泰山磐石散加減方對妊娠不同階段英純血馬血液生理生化指標的影響

買占海，盧亞賓，李建龍，李曉斌，徐文慧，李 海，況 玲

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院，烏魯木齊 830052；2.昭蘇縣畜牧獸醫(yī)站，新疆昭蘇 835600)

0 引 言

【研究意義】近些年新疆各地州不斷從國外引進優(yōu)質(zhì)純種馬[1]。英純血馬具有遺傳性能穩(wěn)定，適應能力強，適合雜交選育等優(yōu)點，能有效地改良和提高其它品種的速度[2]。由于新疆冬季寒冷而冗長，純血馬在新疆因飼養(yǎng)管理、環(huán)境氣候等各種因素的變化，造成馬匹繁殖性能低下、妊娠馬匹流產(chǎn)率高等因素，制約著新疆馬產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。【前人研究進展】中草藥作為一種天然的藥物飼料添加劑，其中的有效成分能很好的被草食家畜所吸收，相比于化合藥物的毒副作用有明顯優(yōu)勢[3]。馬愛團等[4]研究表明，復方中藥TSPSS可以通過不同機制改善機體的內(nèi)環(huán)境，從根本上治療先兆流產(chǎn)，維持胚胎的正常發(fā)育?！颈狙芯壳腥朦c】針對新疆地區(qū)冬季漫長而寒冷，飼料不足，春季短促且氣溫多變造成的流產(chǎn)，采用《中華人民共和國獸藥典》(2000年版)中收載有泰山盤石散方劑(TSPSS)[5]。需研究復方中草藥泰山磐石散加減方(TSPSS)對妊娠不同階段英純血母馬血液指標的影響?！緮M解決的關(guān)鍵問題】采用磐石散加減方對妊娠母馬的生理、生化、肝腎功能的調(diào)節(jié)進行研究，分析TSPSS對不同妊娠階段英純血馬血液生理生化指標的影響，為防止孕馬流產(chǎn)中草藥飼料添加劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材 料

1.1.1 試驗馬匹

選取新疆昭蘇縣伊犁馬場繁育中心妊娠7～10月齡，體重480～550 kg的自繁英純血母馬19匹。

1.1.2 藥品

根據(jù)復方藥的成人用量，通過實驗動物用藥量的換算公式(B種動物的劑量(mg/kg)=W×A種動物的劑量(mg/kg)：W為折算系數(shù))，得到母馬正常用藥量[6，7]。中草藥TSPSS散(黨參、黃芪、當歸、續(xù)斷、黃芩、熟地、川芎、白芍、白術(shù)、炙甘草組成)，購自新疆伊犁昭蘇縣東方康泰藥房。

1.1.3 主要試劑與儀器及檢測

全自動血細胞分析儀PE-6800(深圳市普康電子有限公司)檢測血液常規(guī)指標：白細胞總數(shù)WBC、淋巴細胞LYMPH、中間細胞MID、粒細胞GRAN、淋巴細胞比例LYM%、中間細胞比例MID%、粒細胞比例GRAN%、紅細胞數(shù)RBC、血紅蛋白HGB；低速離心機(上海皖寧精密儀器公司)；全自動生化儀(愛德士緬因生物制品有限公司)檢測血清生化指標：總蛋白TP、白蛋白ALB、球蛋白GLOB、總膽紅素TBIL、堿性磷酸酶ALKP、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶ALT、尿素氮UREA、肌酐CREA、胰淀粉酶AMYL、膽固醇CHOL、血糖GLU、磷PHOS、鈣離子Ca2+；放射免疫法測定激素指標：雌激素E2、孕酮P，試劑盒購自長春賽諾邁德醫(yī)學技術(shù)有限公司。

1.2 方 法

1.2.1 試驗設(shè)計

以新疆昭蘇縣伊犁馬場繁育中心自繁英純血妊娠母馬為研究對象，以妊娠階段分組，分別于妊娠的第210、240、270和300 d 4個階段連續(xù)5 d補喂TSPSS，日糧組成和飼養(yǎng)管理相同。

1.2.2 飼養(yǎng)管理

試驗馬匹單槽位獨立圈舍飼養(yǎng)，夜間至凌晨(20:00～10:00)在馬廄飼喂，白天(10:00～20:00)在運動場自由采食及活動，每天馬匹定時定點定量飼喂。表1，表2

表1 妊娠母馬飼喂草料時間次序Table 1 Feeding time sequence table of forage for pregnant mare

表2 日糧組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 2 Composition and nutrient levels of mare diet(DM basis)(%)

1.2.3 用藥

1.2.3.1 中草藥制備

先將中草藥TSPSS方劑粉碎，把中藥放置砂鍋中倒入水沒過中藥即可，浸泡30 min，先武火(150～220℃)煮沸，再用文火(80～120℃)煎熬并不斷攪拌，將藥中水分煎制蒸發(fā)完并呈濃稠狀為止，冷卻后備用。

1.2.3.2 中草藥補飼

熬制好的中草藥TSPSS方劑與2 kg精飼料拌勻后，在妊娠第210、240、270和300 d的當天下午20:00飼喂干草后的2 h給藥。

1.2.4 血液樣品的采集、處理

母馬在每個階段飼喂中藥前和結(jié)束后的第2 d 08：00空腹采取2管血液，1管用5 mL EDTA-K2采血管靜脈采血3～5 mL，搖勻后用備用。另1管用不含抗凝劑的普通采血管靜脈采血3～5 mL，血液3 000 r/min離心10 min，吸出血清分裝至2 mL離心管-20℃保存。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)均以平均值±標準差(mean±SD)表示，采用SPSS 19.0軟件進行多因素單純方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同階段用藥對馬血液生理檢測的影響

研究表明，WBC在第3階段顯著高于用藥前(P<0.05)，但在正常范圍內(nèi)；LYMPH第4階段顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.05)；MID在第4階段顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.05)；GRAN及GRAN比例在4個階段中呈顯著升高的趨勢(P<0.05)，第4階段極顯著高于第一階段(P<0.01)；LYM比例在第4階段極顯著低于用藥前和其他各階段(P<0.01)；RBC和HGB含量在4個階段無顯著性差異(P>0.05)。表3

表3 4個階段血液生理檢測變化Table 3 Blood physiological results in four stages

2.2 不同階段用藥對馬血液生化檢測的影響

研究表明，ALB第3、4階段顯著低于用藥前(P<0.05)；TBIL含量第2階段顯著高于用藥前和其他各階段(P<0.05)；TP、CREA、UREA、GLOB等用藥前后相比無明顯變化(P>0.05)，均在正常范圍；CHOL在4個階段中呈遞減趨勢，無顯著性差異(P>0.05)，在正常范圍；Ca離子第4階段顯著高于第2階段(P<0.05)。表4

表4 4個階段血液生化變化Table 4 Blood biochemical results in four stages

2.3 不同階段用藥對馬血液激素檢測的影響

研究表明，E2在第4階段顯著低于用藥前(P<0.05)，4個階段與用藥前相比呈降低趨勢；P在4個階段無顯著性變化(P>0.05)，第1至3階段呈升高趨勢，在第4階段比用藥前有所降低，均在正常范圍內(nèi)。表5

表5 4個階段激素變化Table 5 The results of four stages of hormone

3 討 論

中草藥添加劑是一種純天然的新型飼料添加劑，其具有副作用小、無耐藥性等天然優(yōu)勢不容易殘留在肉、蛋、奶等畜產(chǎn)品中[8]。胡元亮[9]曾報道應用中藥飼料添加劑能夠提高飼料利用率，改善動物營養(yǎng)狀況，提高動物抗病力，可有效預防動物流產(chǎn)。試驗所用的中草藥TSPSS散加減方，具有滋養(yǎng)肝、脾、胃，補氣血等功效，其中白術(shù)為健脾安胎要藥，黃芪、黨參可起到健脾、活氣、補氣系胎的功效，續(xù)斷起到強腎、固胎的功效，熟地、當歸和川芎可補氣活血，炙甘草可滋陰降火、化癖[10]。

3.1 補飼TSPSS對孕馬后期血液常規(guī)指標的影響

血液常規(guī)指標能夠直觀反映出動物機體的疾病、應激等變化[11]。WBC包括LYMPH、MNC和GRAN，其在機體抵御疾病、免疫和內(nèi)分泌等生理機能中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，是一類具有非特異性免疫功能的血液細胞[12]。WBC在第三階段顯著高于用藥前，補飼中草藥TSPSS加減方后機體會出現(xiàn)自發(fā)免疫和內(nèi)分泌調(diào)節(jié)作用。與王洪光等[13]發(fā)現(xiàn)在青田田魚飼料中添加中草藥添加劑可以使WBC顯著提高的結(jié)果一致。LYMPH在第四階段顯著低于用藥前和其他各階段，表明中草藥TSPSS加減方有抑制淋巴細胞的增殖的趨勢，能夠提高細胞免疫，與栗明月等[14]結(jié)果一致。LYMPH數(shù)量減少，該期孕馬的細胞免疫功能降低，活性受到抑制，降低了母體對胎兒的免疫排斥作用，使妊娠得以維持下去，也可能與妊娠母馬即將生產(chǎn)有關(guān)[15]。MID中MNC占較大比重，通過激活淋巴細胞發(fā)揮特異性免疫作用，在免疫反應中對抗原起呈遞和吞噬作用。試驗中MID顯著低于其他各階段和用藥前，MID數(shù)量減少，降低了MID在WBC中的比例，可能使MID起抗原呈遞作用的細胞數(shù)量減少，抑制了免疫反應，影響了母體免疫排斥機制，起到保胎作用。GRAN具有運動能力和吞噬并殺滅入侵微生物功能，試驗中GRAN及GRAN比例在4個階段中呈顯著升高趨勢，第4階段極顯著高于第一階段；RBC和HGB含量在4個階段呈升高趨勢，但無顯著性差異，該中草藥TSPSS加減方具有一定的補血作用。

3.2 補飼TSPSS對孕馬后期血清生化指標的影響

動物血清生化指標在一定程度能夠綜合反映出動物的生理狀態(tài)和健康狀況，對動物機體代謝、營養(yǎng)狀況及疾病有重要意義[16]。當機體發(fā)生生理性或病理性變化時，能夠從血液指標中反映出來，在繁殖和疾病預防等方面具有重要的參考價值[17]。TP的主要成分是ALB和GLOB，血清蛋白具有維持血液正常膠體滲透壓和pH、運輸大量代謝物、調(diào)節(jié)被運輸物質(zhì)的生理作用和解除其毒性、免疫作用以及營養(yǎng)作用等多種功能，主要反映肝臟合成功能的高低[18]。試驗中ALB含量第3、4階段顯著低于用藥前，表明中草藥TSPSS加減方對懷孕后期英純血馬肝臟具有保護作用；TP和GLOB含量在用藥前后無顯著性差異，無統(tǒng)計學意義，但GLOB呈升高趨勢，機體免疫機能增強，與段海濤[19]、陳小連等[20]研究結(jié)果一致。Keady等[21]在羔羊日糧中添加鈷，發(fā)現(xiàn)ALB的含量升高，但球GLOB和UREA含量不受影響，與試驗結(jié)果一致。TBIL在第2階段中突然高于其他各階段，可能是動物機體生理性的自我調(diào)節(jié)，在調(diào)節(jié)后自行恢復。ALKP是體內(nèi)消化代謝的關(guān)鍵酶，能夠加速體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的獲取和轉(zhuǎn)運，酶活性增加有利于提高動物平均日增重，是反映骨代謝的重要指標[22]。試驗中用藥后ALKP含量明顯升高，可能與孕馬后期的胎兒發(fā)育有關(guān)，能夠促進胎兒的生長發(fā)育。ALT在4個階段中有上升趨勢并在正常范圍內(nèi)，ALT可以參與蛋白質(zhì)新陳代謝，可加快蛋白質(zhì)氨基酸在體內(nèi)轉(zhuǎn)化。血中UREA、CREA水平都是評價腎功能的重要指標，是蛋白質(zhì)代謝和氨基酸平衡的重要指標[23-24]。試驗結(jié)果顯示，UREA、CREA用藥前后在4個階段中沒有顯著性差異，中草藥方劑對妊娠馬的腎功能沒有影響。GLU是動物生長發(fā)育及代謝所必需的主要能量來源[25]。試驗結(jié)果顯示，補飼中草藥TSPSS后血清GLU含量明顯升高，CHOL呈下降趨勢，降低了體內(nèi)脂肪代謝，中草藥TSPSS對懷孕后期英純血馬能夠有效促進孕馬及胎兒的生長發(fā)育[26-28]。Ca2+含量在4個階段中存在差異性，第4階段顯著高于用藥前，可能是中草藥TSPSS促進孕馬對鈣離子的吸收來保證妊娠所需的鈣，促進胎兒的正常發(fā)育；P含量在飼喂后有所升高但無顯著性差異。鈣磷比例呈正相關(guān)升高。

3.3 補飼TSPSS對孕馬后期血清激素指標的影響

E2通過改變血管壁選擇透過性，使營養(yǎng)物質(zhì)輸送加快E2激發(fā)腎上腺皮質(zhì)激素的生成及分泌有關(guān)聯(lián)。E2在第4階段顯著低于用藥前，中草藥TSPSS能夠減弱子宮的收縮活性，有效的維持妊娠后期的激素水平達到保胎的效果。

孕酮(P)的主要作用是保持胎兒的正常發(fā)育以及子宮的穩(wěn)定，影響子宮平滑肌細胞的通透性，一定量的P激素水平是維持妊娠的必要條件，如果P的濃度在妊娠后期下降過快會引起子宮收縮而引發(fā)流產(chǎn)[28]。孕期母體內(nèi)高水平的P還可以顯著抑制淋巴細胞的激活和細胞毒性，有利于母體對胎兒的免疫耐受。血清中P含量>31.8 nmoL/L時能夠起到保胎作用[29，30]。P水平在4個階段中保持相對穩(wěn)定，呈升高趨勢，在第4階段有所下降，但在正常參考范圍內(nèi)，可能與馬臨近分娩有關(guān)。

4 結(jié) 論

妊娠7～10月齡英純血馬補飼中草藥TSPSS散加減方對馬血液中的白細胞、淋巴細胞和中間細胞有調(diào)節(jié)作用，白細胞數(shù)270 d高于用藥前，淋巴細胞數(shù)和中間細胞300 d低于用藥前和其他各階段，但均在正常范圍內(nèi)；對馬血清中的白蛋白和總膽紅素有調(diào)控作用，白蛋白在第270 d和300 d低于用藥前，總膽紅素在240 d高于用藥前和其他各階段，但均在正常參考范圍內(nèi)；雌激素在300 d低于用藥前，在正常范圍內(nèi)，TSPSS對馬肝腎功能無影響，能夠有效增強機體的代謝水平，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收，提高孕馬后期的免疫力，具有預防流產(chǎn)的作用。