含量增強(qiáng)，而抗氧化物酶SOD 和GSH-Px 活性顯著降低。而給與DMY 能降低心肌MDA 含量，增強(qiáng)抗氧化物酶SOD 和GSH-Px 活性。Nrf2 通路是抗氧化系統(tǒng)的中心，在心臟病，尤其是心臟纖維化的治療中具有越來(lái)越重要的意義。Nrf2 是一種堿性亮氨酸拉鏈蛋白，調(diào)節(jié)抗氧化蛋白的表達(dá)，防止損傷和炎癥引起的氧化損傷[14]。Nrf2 是一個(gè)復(fù)雜調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的核心，在代謝、炎癥、自噬、蛋白質(zhì)保留、線粒體生理學(xué)和免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著許多重要作用[14]。當(dāng)遇到應(yīng)激條件時(shí)，如氧化應(yīng)激，Nrf2 被人體的防御機(jī)制激活并進(jìn)入細(xì)胞核，增加抗氧化相關(guān)基因、血紅素加氧酶-1、SOD、GSH-Px 和硫氧還蛋白等的轉(zhuǎn)錄。DMY 對(duì)Nrf2 的作用已在不少病理模型上被證實(shí)。比如Tian X 等[15]報(bào)道DMY 可通過(guò)調(diào)節(jié)Nrf2 信號(hào)通路減輕膿毒癥急性腎損傷。Qiu P 等[16]報(bào)道DMY 通過(guò)促進(jìn)Nrf2 核易位對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝損傷具有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，給予ISO 作用的小鼠DMY 能顯著增加Nrf2 的入核。這些結(jié)果提示，DMY 能增強(qiáng)Nrf2 的核轉(zhuǎn)錄，由此推測(cè)增加了抗氧化酶SOD 和GSH-Px 的活性，發(fā)揮抗氧化作用清除ROS，有助于減輕心肌纖維化。

眾所周知，炎癥反應(yīng)在心臟纖維化中起著重要作用。炎癥和氧化應(yīng)激也存在互相影響。炎癥細(xì)胞因子、趨化因子和生長(zhǎng)因子通過(guò)直接作用于成纖維細(xì)胞、刺激成纖維巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的募集和激活，以及觸發(fā)血管細(xì)胞和心肌細(xì)胞中的成纖維程序，參與了心臟纖維化的發(fā)病機(jī)制。此外，長(zhǎng)期慢性炎癥可能導(dǎo)致心肌細(xì)胞壞死，引發(fā)修復(fù)性纖維化。促炎細(xì)胞因子TNF-α、IL-6 的水平在許多與纖維化相關(guān)的心肌病理?xiàng)l件下顯著升高。TNF-α、IL-6 致纖維化作用可能涉及對(duì)成纖維細(xì)胞的直接或間接的作用，與巨噬細(xì)胞的募集、基質(zhì)細(xì)胞蛋白的誘導(dǎo)和具有顯著成纖維細(xì)胞激活特性的生長(zhǎng)因子、如TGF-β1 的上調(diào)有關(guān)[17]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，DMY 能減少I(mǎi)SO 作用的小鼠血清中TNF-α、IL-6 含量和心肌組織中TNF-α 和IL-6 mRNA 表達(dá)。轉(zhuǎn)錄因子NF-κB 控制各種炎癥細(xì)胞因子的誘導(dǎo)。在正常情況下，NF-κB p65 亞單位與其抑制對(duì)應(yīng)物Iκ-Bα和其他IκB 蛋白結(jié)合，形成存在于細(xì)胞質(zhì)中的非活性復(fù)合物。當(dāng)激活后，Iκ-Bα 被磷酸化，導(dǎo)致p65-NF-κB 的激活和移位進(jìn)入細(xì)胞核，在那里它介導(dǎo)炎癥基因如TNF-α、IL-6 的表達(dá)[18]。Zhao Y 等[19]報(bào)道DMY 可通過(guò)抑制NF-κB介導(dǎo)的炎癥和TGF-β1 調(diào)節(jié)的PI3K/Akt 信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)硫代乙酰胺誘導(dǎo)的肝纖維化。Zhou MQ 等[20]報(bào)道二氫楊梅素通過(guò)NF-κB 途徑保護(hù)脂多糖誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞損傷。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在心肌纖維化模型上DMY 可顯著減少p65-NF-κB 入核，減輕炎癥反應(yīng)，亦有助于減輕心肌纖維化。

綜上所述，本研究證明，DMY 能減輕ISO 誘導(dǎo)的小鼠纖維化。DMY 可通過(guò)增強(qiáng)Nrf2 抗氧化信號(hào)通路減輕心肌氧化應(yīng)激，抑制轉(zhuǎn)錄因子p65-NF-κB活化，減輕心肌炎癥反應(yīng)，有助于干預(yù)TGF-β1/Smad2/3 信號(hào)通路的活化，減輕心肌纖維化。這些結(jié)果表明，DMY 可能是預(yù)防和治療心肌纖維化的有前途的候選藥物。