槲皮素對(duì)雜交石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能、抗氧化能力和腸道菌群的影響

羅 君，付偉杰，楊二軍，黃建盛,2，謝瑞濤，陳 剛,2

（1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廣東 湛江 524088；2.南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室（湛江），廣東 湛江 524025；3.廣東恒興飼料實(shí)業(yè)股份有限公司，廣東 湛江 524022）

雜交石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epi‐nephelus polyphekadion♂）是褐點(diǎn)石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus）和清水石斑魚(yú)（Epinephelus polyphek‐adion）的雜交子一代，市場(chǎng)價(jià)值較高，已在中國(guó)廣東、海南等地廣泛養(yǎng)殖[1]。然而，水產(chǎn)病害頻發(fā)，嚴(yán)重危害了石斑魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展[2]。用于水產(chǎn)病害防治的抗生素類(lèi)藥物易導(dǎo)致耐藥菌產(chǎn)生和抗生素殘留，甚至危害人類(lèi)健康，因此，學(xué)界致力于尋求抗生素替代品[3]。黃酮類(lèi)化合物有提高養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)抗病性和抗逆能力的作用，可提高水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)性能和免疫能力，調(diào)節(jié)腸道微生物群組成[4-5]，是有效且環(huán)保的抗生素替代品[6-7]。槲皮素（3,3′,4′,5,7-五羥基黃酮，C15H10O7；QE）是植物中廣泛存在的黃酮類(lèi)化合物，有抗氧化、抗炎、抗癌、抗菌和抗病毒等生物學(xué)功能[8]，對(duì)虹鱒（Oncorhynchus mykiss）[9]、斑馬魚(yú)（Danio rerio）[10]、克琳雷氏鲇（Rhamdia quel‐en）[11]、金頭鯛（Sparus aurataL.）[12]、牙鲆（Paralich‐thys olivaceus）[13]和 草 魚(yú)（Ctenopharyngodon idel‐la）[14]等生長(zhǎng)和免疫有有益作用。然而，QE 的副作用亦有報(bào)道，如QE 可轉(zhuǎn)化為有細(xì)胞毒性的鄰半醌和鄰醌活性氧化產(chǎn)物[15]；QE可增加斑馬魚(yú)大腦中炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子水平，表現(xiàn)出促炎活性[10]。QE的有益或有害作用可能涉及各種機(jī)制。為進(jìn)一步了解QE 對(duì)海洋魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)和免疫的影響，本研究分析飼料中QE 對(duì)雜交石斑魚(yú)（E.fuscoguttatus♀×E.polyphekadion♂）生長(zhǎng)、免疫和腸道健康的影響，為QE在石斑魚(yú)飼料中的應(yīng)用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

槲皮素（二水合物，質(zhì)量分?jǐn)?shù)97%）購(gòu)自上海麥克林生化有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

雜交石斑魚(yú)飼料營(yíng)養(yǎng)需求參考文獻(xiàn)[16-17]，基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。QE 添加量參考文獻(xiàn)[18-19]，分別在基礎(chǔ)飼料中添加0、0.80、1.60、3.20 mmol/kg QE（表2）。將所有原料粉碎，過(guò)孔徑250 μm篩，用F-26型雙螺桿擠條機(jī)（華南理工大學(xué)）制備粒徑4.0 mm 的顆粒飼料，陰涼處風(fēng)干，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets %

表2 基礎(chǔ)飼料中不同水平QE的添加量Table 2 Different levels of QE supplementation in the basal diets

1.3 實(shí)驗(yàn)用魚(yú)與飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)魚(yú)為廣東海洋大學(xué)湛江海洋高新科技園養(yǎng)殖所培育的雜交石斑魚(yú)子一代幼魚(yú)，選取健康幼魚(yú)運(yùn)至廣東恒興飼料實(shí)業(yè)股份有限公司863養(yǎng)殖基地。以基礎(chǔ)飼料暫養(yǎng)2 周。停飼24 h，取體質(zhì)量（10.10±0.02）g 的幼魚(yú)300 尾，隨機(jī)放入12 個(gè)0.5 m3圓柱形玻璃鋼養(yǎng)殖桶（25 尾/桶）。一共設(shè)4 個(gè)處理，每處理3 個(gè)重復(fù)。每日08:00、17:00 按照體質(zhì)量5%～8%飽食投喂。各處理組間飼養(yǎng)管理措施相同。實(shí)驗(yàn)期間，每日記錄死亡率、體質(zhì)量及飼料投喂量。水溫25～29 °C，pH 7.5～8.0，鹽度28.0～32.0，溶氧6～8 mg/L，氨氮0.03±0.01 mg/L。

1.4 樣品采集

飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后停飼24 h。每個(gè)養(yǎng)殖桶隨機(jī)取魚(yú)9 尾，經(jīng)MS-222 麻醉，3 尾魚(yú)剖取長(zhǎng)度1 cm 的后腸(距肛門(mén)2 cm處)用于基因表達(dá)分析，取肝臟用于抗氧化酶活測(cè)定；6 尾魚(yú)在無(wú)菌條件下剖取全腸，去腸道外脂肪組織，3 尾魚(yú)全腸用于腸道菌群分析，3尾魚(yú)全腸于抗氧化酶活測(cè)定。所取組織用液氮速凍后于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 生長(zhǎng)指標(biāo)分析

實(shí)驗(yàn)8 周后，分別統(tǒng)計(jì)增重率（weight gain rate，WGR，%）、特定增長(zhǎng)率（specific growth rate，SGR，%/d）、存活率（survival rate，SR，%）和飼料系數(shù)（feed coefficient rate，F(xiàn)CR）：

WGR=（終末總體質(zhì)量－初始總體質(zhì)量）/初始總體質(zhì)量；

SGR=（ln 終末總體質(zhì)量－ln 初始總體質(zhì)量）/飼養(yǎng)時(shí)間；

SR=終末數(shù)量/初始數(shù)量；

FCR=攝食飼料干質(zhì)量/（終末總體質(zhì)量+死亡個(gè)體總體質(zhì)量－初始體質(zhì)量）。

1.6 肝臟及腸道抗氧化能力測(cè)定

肝臟和腸道組織超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GPX）、過(guò)氧化氫酶（CAT）和丙二醛（MDA）水平測(cè)定按照南京建成生物工程研究所試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.7 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)

采 用TransZol UP Plus RNA Kit（Transgen Biotech，北京）從雜交石斑魚(yú)后腸中提取總RNA，TranScript cDNA Synthesis SuperMix 試劑盒（Transgen Biotech，北京）合成第1 鏈cDNA。用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)各基因的上、下游引物序列并由上海生工生物股份有限公司合成；所有引物經(jīng)過(guò)驗(yàn)證后用于后續(xù)正式實(shí)驗(yàn)。所有引物序列如表3 所示，以β-actin為內(nèi)參基因。

表3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物序列Table 3 Sequences of primers for quantitative real-time PCR

使用熒光定量試劑盒（PerfectStart Green qPCR Su-perMix，Transgen Biotech，北京）在Roche LightCycler?96 SW1.1 平臺(tái)上進(jìn)行檢測(cè)。10 μL 反應(yīng)體系包括5 μL SYBR Green Supermix，上下游引物各0.5 μL，3.5 μL ddH2O 和0.5 μL cDNA。以溶解曲線(xiàn)驗(yàn)證引物特異性。PCR 擴(kuò)增程序：94 ℃30 s；94 ℃5 s，58 ℃15 s，72 ℃10 s，循環(huán)40 次。每個(gè)樣本重復(fù)驗(yàn)證3次。按照2–ΔΔCt方法計(jì)算相對(duì)表達(dá)量。

1.8 腸道菌群

使用DNA 提取試劑盒（MN NucleoSpin 96 Soi）提取微生物DNA；通用引物對(duì)（正向引物338F：5′-ACTCCTACGGGAGGCGCAGCA-3′；反向引物806R：5′-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3′）PCR擴(kuò)增各樣品16S rRNA 基因的V3?V4 區(qū)序列。使用百邁客（北京）的Illumina Hiseq 2500 平臺(tái)對(duì)純化的樣品進(jìn)行高通量測(cè)序分析。

使用FLASH 軟件（version 1.2.11）對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行拼接，Trimmomatic 軟件（version 0.33）將拼接的序列進(jìn)行質(zhì)量過(guò)濾，UCHIME 軟件（version 8.1）鑒定并去除嵌合體，成一條標(biāo)簽（tags）。使用USE‐ARCH（version 10.0）在相似性97%的水平上對(duì)tags進(jìn)行聚類(lèi)，獲得運(yùn)算分類(lèi)單位（OTU）。基于百邁客云平臺(tái)進(jìn)行微生物多樣性分析，得到α 多樣性指數(shù)(Ace、Chao1、Shannon、Simpson)、β 多樣性、物種注釋及分類(lèi)學(xué)分析結(jié)果。

1.9 統(tǒng)計(jì)分析

使用SPSS 22.0 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），采用Duncan 法進(jìn)行多重比較。存活率數(shù)據(jù)則先進(jìn)行平方根反正弦轉(zhuǎn)換再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（mean±SE）表示，P<0.05時(shí)差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

從表4 可知，與FM 組比較，QEH 組終末體質(zhì)量、增重率和特定增長(zhǎng)率顯著提高（P<0.05）；QE 添加存活率顯著降低，QEM 和QEH 組間存活率無(wú)顯著差異（P<0.05）。

表4 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響Table 4 Effect of QE on growth performance of hybrid grouper

2.2 抗氧化活性

表5 表明，與FM 組相比，QEM 組肝臟SOD 和GPX 活性顯著提高（P<0.05），QEH 組肝臟GPX 和CAT活性顯著提高（P<0.05）。FM 與QE組MDA水平無(wú)顯著差異（P>0.05）。所有處理組腸道SOD、GPX、CAT和MDA參數(shù)均無(wú)顯著差異（P>0.05）。

表5 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)肝臟及腸道抗氧化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of QE on the antioxidant indexes of liver and intestine of hybrid grouper

2.3 腸道中相關(guān)基因的表達(dá)

圖1顯示各處理組雜交石斑魚(yú)腸道NF-κB 信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)水平。與FM 組相比，QE 組TRAF-2、TNFRSF1A和IFN-γ表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05），IκB-α表達(dá)量顯著下調(diào)（P<0.05）。此外，與FM 組相比，QEL 和QEH 組TNF-α表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05），QEM 和QEH 組NF-κBp65表達(dá)量顯著上調(diào)（P<0.05）。

圖1 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)后腸NF-κB信號(hào)通路相關(guān)基因表達(dá)水平的影響Fig.1 Effects of QE on the expression levels of genes related to the NF-κB signaling pathway in the hindgut of hybrid grouper

2.4 飼料中添加QE對(duì)雜交石斑魚(yú)腸道菌群的影響

2.4.1 腸道菌群多樣性 雜交石斑魚(yú)腸道微生物的16S rRNA高通量測(cè)序分析得知，樣品的平均干凈讀數(shù)為79 384，平均有效讀數(shù)為73 989。圖2表明，4組共享的OTU 數(shù)目為598；FM 組中特有OTU 最多，為149，QSM 組中特有OTU 數(shù)量最少，為73。表明QE添加使雜交石斑魚(yú)腸道微生物群落數(shù)量顯著降低。

圖2 OTU比較韋恩圖Fig.2 Venn diagram of OTU comparison

Alpha 多樣性指數(shù)分析中，所有樣本的Good’s覆蓋率均高于99.6%，表明數(shù)據(jù)涵蓋了大多數(shù)細(xì)菌物種。表6 表明，與FM 組相比，QEM 和QEH 組的OTU數(shù)目顯著下降（P<0.05），ACE、Chao1、Simpson、Shannon 指數(shù)無(wú)顯著差異（P>0.05）。偏最小二乘判別分析法分析的Beta 多樣性結(jié)果顯示（圖3），F(xiàn)M、QEL和QEH組間存在顯著差異（P<0.05）。

表6 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)腸道菌群的α多樣性指數(shù)的影響Table 6 Effects of QE on the alpha diversity index of the intestinal microflora of hybrid grouper

圖3 雜交石斑魚(yú)腸道微生物的β多樣性指數(shù)Fig.3 β diversity index of hybrid grouper gut microbes

2.4.2 腸道菌群組成 圖4(A)顯示，在門(mén)水平上，4組中相對(duì)豐度大于5%的門(mén)共有5個(gè)，分別為厚壁菌門(mén)（Firmicutes，23.86%～37.04%）、變形菌門(mén)（Proteo‐bacteria，19.09%～29.56%）、擬桿菌門(mén)（Bacteroidetes，8.37%～15.95%）、放線(xiàn)菌門(mén)（Actinobacteria，8.71%～21.67%）和疣微菌門(mén)（Verrucomicrobia，5.26%～8.05%）。方差分析顯示，與FM 組相比，QEM 擬桿菌門(mén)顯著降低（13.92%vs.8.37%，P<0.05），放線(xiàn)菌門(mén)顯著提高（8.71%vs.21.67%，P<0.05）。

除屬水平上未命名的菌群外，豐度比例高于0.1%的前10個(gè)屬（圖4(B)）包括艾克曼菌屬（Akkermansia，3.67%～7.74%）、雙歧桿菌屬（Bifidobacterium，1.42%～17.25%）、擬桿菌屬（Bacteroides，2.76%～6.00%）和脫硫弧菌屬（Desulfovibrio，1.23%～3.83%）。方差分析顯示，與FM 組相比，QSM 組雙歧桿菌屬顯著增加（1.42% vs.17.25%，P<0.05），擬桿菌屬顯著降低（2.76%vs.4.96%，P<0.05）。

圖4 飼喂不同QE水平的4組魚(yú)在門(mén)和屬水平上的物種相對(duì)豐度Fig.4 Relative abundance of species at phylum and genus levels among the four groups of fish fed with different QE levels

3 討論

3.1 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)生長(zhǎng)性能的影響

黃酮類(lèi)化合物是藥用植物最有效的成分之一，可提高魚(yú)類(lèi)的生長(zhǎng)速度、增強(qiáng)機(jī)體的免疫力[4,20]。投喂含不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)（200、400、800 和1 600 mg/kg）QE 飼料的羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)特定增長(zhǎng)率有所提高，且高劑量組更有效[19]。飼喂補(bǔ)充質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.25%或0.50%的QE 飼料的牙鲆增重率顯著提高，飼喂60 d比30 d 效果更佳[13,21]，表明長(zhǎng)期攝入QE 可顯著提高QE 的生物利用度。本研究中，飼料中添加3.2 mmol/L的QE顯著提高了雜交石斑魚(yú)的FW、WGR 和SGR，與上述研究結(jié)果一致。目前，QE 對(duì)養(yǎng)殖動(dòng)物的促生長(zhǎng)機(jī)制尚不清楚，不同物種QE 最適添加范圍不同。研究發(fā)現(xiàn)，QE 在體內(nèi)發(fā)揮作用的能力取決于機(jī)體攝入后的吸收程度及其在機(jī)體各組織中的分布[22]。在羅非魚(yú)中，QE 被吸收后主要以苷元形式沉積在體內(nèi)[23]。此外，動(dòng)物模型研究表明，腸道是QE 吸收的主要場(chǎng)所[24]。QE 及其衍生物在消化系統(tǒng)中發(fā)生多種生化反應(yīng)，在小腸中，QE可被微生物群轉(zhuǎn)化，隨后通過(guò)肝門(mén)靜脈輸送到肝臟，在肝臟中形成硫酸鹽或葡萄糖苷酸[8]。QE 及其衍生物的存在形式在促進(jìn)生長(zhǎng)中可能發(fā)揮重要作用。本研究中，QEH 組的WGR 比QEM 組顯著增加，但SR 一致，表明WGR 增加可能與存活率無(wú)關(guān)。綜上，一方面QE 的潛在毒性可能使雜交石斑魚(yú)的存活率下降[15]；另一方面QE 也隨著劑量增加也表現(xiàn)出促生長(zhǎng)作用。但由于研究對(duì)象、飼養(yǎng)條件和使用劑量不盡相同，QE 促生長(zhǎng)和潛在毒性的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

3.2 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)抗氧化能力的影響

QE 可清除自由基和活性氧物質(zhì)并與金屬離子形成絡(luò)合物，阻礙金屬氧化產(chǎn)生活性氧物質(zhì)[25]。因此，QE 可能通過(guò)減少雜交石斑魚(yú)的氧化損傷對(duì)機(jī)體免疫力發(fā)揮積極作用。作為機(jī)體中重要的抗氧化酶，SOD 催化O2-轉(zhuǎn)化為O2和H2O2，CAT 和GPX進(jìn)一步將H2O2分解為O2和H2O 以去除過(guò)多的自由基[26]。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化作用的產(chǎn)物，其含量間接反映了機(jī)體中活性氧自由基的含量以及組織細(xì)胞中脂質(zhì)過(guò)氧化作用的程度[27]。本研究中，QEM 和QEH 組顯著提高雜交石斑魚(yú)肝臟中SOD、GPX 和CAT的活性。QE可顯著提高斑馬魚(yú)[28]、克琳雷氏鲇（R.quelen）[29]肝臟SOD、CAT 和GPX 活性，降低克琳雷氏鲇脂質(zhì)過(guò)氧化，與本研究結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)，QE 可有效抵抗結(jié)腸上皮中脂肪酸氫過(guò)氧化物（LOOH）等營(yíng)養(yǎng)因素誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激損傷，但可能無(wú)法防止內(nèi)源性H2O2的形成；在無(wú)外源壓力情況下QE 對(duì)機(jī)體幾乎無(wú)保護(hù)能力，甚至?xí)鸾M織損傷[30]。此外，過(guò)量的QE 可能會(huì)被氧化形成QE-苯醌，產(chǎn)生遺傳毒性，從而降低機(jī)體的抗氧化能力[31]。本研究中，QE 對(duì)腸道抗氧化指標(biāo)無(wú)顯著影響，GPX和CAT 活性隨QE 添加劑量的增加有潛在的下降趨勢(shì)，推測(cè)高劑量使用QE會(huì)造成腸道氧化損傷。

3.3 QE對(duì)腸道NF-κB信號(hào)通路的影響

過(guò)量的活性氧（ROS）會(huì)對(duì)組織和細(xì)胞造成氧化損傷，而適量的炎癥因子參與損傷組織再生，可修復(fù)和愈合傷口[32-33]。NF-κB 通路在促炎基因表達(dá)中起主要作用[34]。本研究中，石斑魚(yú)腸道抗氧化水平有潛在下降趨勢(shì)，這可能會(huì)導(dǎo)致腸道NF-κB 信號(hào)通路的激活[34-35]，因此檢測(cè)了NF-κB 通路相關(guān)基因在腸道中的表達(dá)。結(jié)果表明，雜交石斑魚(yú)腸道NF-κB信號(hào)通路被激活，TNF-α在QE 添加組中顯著上調(diào)，QEH 組差異最顯著。在肉雞（Gallus domestiaus）脾臟[36]中亦有類(lèi)似現(xiàn)象。QE 可能通過(guò)增加腸道中ROS 含量直接或間接激活了NF-κB 信號(hào)通路[35]。TNF-α是早期炎癥發(fā)生過(guò)程中的重要成分。目前已證明草本飼料添加劑對(duì)魚(yú)類(lèi)炎癥基因的表達(dá)有促進(jìn)作用，可上調(diào)TNF-α基因在魚(yú)腸道中的表達(dá)[37-38]。據(jù)此推測(cè)，QE 可能作為介質(zhì)參與了炎癥反應(yīng)。草本飼料添加劑與魚(yú)類(lèi)炎癥反應(yīng)間的聯(lián)系仍需進(jìn)一步研究。

3.4 QE對(duì)雜交石斑魚(yú)腸道菌群的影響

腸道是魚(yú)類(lèi)的消化和免疫器官，腸道菌群在維持宿主腸道功能，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收、代謝，調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能等方面有重要作用[39]。在人類(lèi)腸道中，微生物參與黃酮類(lèi)化合物的轉(zhuǎn)化[40]，因此，QE 可能會(huì)改變腸道菌群的組成。本研究中，雜交石斑魚(yú)腸道菌群在門(mén)水平主要為厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)、放線(xiàn)菌門(mén)和疣微菌門(mén)，與He 等[41]的珍珠龍膽石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus♀×E.lanceolatus♂）腸道優(yōu)勢(shì)菌群研究結(jié)果一致。這些菌群通常是雜交石斑魚(yú)的腸道核心菌群。研究發(fā)現(xiàn)，厚壁菌門(mén)、變形菌門(mén)、擬桿菌門(mén)在海洋和淡水魚(yú)類(lèi)腸道微生物群中占90%[42-43]，在宿主腸道的營(yíng)養(yǎng)吸收和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。因此，QE 未改變雜交石斑魚(yú)腸道核心菌群組成。

通常，腸道菌群的多樣性越高，微生態(tài)系統(tǒng)越穩(wěn)定，腸道菌群多樣性降低可能導(dǎo)致細(xì)菌群落功能穩(wěn)定性降低，增加機(jī)體患病風(fēng)險(xiǎn)[44]。在對(duì)蝦（Lito‐penaeus vannamei）的研究中發(fā)現(xiàn)，疾病會(huì)導(dǎo)致其腸道菌群組成顯著改變[45]。本研究中，與FM 組相比，QEM 和QEH 組的OTU 數(shù)目顯著下降，這可能會(huì)影響雜交石斑魚(yú)的腸道健康狀況。腸道微生物有塑造炎癥微環(huán)境的潛力，炎癥可能會(huì)影響微生物的組成[46]。研究發(fā)現(xiàn)，益生菌補(bǔ)充劑通過(guò)抑制NFκB 的激活改善腸道微生物紊亂[47]。這意味著腸道微生物失衡可能激活NF-κB。本研究中，TNF-α表達(dá)水平在FM 與QEM 組間無(wú)顯著差異；QEM 組擬桿菌門(mén)菌群的相對(duì)豐度顯著降低，放線(xiàn)菌門(mén)占比顯著增加。放線(xiàn)菌門(mén)細(xì)菌可產(chǎn)生豐富的生物活性物質(zhì)，其代謝的活性物質(zhì)具有抗菌、抗腫瘤、抗病毒等活性，放線(xiàn)菌門(mén)還有調(diào)節(jié)腸道菌群的平衡和緩解腸道炎癥反應(yīng)的作用[48]，此外，腸道炎癥常伴隨著擬桿菌門(mén)相對(duì)豐度下降[49]。因此，QE 可能通過(guò)調(diào)節(jié)擬桿菌門(mén)和放線(xiàn)菌門(mén)菌群的占比，對(duì)NF-κB 通路的激活產(chǎn)生影響。變形菌門(mén)細(xì)菌包括許多病原菌，腸道微生態(tài)失衡的過(guò)程中常伴隨著變形菌門(mén)的增加[50]。本研究中，變形菌門(mén)在QEL 和QEH 組中占比增加，TNF-α 表達(dá)顯著上調(diào)，推測(cè)變形菌門(mén)可能參與了對(duì)NF-κB 通路的調(diào)控。在屬水平上，QEM 組雙歧桿菌屬占比顯著增加。研究證實(shí)，雙歧桿菌CCFM683 顯著降低炎性因子的表達(dá)來(lái)緩解DSS 誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎[51]。同時(shí)，滅活雙歧桿菌可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌抗炎因子[52]。與FM 組相比，在QEL 和QEH 組中，脫硫弧菌屬和艾克曼菌屬占比增加。脫硫弧菌屬會(huì)破壞腸黏膜上皮細(xì)胞，損傷腸黏膜的屏障功能[53]。艾克曼菌屬定殖豐度過(guò)高的小鼠更易導(dǎo)致過(guò)敏性腹瀉[54]?？梢?jiàn)，QE 可通過(guò)調(diào)節(jié)腸道菌群結(jié)構(gòu)，具有塑造腸道炎癥微環(huán)境的潛力。

4 結(jié)論

1）本實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，飼料中添加0.8～3.2 mmol/kg QE 可降低雜交石斑魚(yú)存活率，提高肝臟抗氧化能力。

2）QE 可激活腸道中NF-κB 信號(hào)通路，降低腸道微生物多樣性，有腸道促炎活性。