火麻油水解提取多酚工藝優(yōu)化及多酚對(duì)線蟲行為能力的影響

姚鑒芯，張哲皓，張 帥，劉元法，徐勇將*

（1.江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2.中國(guó)焙烤食品糖制品工業(yè)協(xié)會(huì)，北京 100833）

火麻（Cannabis sativa L.），俗稱大麻、線麻、山絲苗等，?？疲舐閷?，一年生草本植物?；鹇榈闹饕煞譃橹舅帷⒋舐樗匾约耙恍┨妓衔锖臀⒘吭豙1-2]。火麻油可由火麻子直接壓榨而得，油呈黃綠色且具有特殊的清香。根據(jù)干燥時(shí)烘箱的溫度差異，壓榨可分為冷榨和熱榨，熱榨油比冷榨油顏色更深。除此之外，還可通過加水酶解和溶劑浸出的方式得到火麻油。水酶法和浸出法制得的火麻油顏色較清亮，比壓榨制油的色澤更好，但是出油率更低一些。不同加工方式制備的火麻油在總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)、理化指標(biāo)、感官評(píng)定等方面都有差異，尋求一種綜合評(píng)定較好且更具發(fā)展前景的加工方式，可以得到品質(zhì)更優(yōu)，更符合當(dāng)下健康飲食需求的火麻油產(chǎn)品。

火麻油含有酚類化合物及生育酚，其抗氧化活性因?yàn)檫@類活性物質(zhì)的存在而提高。研究發(fā)現(xiàn)，酚類物質(zhì)可以有效預(yù)防一些慢性疾病，如肥胖、高血壓、高血脂、心腦血管疾病等，對(duì)癌癥、炎癥等疾病的抵抗與治療也發(fā)揮著積極作用[3-4]。植物油中酚類物質(zhì)的存在，使得油脂的氧化穩(wěn)定性較好，儲(chǔ)藏期相對(duì)較長(zhǎng)，可以長(zhǎng)久地保持油的穩(wěn)定色澤與感官品質(zhì)[5]。不同加工方式制油測(cè)得的酚類化合物含量不同，其中水酶法和熱榨制油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)最高，同時(shí)，水酶法制油的呈色明顯優(yōu)于熱榨制油，如果對(duì)其進(jìn)行工藝優(yōu)化，有望成為較理想的制油方法。

熱榨、冷榨、水酶、浸出4種制油方式中，水酶法制油兼具環(huán)境友好、有益副產(chǎn)物多、安全性高、反應(yīng)條件溫和、節(jié)能、無有機(jī)溶劑殘留、總酚含量高等優(yōu)點(diǎn)，有利于環(huán)境保護(hù)和提升油脂品質(zhì)[6]。為得到營(yíng)養(yǎng)價(jià)值更高的油脂產(chǎn)品，作者選擇Alacalase 2.4 L蛋白酶水解火麻子，提取火麻油，以總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為優(yōu)化指標(biāo)，用單因素實(shí)驗(yàn)對(duì)加酶量、液料比、酶解pH 3個(gè)影響因素進(jìn)行研究，并用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化[7]。

以總酚為指標(biāo)優(yōu)化水酶法提油工藝后，需進(jìn)一步檢驗(yàn)其可行性：包括方法選擇的生物適用性與酚類物質(zhì)的生物活性作用。秀麗隱桿線蟲（Caenorhabditis elegans）是一種以細(xì)菌為食的多細(xì)胞動(dòng)物，對(duì)生長(zhǎng)環(huán)境要求不高，有較強(qiáng)的環(huán)境抵抗力，適用于實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)條件，被國(guó)際公認(rèn)為脂質(zhì)代謝的模式生物之一。秀麗隱桿線蟲具有很多研究?jī)?yōu)點(diǎn)：如生長(zhǎng)周期短，蟲體結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單；在顯微鏡下呈透明狀，便于染色和觀察；和人體具有40%以上的同源性基因，發(fā)育繁殖快，后代多且易于保存；遺傳背景清晰，進(jìn)化高度保守；培育方式簡(jiǎn)單，成本低廉等[1，3，8-9]。因此，選擇秀麗隱桿線蟲作為研究的模式生物。

對(duì)于線蟲這類模式生物而言，選擇合適的模型用于研究，才更易于檢驗(yàn)活性成分的功能。氧化損傷是一些惡性疾病發(fā)展與生命體衰老的重要原因，活性氧ROS和抗氧化防御系統(tǒng)的不穩(wěn)定狀態(tài)會(huì)引起機(jī)體的過氧化，破壞細(xì)胞并產(chǎn)生病理性蛋白質(zhì)[3，10-12]。近年來，已有多種具有抗氧化功能的物質(zhì)用于研究治療線蟲的氧化應(yīng)激損傷，如紅茶、蝦青素、海帶提取物中的對(duì)百草枯、姜黃素類化合物等[13-16]。根據(jù)酚類物質(zhì)在油脂中的抗氧化作用，推測(cè)不同加工方式制取的火麻油因總酚含量的差異會(huì)對(duì)線蟲氧化應(yīng)激損傷起到不同的治療效果。因此，選擇H2O2溶液處理同步化生長(zhǎng)的野生型線蟲，模擬線蟲內(nèi)源性的氧化應(yīng)激損傷[10-12]，建立線蟲運(yùn)動(dòng)缺陷模型，將其轉(zhuǎn)移至涂布不同加工方式所得火麻油的培養(yǎng)基上，待幼蟲成年后，測(cè)定其行為能力，探究加工方式以及油中的酚類物質(zhì)對(duì)線蟲的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 原料與試劑火麻子：購自廣西壯族自治區(qū)巴馬瑤族自治縣；Alacalase 2.4 L蛋白酶：諾維信生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；野生型秀麗隱桿線蟲、大腸桿菌E.coli OP50：來自江南大學(xué)孫秀蘭教授實(shí)驗(yàn)室；質(zhì)量分?jǐn)?shù)30%H2O2溶液、二甲基亞砜、乙醇、甲醇、正己烷、氯化鈉、胰蛋白胨、瓊脂、碳酸鈉、NaOH、鹽酸、氯化鈣、硫酸鎂、磷酸鉀、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、福林酚、膽固醇、酵母粉（均為分析純）：國(guó)藥化學(xué)試劑集團(tuán)產(chǎn)品；二醇基固相萃取（Diol-SPE）小柱：上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份公司產(chǎn)品。

1.1.2 設(shè)備與儀器FD56干燥箱：德國(guó)Binder公司產(chǎn)品；DF-8L氮吹設(shè)備：杭州德爾克設(shè)備有限公司產(chǎn)品；YX-18HDD蒸汽滅菌鍋：蘇州奧普實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司產(chǎn)品；scientz-IID超聲波細(xì)胞破碎儀：寧波新芝生物科技公司產(chǎn)品；mini-240紫外分光光度計(jì)：美國(guó)Zeiss公司產(chǎn)品；SW-CJ-1FD-Ⅱ生物安全柜：蘇凈安泰有限公司產(chǎn)品；ME204E電子天平：梅特勒-托利多儀器有限公司產(chǎn)品；S8專業(yè)商用榨油機(jī)：東莞香聚智能有限公司產(chǎn)品；旭曼800Y高速多功能粉碎機(jī)：永康市鉑歐五金制品有限公司產(chǎn)品；5804R高速離心機(jī)：德國(guó)Eppendorf公司產(chǎn)品；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；HH.S11-2電熱恒溫水浴鍋：上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司產(chǎn)品；RW20DS025攪拌器：上海翼悾機(jī)電有限公司產(chǎn)品；VGA/USB/AV三合一接口CCD顯微鏡：上海韌躍電子科技有限公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 不同加工方法提取火麻油

1）冷榨制油 取火麻子1 000 g在60℃烘箱中干燥10 h，冷卻后送入螺桿壓榨機(jī)壓榨，設(shè)置榨膛溫度為120℃。收集的毛油以5 000 r/min離心10 min，取上清液倒入50 mL離心管，用封口膜封好，保存在4℃冰箱中備用。

2）熱榨制油 取火麻子1 000 g在100℃烘箱中干燥3 h，冷卻后送入螺桿壓榨機(jī)壓榨，設(shè)置榨膛溫度為120℃。收集的毛油以5 000 r/min離心10 min，取上清液倒入50 mL離心管，用封口膜封好，保存在4℃冰箱中備用。

3）水酶法制油 取火麻子1 000 g在40℃烘箱中干燥12 h，放入粉碎機(jī)粉碎。取300 g火麻子粉，按料液比1 g∶5 mL加入蒸餾水并攪拌均勻，調(diào)節(jié)體系pH為8.5，添加8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，以火麻子質(zhì)量計(jì)）Alacalase 2.4 L蛋白酶，放入60℃水浴鍋以135 r/min恒溫?cái)嚢瑁附? h后升溫至90℃滅酶10 min，冷卻至室溫，8 000 r/min離心30 min，取出上層游離油，置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

4）浸出提油 火麻子在40℃烘箱干燥12 h后，放入粉碎機(jī)粉碎，取300 g粉末，加入正己烷（料液比1 g∶5 mL）后，用攪拌儀恒速攪拌過夜，靜置過濾，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸出溶劑，收集油液。

1.2.2 水酶法提油單因素實(shí)驗(yàn)

1）加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在料液比1 g∶5 mL，體系pH 8.5，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，90℃滅酶10 min，8 000 r/min離心30 min的條件下，分別考察加酶量為2%、4%、6%、8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）時(shí)，火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

2）料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在加酶量8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），體系pH 8.5，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，90℃滅酶10 min，8 000 r/min離心30 min的條件下，分別考察料液比為1 g∶3 mL、1 g∶4 mL、1 g∶5 mL、1 g∶6 mL時(shí)，火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

3）pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響 在加酶量8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），料液比為1 g∶5 mL，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，90℃滅酶10 min，8 000 r/min離心30 min的條件下，分別考察體系pH為6.5、7.5、8.5、9.5時(shí)，火麻油中的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

1.2.3 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)基于單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果，設(shè)計(jì)主要影響因素的水平取值范圍。采用響應(yīng)面中心復(fù)合實(shí)驗(yàn)，觀察各酶解參數(shù)對(duì)優(yōu)化指標(biāo)的影響規(guī)律。以加酶量、料液比、pH為自變量，以火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為響應(yīng)值，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

1.2.4 火麻油中總酚含量測(cè)定用10 mL甲醇和10 mL正己烷活化Diol-SPE柱。在離心管中稱取3.0 g火麻油，加入5 mL正己烷，振蕩1 min使其溶解，沿萃取柱管壁加入后，用10 mL正己烷洗柱，棄去全部淋洗液。用10 mL甲醇溶液洗脫，洗脫液在氮?dú)庀麓蹈珊蠹尤?.0 mL甲醇復(fù)溶，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后置于樣品瓶中[12]。在15 mL離心管中加入1 mL火麻油多酚提取物、0.5 mL福林酚試劑、2 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)7.5%的碳酸鈉溶液和6.5 mL去離子水，渦旋振蕩2 min混勻。將反應(yīng)物置于70℃水浴鍋中加熱30 min，溶液將由無色變藍(lán)色。在750 nm波長(zhǎng)下測(cè)定溶液吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算火麻油中總酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。

表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表Table 1 Factors and levels of response surface methodology

1.2.5 線蟲實(shí)驗(yàn)線蟲培養(yǎng)基（nematode growth medium，NGM）：3 g NaCl、2.5 g蛋白胨、17 g瓊脂、25 mL的1 mol/L磷酸鉀緩沖液、975 mL去離子水，121℃滅菌20 min后，加入1 mL的1 mol/L MgSO4溶液、1 mL的1 mol/L CaCl2溶液、1 mL膽固醇溶液（5 mg/mL無水乙醇配制）。

M9緩 沖 液：3 g KH2PO4、15.1 g Na2HPO4、5 g NaCl、1 mL的1 mol/L MgSO4溶液，加去離子水至1 L，搖勻后121℃滅菌20 min。

5 mg/mL火麻油溶液（4種加工方式制得）：在10 mL離心管中加入40 mg油液和8μL二甲基亞砜，加去離子水至8 mL，渦旋混勻后，使用超聲波細(xì)胞破碎儀充分破碎濁液，至不分層為止。

1）線蟲生長(zhǎng)同步化 用M9緩沖液將培養(yǎng)基表面的成蟲沖洗至1.5 mL離心管中，離心后棄上清液，再用M9緩沖液清洗兩遍，留500μL緩沖液于離心管內(nèi)。然后加入500μL的裂解液（M9緩沖液、5 mol/L NaOH溶液、質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%NaClO溶液體積比為7∶2∶1）混勻，用M9洗滌沉淀3次，去除殘存的裂解液，最終得到的沉淀即為蟲卵。

2）運(yùn)動(dòng)缺陷模型建立 配制10 mmol/mL H2O2溶液，待蟲卵在M9緩沖液中孵育16 h成長(zhǎng)為L(zhǎng)1期幼蟲后，轉(zhuǎn)移到1.5 mL離心管中，6 500 r/min離心2 min后棄上清液，留下500μL的液體，加入H2O2溶液至1 mL，實(shí)際的H2O2溶液處理濃度為5 mmol/mL，混勻后在24孔板中浸泡1 h。

3）培養(yǎng)分組 線蟲培養(yǎng)一共分10組，2組培養(yǎng)基不涂油，另外8組培養(yǎng)基分別涂布熱榨油、冷榨油、浸出油和水酶法得油，每種油涂布2個(gè)平板，共得到5種處理方式的培養(yǎng)基，每種培養(yǎng)基分別轉(zhuǎn)入運(yùn)動(dòng)缺陷的L1期幼蟲和正常幼蟲。

4）線蟲行為能力測(cè)定 頭部擺動(dòng)頻率測(cè)定：在空白的NGM培養(yǎng)基上滴加50μL M9緩沖液，挑取線蟲到緩沖液中，待線蟲在緩沖液中穩(wěn)定1 min后，用顯微鏡拍攝，錄制視頻，數(shù)出線蟲1 min內(nèi)頭部往返擺動(dòng)的次數(shù)，每組測(cè)定20條。身體彎曲頻率測(cè)定：挑取線蟲到空白的NGM培養(yǎng)基上，待線蟲恢復(fù)穩(wěn)定1 min后，用顯微鏡拍攝，錄制視頻，20 s內(nèi)記錄線蟲身體彎曲的次數(shù)，每組測(cè)定20條。

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用Excel、SPSS 28.0和Design-Expert 8.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 水酶法提取火麻油單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在料液比1 g∶5 mL，體系pH 8.5，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，8 000 r/min離心30 min的條件下，考察加酶量對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響，結(jié)果見圖1。隨著加酶量的增加，火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)先升高后下降，當(dāng)加酶量4%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）時(shí)，總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯高于其他組。隨著酶量增多，酶與底物相互作用，使酶功能進(jìn)一步發(fā)揮，分解油脂顆粒內(nèi)部的脂蛋白與脂多糖，釋放油脂[6]，進(jìn)而使得多酚物質(zhì)充分溶出；當(dāng)加酶量進(jìn)一步增加，酶與底物的作用位點(diǎn)逐漸達(dá)到飽和，降低了溶出率。故響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中，加酶量選擇質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%~4%。

圖1 加酶量對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.1 Effect of enzyme dosage on total phenol content of hemp seed oil

2.1.2 料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在加酶量8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），體系pH 8.5，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，8 000 r/min離心30 min的條件下，考察料液比對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響，結(jié)果見圖2。料液比在1 g∶3 mL~1 g∶5 mL時(shí)，火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)上升；在1 g∶5 mL~1 g∶6 mL時(shí)，總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯下降。適量的水可促進(jìn)酶解作用，隨著水分增多，酶反應(yīng)體系中的酶濃度和底物濃度降低，分子碰撞概率減小，酶作用效果降低，使酚類物質(zhì)難以溶出[13]；水量過少時(shí)，料液黏度較大，酶與底物流動(dòng)受到阻滯，油中的物質(zhì)難以分解出來。因此，響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，料液比選擇1 g∶4 mL~1 g∶6 mL。

圖2 料液比對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.2 Effect of solid-liquid ratio on total phenol mass fraction of hemp seed oil

2.1.3 pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響在加酶量8%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），料液比為1 g∶5 mL，恒溫60℃攪拌，酶解3 h，8 000 r/min離心30 min的條件下，考察體系pH對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響，結(jié)果見圖3。隨著體系pH增加，火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)先上升后下降，在pH 8.5附近出現(xiàn)最大值。Alacalase 2.4 L蛋白酶的最適pH為8.5，此時(shí)酶的水解作用最佳，得到的活性物質(zhì)含量最高。因此，響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)中，選擇pH為7.5~9.5。

圖3 pH對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.3 Effect of pH on total phenol content of hemp seed oil

2.2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，選取加酶量（X1）、料液比（X2）、pH（X3）為自變量，火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為響應(yīng)值，進(jìn)行響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。通過軟件Design-Expert 8.0對(duì)表2的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，得到的回歸方程為：

表2 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Experimental design and results for response surface analysis

由表3可知，模型F為9.27，P<0.05（差異顯著），自變量與響應(yīng)值之間有顯著的線性關(guān)系，模型選擇合適。該模型R2=0.965 3，R2Adj=0.861 2，說明模型與實(shí)驗(yàn)擬合性較好。實(shí)驗(yàn)的變異系數(shù)為5.80%，模型置信度較好，說明該方程能很好地反映實(shí)驗(yàn)值的真實(shí)性。各因素對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響大小為：X1>X3>X2，即加酶量>pH>料液比。

加酶量與料液比、加酶量與酶解pH、料液比與酶解pH的交互作用對(duì)火麻油中總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響見圖4。利用Design-Expert軟件對(duì)模型進(jìn)一步分析，得到最優(yōu)響應(yīng)結(jié)果：加酶量為4.57%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），料液比為1 g∶4.79 mL，pH為8.24，在此條件下，火麻油中總酚的理論預(yù)測(cè)值為67.29 mg/kg。

在響應(yīng)面分析法求得的最佳條件下，進(jìn)行3次平行實(shí)驗(yàn)，測(cè)得火麻油中總酚的3次平均值為65.78 mg/kg，與理論值差距較小，說明實(shí)驗(yàn)結(jié)果與回歸方程的預(yù)測(cè)值吻合性較好。

表3 回歸方程與方差分析Table 3 Variance analysis for regression equation

圖4 各因素的交互作用對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的影響Fig.4 Response surface plots for the interactive effects of different hydrolysis parameters on the total phenol content of hemp seed oil

2.3 火麻油對(duì)線蟲行為能力的影響

線蟲的運(yùn)動(dòng)行為能力主要包括頭部擺動(dòng)頻率和身體彎曲頻率，運(yùn)動(dòng)頻率越高，能量消耗越多，機(jī)體代謝加速，會(huì)使脂質(zhì)積累的程度降低[1，14]。實(shí)驗(yàn)采用5 mmol/mL的H2O2溶液處理裂解后同步生長(zhǎng)到L1期的幼蟲，建立運(yùn)動(dòng)缺陷模型，分別用4種加工方式處理的火麻油喂養(yǎng)，探究對(duì)線蟲行為能力的影響。培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組見表4。

由圖5可知，對(duì)比4種不同加工方式處理后的火麻油可以發(fā)現(xiàn)，水酶法和熱榨法制油能夠保持較高的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)，且明顯高于其他兩組油樣，冷榨法油樣次之，浸出法油樣最低；制備的油樣中，水酶法和浸出法得油色澤較淺，冷榨油顏色較深，熱榨油最深。

火麻油及其活性成分可以提高大腦組織中多種酶的活性，增加大腦組織的總抗氧化能力，降低神經(jīng)細(xì)胞膜的脂質(zhì)過氧化水平，保護(hù)細(xì)胞膜和腦組織形態(tài)的完整性，增強(qiáng)神經(jīng)系統(tǒng)的功能[1，4]。由圖6可知，H2O2處理組線蟲的行為能力都比正常線蟲低一些。添加火麻油之后，由于油中活性物質(zhì)的影響，可以改善線蟲的行為能力，改善效果依次為：水酶法>熱榨法>冷榨法>浸出法。根據(jù)不同加工方式下火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定結(jié)果可以得出，火麻油中的多酚活性物質(zhì)確實(shí)可以改善線蟲的行為能力，即使是經(jīng)過H2O2處理的運(yùn)動(dòng)缺陷型線蟲，受到油液中活性物質(zhì)的作用之后，其頭部擺動(dòng)頻率和身體彎曲頻率也有所提高，可見線蟲受到了油及其活性成分的影響，行為能力得到了改善。

表4 線蟲培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)分組Table 4 Different experimental groups for C.elegans culture

3 結(jié)語

選用Alacalase 2.4 L蛋白酶對(duì)火麻子水解，利用響應(yīng)面法進(jìn)行優(yōu)化，得到水酶法提油最佳工藝條件：加酶量為4.57%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)），料液比為1 g∶4.79 mL，pH為8.24，在此條件下，火麻油中總酚為65.78 mg/kg。由F檢驗(yàn)可得各因素對(duì)火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)的貢獻(xiàn)順序?yàn)椋篨1>X3>X2，即加酶量>pH>料液比。火麻油中的多酚物質(zhì)可以改善線蟲的運(yùn)動(dòng)行為能力。不同加工方式處理的火麻油總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)依次為：水酶法>熱榨法>冷榨法>浸出法。受到火麻油中活性成分的影響，線蟲行為能力的改善效果也不同，其順序?yàn)椋核阜?熱榨法>冷榨法>浸出法。

圖5 不同加工方式下火麻油的總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)Fig.5 Total phenol content of different processed hemp seed oils

圖6 不同加工方式下火麻油對(duì)線蟲行為能力的影響Fig.6 Effects of different processing hemp seed oils on the motor behavior of C.elegans