買占海,盧亞賓,李建龍,李曉斌,徐文慧,李 海,況 玲
(1.新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院,烏魯木齊 830052;2.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站,新疆昭蘇 835600)
【研究意義】近些年新疆各地州不斷從國外引進優(yōu)質(zhì)純種馬[1]。英純血馬具有遺傳性能穩(wěn)定,適應能力強,適合雜交選育等優(yōu)點,能有效地改良和提高其它品種的速度[2]。由于新疆冬季寒冷而冗長,純血馬在新疆因飼養(yǎng)管理、環(huán)境氣候等各種因素的變化,造成馬匹繁殖性能低下、妊娠馬匹流產(chǎn)率高等因素,制約著新疆馬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。【前人研究進展】中草藥作為一種天然的藥物飼料添加劑,其中的有效成分能很好的被草食家畜所吸收,相比于化合藥物的毒副作用有明顯優(yōu)勢[3]。馬愛團等[4]研究表明,復方中藥TSPSS可以通過不同機制改善機體的內(nèi)環(huán)境,從根本上治療先兆流產(chǎn),維持胚胎的正常發(fā)育?!颈狙芯壳腥朦c】針對新疆地區(qū)冬季漫長而寒冷,飼料不足,春季短促且氣溫多變造成的流產(chǎn),采用《中華人民共和國獸藥典》(2000年版)中收載有泰山盤石散方劑(TSPSS)[5]。需研究復方中草藥泰山磐石散加減方(TSPSS)對妊娠不同階段英純血母馬血液指標的影響?!緮M解決的關(guān)鍵問題】采用磐石散加減方對妊娠母馬的生理、生化、肝腎功能的調(diào)節(jié)進行研究,分析TSPSS對不同妊娠階段英純血馬血液生理生化指標的影響,為防止孕馬流產(chǎn)中草藥飼料添加劑提供參考。
1.1.1 試驗馬匹
選取新疆昭蘇縣伊犁馬場繁育中心妊娠7~10月齡,體重480~550 kg的自繁英純血母馬19匹。
1.1.2 藥品
根據(jù)復方藥的成人用量,通過實驗動物用藥量的換算公式(B種動物的劑量(mg/kg)=W×A種動物的劑量(mg/kg):W為折算系數(shù)),得到母馬正常用藥量[6,7]。中草藥TSPSS散(黨參、黃芪、當歸、續(xù)斷、黃芩、熟地、川芎、白芍、白術(shù)、炙甘草組成),購自新疆伊犁昭蘇縣東方康泰藥房。
1.1.3 主要試劑與儀器及檢測
全自動血細胞分析儀PE-6800(深圳市普康電子有限公司)檢測血液常規(guī)指標:白細胞總數(shù)WBC、淋巴細胞LYMPH、中間細胞MID、粒細胞GRAN、淋巴細胞比例LYM%、中間細胞比例MID%、粒細胞比例GRAN%、紅細胞數(shù)RBC、血紅蛋白HGB;低速離心機(上海皖寧精密儀器公司);全自動生化儀(愛德士緬因生物制品有限公司)檢測血清生化指標:總蛋白TP、白蛋白ALB、球蛋白GLOB、總膽紅素TBIL、堿性磷酸酶ALKP、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶ALT、尿素氮UREA、肌酐CREA、胰淀粉酶AMYL、膽固醇CHOL、血糖GLU、磷PHOS、鈣離子Ca2+;放射免疫法測定激素指標:雌激素E2、孕酮P,試劑盒購自長春賽諾邁德醫(yī)學技術(shù)有限公司。
1.2.1 試驗設(shè)計
以新疆昭蘇縣伊犁馬場繁育中心自繁英純血妊娠母馬為研究對象,以妊娠階段分組,分別于妊娠的第210、240、270和300 d 4個階段連續(xù)5 d補喂TSPSS,日糧組成和飼養(yǎng)管理相同。
1.2.2 飼養(yǎng)管理
試驗馬匹單槽位獨立圈舍飼養(yǎng),夜間至凌晨(20:00~10:00)在馬廄飼喂,白天(10:00~20:00)在運動場自由采食及活動,每天馬匹定時定點定量飼喂。表1,表2
表1 妊娠母馬飼喂草料時間次序Table 1 Feeding time sequence table of forage for pregnant mare
表2 日糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of mare diet(DM basis)(%)
1.2.3 用藥
1.2.3.1 中草藥制備
先將中草藥TSPSS方劑粉碎,把中藥放置砂鍋中倒入水沒過中藥即可,浸泡30 min,先武火(150~220℃)煮沸,再用文火(80~120℃)煎熬并不斷攪拌,將藥中水分煎制蒸發(fā)完并呈濃稠狀為止,冷卻后備用。
1.2.3.2 中草藥補飼
熬制好的中草藥TSPSS方劑與2 kg精飼料拌勻后,在妊娠第210、240、270和300 d的當天下午20:00飼喂干草后的2 h給藥。
1.2.4 血液樣品的采集、處理
母馬在每個階段飼喂中藥前和結(jié)束后的第2 d 08:00空腹采取2管血液,1管用5 mL EDTA-K2采血管靜脈采血3~5 mL,搖勻后用備用。另1管用不含抗凝劑的普通采血管靜脈采血3~5 mL,血液3 000 r/min離心10 min,吸出血清分裝至2 mL離心管-20℃保存。
試驗數(shù)據(jù)均以平均值±標準差(mean±SD)表示,采用SPSS 19.0軟件進行多因素單純方差分析。
研究表明,WBC在第3階段顯著高于用藥前(P<0.05),但在正常范圍內(nèi);LYMPH第4階段顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.05);MID在第4階段顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.05);GRAN及GRAN比例在4個階段中呈顯著升高的趨勢(P<0.05),第4階段極顯著高于第一階段(P<0.01);LYM比例在第4階段極顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.01);RBC和HGB含量在4個階段無顯著性差異(P>0.05)。表3
表3 4個階段血液生理檢測變化Table 3 Blood physiological results in four stages
研究表明,ALB第3、4階段顯著低于用藥前(P<0.05);TBIL含量第2階段顯著高于用藥前和其他各階段(P<0.05);TP、CREA、UREA、GLOB等用藥前后相比無明顯變化(P>0.05),均在正常范圍;CHOL在4個階段中呈遞減趨勢,無顯著性差異(P>0.05),在正常范圍;Ca離子第4階段顯著高于第2階段(P<0.05)。表4
表4 4個階段血液生化變化Table 4 Blood biochemical results in four stages
研究表明,E2在第4階段顯著低于用藥前(P<0.05),4個階段與用藥前相比呈降低趨勢;P在4個階段無顯著性變化(P>0.05),第1至3階段呈升高趨勢,在第4階段比用藥前有所降低,均在正常范圍內(nèi)。表5
表5 4個階段激素變化Table 5 The results of four stages of hormone
中草藥添加劑是一種純天然的新型飼料添加劑,其具有副作用小、無耐藥性等天然優(yōu)勢不容易殘留在肉、蛋、奶等畜產(chǎn)品中[8]。胡元亮[9]曾報道應用中藥飼料添加劑能夠提高飼料利用率,改善動物營養(yǎng)狀況,提高動物抗病力,可有效預防動物流產(chǎn)。試驗所用的中草藥TSPSS散加減方,具有滋養(yǎng)肝、脾、胃,補氣血等功效,其中白術(shù)為健脾安胎要藥,黃芪、黨參可起到健脾、活氣、補氣系胎的功效,續(xù)斷起到強腎、固胎的功效,熟地、當歸和川芎可補氣活血,炙甘草可滋陰降火、化癖[10]。
血液常規(guī)指標能夠直觀反映出動物機體的疾病、應激等變化[11]。WBC包括LYMPH、MNC和GRAN,其在機體抵御疾病、免疫和內(nèi)分泌等生理機能中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用,是一類具有非特異性免疫功能的血液細胞[12]。WBC在第三階段顯著高于用藥前,補飼中草藥TSPSS加減方后機體會出現(xiàn)自發(fā)免疫和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用。與王洪光等[13]發(fā)現(xiàn)在青田田魚飼料中添加中草藥添加劑可以使WBC顯著提高的結(jié)果一致。LYMPH在第四階段顯著低于用藥前和其他各階段,表明中草藥TSPSS加減方有抑制淋巴細胞的增殖的趨勢,能夠提高細胞免疫,與栗明月等[14]結(jié)果一致。LYMPH數(shù)量減少,該期孕馬的細胞免疫功能降低,活性受到抑制,降低了母體對胎兒的免疫排斥作用,使妊娠得以維持下去,也可能與妊娠母馬即將生產(chǎn)有關(guān)[15]。MID中MNC占較大比重,通過激活淋巴細胞發(fā)揮特異性免疫作用,在免疫反應中對抗原起呈遞和吞噬作用。試驗中MID顯著低于其他各階段和用藥前,MID數(shù)量減少,降低了MID在WBC中的比例,可能使MID起抗原呈遞作用的細胞數(shù)量減少,抑制了免疫反應,影響了母體免疫排斥機制,起到保胎作用。GRAN具有運動能力和吞噬并殺滅入侵微生物功能,試驗中GRAN及GRAN比例在4個階段中呈顯著升高趨勢,第4階段極顯著高于第一階段;RBC和HGB含量在4個階段呈升高趨勢,但無顯著性差異,該中草藥TSPSS加減方具有一定的補血作用。
動物血清生化指標在一定程度能夠綜合反映出動物的生理狀態(tài)和健康狀況,對動物機體代謝、營養(yǎng)狀況及疾病有重要意義[16]。當機體發(fā)生生理性或病理性變化時,能夠從血液指標中反映出來,在繁殖和疾病預防等方面具有重要的參考價值[17]。TP的主要成分是ALB和GLOB,血清蛋白具有維持血液正常膠體滲透壓和pH、運輸大量代謝物、調(diào)節(jié)被運輸物質(zhì)的生理作用和解除其毒性、免疫作用以及營養(yǎng)作用等多種功能,主要反映肝臟合成功能的高低[18]。試驗中ALB含量第3、4階段顯著低于用藥前,表明中草藥TSPSS加減方對懷孕后期英純血馬肝臟具有保護作用;TP和GLOB含量在用藥前后無顯著性差異,無統(tǒng)計學意義,但GLOB呈升高趨勢,機體免疫機能增強,與段海濤[19]、陳小連等[20]研究結(jié)果一致。Keady等[21]在羔羊日糧中添加鈷,發(fā)現(xiàn)ALB的含量升高,但球GLOB和UREA含量不受影響,與試驗結(jié)果一致。TBIL在第2階段中突然高于其他各階段,可能是動物機體生理性的自我調(diào)節(jié),在調(diào)節(jié)后自行恢復。ALKP是體內(nèi)消化代謝的關(guān)鍵酶,能夠加速體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的獲取和轉(zhuǎn)運,酶活性增加有利于提高動物平均日增重,是反映骨代謝的重要指標[22]。試驗中用藥后ALKP含量明顯升高,可能與孕馬后期的胎兒發(fā)育有關(guān),能夠促進胎兒的生長發(fā)育。ALT在4個階段中有上升趨勢并在正常范圍內(nèi),ALT可以參與蛋白質(zhì)新陳代謝,可加快蛋白質(zhì)氨基酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化。血中UREA、CREA水平都是評價腎功能的重要指標,是蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡的重要指標[23-24]。試驗結(jié)果顯示,UREA、CREA用藥前后在4個階段中沒有顯著性差異,中草藥方劑對妊娠馬的腎功能沒有影響。GLU是動物生長發(fā)育及代謝所必需的主要能量來源[25]。試驗結(jié)果顯示,補飼中草藥TSPSS后血清GLU含量明顯升高,CHOL呈下降趨勢,降低了體內(nèi)脂肪代謝,中草藥TSPSS對懷孕后期英純血馬能夠有效促進孕馬及胎兒的生長發(fā)育[26-28]。Ca2+含量在4個階段中存在差異性,第4階段顯著高于用藥前,可能是中草藥TSPSS促進孕馬對鈣離子的吸收來保證妊娠所需的鈣,促進胎兒的正常發(fā)育;P含量在飼喂后有所升高但無顯著性差異。鈣磷比例呈正相關(guān)升高。
E2通過改變血管壁選擇透過性,使營養(yǎng)物質(zhì)輸送加快E2激發(fā)腎上腺皮質(zhì)激素的生成及分泌有關(guān)聯(lián)。E2在第4階段顯著低于用藥前,中草藥TSPSS能夠減弱子宮的收縮活性,有效的維持妊娠后期的激素水平達到保胎的效果。
孕酮(P)的主要作用是保持胎兒的正常發(fā)育以及子宮的穩(wěn)定,影響子宮平滑肌細胞的通透性,一定量的P激素水平是維持妊娠的必要條件,如果P的濃度在妊娠后期下降過快會引起子宮收縮而引發(fā)流產(chǎn)[28]。孕期母體內(nèi)高水平的P還可以顯著抑制淋巴細胞的激活和細胞毒性,有利于母體對胎兒的免疫耐受。血清中P含量>31.8 nmoL/L時能夠起到保胎作用[29,30]。P水平在4個階段中保持相對穩(wěn)定,呈升高趨勢,在第4階段有所下降,但在正常參考范圍內(nèi),可能與馬臨近分娩有關(guān)。
妊娠7~10月齡英純血馬補飼中草藥TSPSS散加減方對馬血液中的白細胞、淋巴細胞和中間細胞有調(diào)節(jié)作用,白細胞數(shù)270 d高于用藥前,淋巴細胞數(shù)和中間細胞300 d低于用藥前和其他各階段,但均在正常范圍內(nèi);對馬血清中的白蛋白和總膽紅素有調(diào)控作用,白蛋白在第270 d和300 d低于用藥前,總膽紅素在240 d高于用藥前和其他各階段,但均在正常參考范圍內(nèi);雌激素在300 d低于用藥前,在正常范圍內(nèi),TSPSS對馬肝腎功能無影響,能夠有效增強機體的代謝水平,促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收,提高孕馬后期的免疫力,具有預防流產(chǎn)的作用。