多烯磷脂酰膽堿聯(lián)合雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片對(duì)慢性乙肝肝硬化患者免疫功能的影響

葛苒苒 林秀芳 杜學(xué)峰

1.浙江省臺(tái)州醫(yī)院感染科，浙江臺(tái)州 317000；2.浙江省臺(tái)州醫(yī)院肝膽外科，浙江臺(tái)州 317000

慢性乙肝為乙肝病毒引起的，為慢性傳染性疾病，患者發(fā)生后可出現(xiàn)乏力、肝區(qū)疼痛及惡心等癥狀，且該病的發(fā)展可導(dǎo)致患者出現(xiàn)肝硬化，嚴(yán)重?fù)p壞患者的生命健康。肝硬化為肝衰竭或肝癌前的關(guān)鍵階段，主要表現(xiàn)為肝臟組織壞死、形成假小葉與彌漫纖維化，超過(guò)10%的肝硬化可發(fā)展為肝癌，影響患者的生活質(zhì)量，并威脅患者的生命安全。慢性乙肝肝硬化的治療臨床主要采用抗病毒感染，但此類治療方式需長(zhǎng)期治療，故臨床尋找新的藥物較為重要。多烯磷脂酰膽堿為保護(hù)肝細(xì)胞膜的藥物，具有抗炎保肝的作用。雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片可使患者體內(nèi)的內(nèi)毒素產(chǎn)生減少，保護(hù)腸黏膜完整，減少有害菌的繁殖。雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片、多烯磷脂酰膽堿在臨床上的報(bào)道甚少，缺乏有效依據(jù)，故在本研究中，分析兩種藥物結(jié)合使用對(duì)慢性乙肝肝硬化的臨床療效，為臨床診治提供依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析2016 年5 月～2020 年8 月在浙江省臺(tái)州醫(yī)院門(mén)診進(jìn)行診治的100 例慢性乙肝肝硬化患者，分為對(duì)照組與研究組，每組各50 例。對(duì)照組男29例，女21 例；年齡33～76 歲，平均（47.17±8.25）歲；病程3～12 年，平均（6.52±1.67）年。研究組男30 例，女20 例；年齡31～75 歲，平均（46.61±7.86）歲；病程2～11年，平均（5.96±1.58）年。兩組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性（P＞0.05）。本研究經(jīng)浙江省臺(tái)州醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者及家屬均簽署知情同意書(shū)。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《慢性乙型肝炎防治指南（2019年版）》、《肝硬化診治指南》中對(duì)于慢性乙型肝炎的診治標(biāo)準(zhǔn)；②患者發(fā)生肝硬化；③患者近期未接受免疫調(diào)節(jié)治療；④患者未接受抗病毒治療。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①心功能異常者；②處于肝硬化失代償期者；③合并有其他惡性腫瘤者；④免疫系統(tǒng)異常者；⑤精神狀態(tài)異常者。

1.2 方法

對(duì)兩組患者進(jìn)行養(yǎng)肝、護(hù)肝、抗肝纖維化等基礎(chǔ)治療。

對(duì)照組患者在進(jìn)行基礎(chǔ)治療并服用雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片（內(nèi)蒙古雙奇藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字S19980004，規(guī)格，0.5 g/片），4 片/次，3 次/d，連續(xù)服用3 個(gè)月。

研究組患者在對(duì)照組的基礎(chǔ)上口服多烯磷脂酰膽堿[賽諾菲（北京）制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20059010，228 mg/粒]，2 粒/次，2 次/d，連續(xù)服用3 個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

1.3.1 肝功能指標(biāo)、肝纖維化指標(biāo)檢測(cè) 收集所有患者治療前與治療后3 d 清晨空腹靜脈血10 ml，以離心半徑10 cm、轉(zhuǎn)速3000 r/min 進(jìn)行10 min 離心處理，分離出上層血清，保存于-80℃，待用。采用全自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司，BS-600）檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（alanine aminotransferase，ALT）、總膽紅素（total bilirubin，TBIL）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase，AST）、透明質(zhì)酸（hyaluronic acid，HA）、Ⅲ型前膠原（typeⅢprocollagen，PCⅢ）、層黏蛋白（laminin，LN）表達(dá)水平。

1.3.2 炎癥因子水平檢測(cè) 收集所有患者治療前與治療后3 d 清晨空腹靜脈血10 ml，以離心半徑10 cm、轉(zhuǎn)速3000 r/min 進(jìn)行10 min 離心處理，分離出上層血清，保存于-80℃，待用。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）水平，將稀釋后的碳酸鹽緩沖液放入孔中，4℃下過(guò)夜，后洗凈，每孔滴入1%BSA 在37℃下進(jìn)行封閉處理1 h，后洗凈，每孔加入0.1 ml 稀釋抗血清，37℃下輕微搖晃40 min，后洗凈，使用TMB 顯色處理，在450 nm 波長(zhǎng)下檢測(cè)OD 值，查出IL-6、TNF-α、MMP-2 表達(dá)水平。IL-6、TNF-α、MMP-2 試劑盒由上海酶研生物科技有限公司提供，貨號(hào)：EK-H10960。

1.3.3 免疫功能指標(biāo)檢測(cè) 收集所有患者治療前與治療后3 d 清晨空腹靜脈血10 ml，以離心半徑10 cm、轉(zhuǎn)速3000 r/min 進(jìn)行10 min 離心處理，分離出上層血清，保存于-80℃，待用。采用流式細(xì)胞儀（貝克曼庫(kù)爾特，Cytomics FC 500）檢測(cè)CD3、CD4、CD8、CD4/CD8表達(dá)水平。

1.3.4 治療效果 對(duì)患者治療后效果進(jìn)行判定，顯效：肝功能指標(biāo)改善＞50%。有效：肝功能指標(biāo)減輕25%～50%，無(wú)效：肝功能指標(biāo)減輕＜25%?？傆行剩?）=（顯效+有效）例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組患者治療前后肝功能指標(biāo)對(duì)比

兩組的ALT、AST、TBIL 水平治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），研究組ALT、AST、TBIL 水平治療后低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組患者治療前后肝功能指標(biāo)對(duì)比（）

2.2 兩組患者治療前后肝纖維化指標(biāo)對(duì)比

兩組的HA、PCⅢ、LN 水平治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），研究組HA、PCⅢ、LN 水平治療后低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 兩組患者治療前后肝纖維化指標(biāo)對(duì)比（ng/ml，）

2.3 兩組患者治療前后炎癥因子水平對(duì)比

兩組的IL-6、TNF-α、MMP-2 水平治療前比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），研究組IL-6、TNF-α、MMP-2 水平治療后低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 兩組患者治療前后炎癥因子水平對(duì)比（ng/ml，）

2.4 兩組患者治療前后免疫功能對(duì)比

兩組治療前的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）；治療后，研究組CD3、CD4、CD4/CD8水平高于對(duì)照組，CD8水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表4 兩組患者治療前后免疫功能對(duì)比（）

2.5 兩組患者臨床療效對(duì)比

研究組治療總有效率高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表5。

表5 兩組患者臨床療效對(duì)比[n（%）]

3 討論

慢性乙肝是由乙型肝炎病毒引發(fā)的，病程時(shí)間長(zhǎng)，且發(fā)病較為隱匿，大多患者在體檢過(guò)程中發(fā)現(xiàn)。慢性乙肝病毒患者得病后可表現(xiàn)為肝功能變化、惡心嘔吐、出現(xiàn)黃疸且食欲不佳，慢性乙肝可通過(guò)血液與日常接觸傳播，嚴(yán)重患者病情易反復(fù)發(fā)生。肝硬化是由肝病患者肝臟發(fā)生纖維化，臨床治療慢性乙肝肝硬化的主要為保肝與抗病毒，減少肝臟損傷防止病情發(fā)展。

多烯磷脂酰膽堿是從大豆中提取磷脂精制作而成的，主要成分為二亞酰磷脂膽堿，為恢復(fù)膜功能的物質(zhì)，可使受損的肝細(xì)胞膜得到恢復(fù)，并提高人體內(nèi)源性磷脂，補(bǔ)充人體所需的營(yíng)養(yǎng)，還可使膜的流動(dòng)性與穩(wěn)定性增強(qiáng)，并維持肝臟的膜功能，調(diào)節(jié)膜活性與含量。研究表明，患者的氧化應(yīng)激平衡可使用多烯磷脂酰膽堿進(jìn)行調(diào)節(jié)，多烯磷脂酰膽堿還可使肝臟的炎癥反應(yīng)降低，改善患者的血脂代謝。長(zhǎng)型雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌與保加利亞乳桿菌為三聯(lián)微生態(tài)制劑，可組成雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片，促進(jìn)腸道內(nèi)厭氧菌的繁殖與抑制需氧菌的繁殖，使內(nèi)毒素的產(chǎn)生減少，并使腸道細(xì)菌異位，保護(hù)腸黏膜屏障，產(chǎn)生乳酸與醋酸，使腸道酸化抑制病菌的生長(zhǎng)，使患者的機(jī)體抗病能力增強(qiáng)。本文研究發(fā)現(xiàn)，雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片、多烯磷脂酰膽堿結(jié)合使用可保護(hù)患者肝功能，加強(qiáng)療效，促進(jìn)肝功能的恢復(fù)，增強(qiáng)患者的免疫功能。

ALT、AST、TBIL 是反映患者肝功能的實(shí)驗(yàn)性指標(biāo)，乙型肝炎病毒在患者體內(nèi)復(fù)制可使患者的肝細(xì)胞受到持續(xù)損傷，使患者體內(nèi)ALT、AST、TBIL 水平升高。本研究表明，治療后患者體內(nèi)ALT、AST、TBIL 水平降低，表明兩種藥物共同使用可增強(qiáng)患者療效，使患者的肝功能恢復(fù)加快，其原因可能為兩者聯(lián)合糾正腸道內(nèi)微生態(tài)紊亂，并減輕腸源性內(nèi)毒素血癥，抑制了相關(guān)炎癥的發(fā)展與免疫的損傷，加快肝功能的恢復(fù)。HA、PCⅢ、LN 為反映肝纖維化的敏感指標(biāo)，其中HA為細(xì)胞外基質(zhì)中蛋白多糖的組成部分，可預(yù)測(cè)肝硬化及肝細(xì)胞纖維化的敏感程度，LN 為細(xì)胞外基質(zhì)中糖蛋白的組成部分，可反映出肝纖維化的程度。在纖維化的發(fā)展過(guò)程中，HA、PCⅢ、LN 含量可通過(guò)肝細(xì)胞外基質(zhì)水解與合成升高，本文進(jìn)一步分析顯示，多烯磷脂酰膽堿、雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片結(jié)合使用可降低HA、PCⅢ、LN 含量，表明兩者共同使用可逆轉(zhuǎn)肝纖維化，保護(hù)患者肝功能。

研究表明，機(jī)體炎癥及抗炎反應(yīng)失衡可使患者的肝硬化得到持續(xù)發(fā)展，TNF-α 提高庫(kù)普弗細(xì)胞活性，并使星狀細(xì)胞促纖維化效應(yīng)增強(qiáng)，促進(jìn)慢性乙肝肝硬化的生理進(jìn)程，IL-6 為肝細(xì)胞急性期炎癥反應(yīng)的誘導(dǎo)因子，可介導(dǎo)肝纖維化的發(fā)生，加快肝硬化進(jìn)展，MMP-2 可調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)膠原降解酶，提高多型膠原降解速率。本文研究表明，雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片、多烯磷脂酰膽堿結(jié)合使用可使TNF-α、MMP-2、IL-6 水平降低，使肝硬化的進(jìn)程減緩，并降低肝臟炎性的損傷的程度，效果良好。T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答紊亂與肝硬化、肝纖維化密切相關(guān)，隨著乙型肝炎病毒的增加，CD3總數(shù)逐漸減少，CD4、CD8淋巴細(xì)胞向CD8偏倚，CD4/CD8比值不斷下降。本研究顯示，雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片、多烯磷脂酰膽堿結(jié)合使用可提高CD4/CD8比值，表明兩者共同使用可糾正T 淋巴細(xì)胞紊亂，升高CD4/CD8比值。雖然本文認(rèn)為兩者聯(lián)合可用于慢性乙肝肝硬化患者，但目前臨床上并未有研究分析兩者應(yīng)用效果，且本文僅分析其對(duì)患者肝功能指標(biāo)、纖維化指標(biāo)、炎癥指標(biāo)及免疫功能的影響，后續(xù)應(yīng)進(jìn)一步分析驗(yàn)證本文研究結(jié)果，以期望造福于更多的患者。

綜上所述，多烯磷脂酰膽堿、雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌片結(jié)合對(duì)慢性乙肝肝硬化的治療療效理想，并可改善患者的肝功能與免疫功能，可在臨床上推廣使用。