活動期白癜風(fēng)患者血清γ干擾素含量升高

趙肖靈，何潤之，孫玉姣，張小沖，楊林芳，王 瑞，程 芳*

(河北醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 邢臺市人民醫(yī)院 1.腫瘤實驗室； 2.神經(jīng)外三科； 3.皮膚科；4.科研與教學(xué)科, 河北 邢臺 054001)

白癜風(fēng)(vitiligo)是一種后天獲得的自身免疫性疾病，由于黑素細(xì)胞被破壞而引起的慢性皮膚色素脫失[1]。目前，全球白癜風(fēng)患病率為0.5%～2%，印度患病率最高，達(dá)到8.8%[2]。白癜風(fēng)發(fā)病年齡多在10～30歲，研究表明50%的病例發(fā)生在20歲之前，25%的病例發(fā)生在10歲之前[3]。白癜風(fēng)的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且尚未明確，其中部分患者治療困難且易反復(fù)，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[4-5]。白癜風(fēng)作為一種難治性和復(fù)雜性的疾病，許多細(xì)胞因子及炎性介質(zhì)在血清中的表達(dá)與白癜風(fēng)的發(fā)生發(fā)展可能具有相關(guān)性。根據(jù)疾病發(fā)展?fàn)顟B(tài)，白癜風(fēng)可以分為活動期和穩(wěn)定期，活動期白癜風(fēng)具有獨(dú)特的同形反應(yīng)，不同時期的白癜風(fēng)治療方法和藥物用量有一定區(qū)別，因而探討有明確意義的白癜風(fēng)血清標(biāo)志物有利于病情監(jiān)測及臨床診療方案的制定和調(diào)整。本研究通過對C-反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子 α(tumor necrosis factor-α, TNF-α))、腫瘤壞死因子β(tumor necrosis factor-β, TNF-β)、E-鈣黏附素(E-cadherin, E-cad)、γ干擾素(human interferon-γ, IFN-γ)等細(xì)胞因子和CD8(cluster of differentiation 8，CD8)在白癜風(fēng)患者及健康人血清的含量分析，擴(kuò)充白癜風(fēng)血清標(biāo)志物隊列，為白癜風(fēng)臨床診療提供新的依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象：選取2017年5月至2018年12月在邢臺市人民醫(yī)院皮膚科就診的60例白癜風(fēng)患者(分為活動期組和穩(wěn)定期組各30例)。納入標(biāo)準(zhǔn):1)年齡18～65歲; 2)病程≥3個月;3)無任何并發(fā)癥；4)非節(jié)段型白癜風(fēng)患者。排除標(biāo)準(zhǔn): 1)采血前3 個月內(nèi)接受過系統(tǒng)治療; 2)有合并其他系統(tǒng)性疾病病史。同時納入30 例體檢中心篩選的無既往病史的健康人群作為對照組。本研究經(jīng)邢臺市人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(批件編號：2016026)，受試者均簽署知情同意書。

穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者的定義為1年內(nèi)病變沒有新發(fā)展，病變大小穩(wěn)定，無同形反應(yīng)發(fā)生，或者有新皮損或原皮損面積擴(kuò)大，但有自發(fā)色素生成[6]；活動期白癜風(fēng)患者的定義為1年內(nèi)病情有進(jìn)展，有新皮損，有同形反應(yīng)發(fā)生，或者原皮損在大小和形狀上延伸，但無自發(fā)色素生成[5]。

1.1.2 治療方法： 所有患者均采用相同的治療方法，口服白芍總甘和復(fù)方甘草酸苷(均每次2片，3次/d)，外用濃度0.1%的他克莫司(2次/d)。

1.1.3 試劑：CRP、TNF-α、TNF-β、E-cad、IFN-γ和CD8試劑盒(上海酶聯(lián)生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分離血清：取6 mL外周靜脈血，室溫靜置20 min后4 ℃靜置40 min，3 000 r/min離 心10 min，取上清，-80 ℃冰箱保存。

1.2.2 ELISA檢測細(xì)胞因子：血清 CRP、TNF-α、TNF-β、E-cad、IFN-γ和CD8的檢測均嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書進(jìn)行。將96孔板置于波長450 nm酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度(A)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度和相應(yīng)吸光度值建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程計算各檢測樣本細(xì)胞因子濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 兩組人群一般人口學(xué)資料的比較

白癜風(fēng)患者共 60 例，其中穩(wěn)定期組和活動期組各30例， 健康對照組30例， 3組人群在年齡、性別和病史等方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。

2.2 白癜風(fēng)組和健康對照組血清 CRP、TNF-α、TNF-β、E-cad、CD8、IFN-γ的含量比較

穩(wěn)定期血清CRP、TNF-α、TNF-β、IFN-γ的含量顯著高于對照組(P<0.05)，活動期血清CRP、TNF-α、TNF-β、E-cad、CD8、IFN-γ的含量均顯著高于對照組(P<0.05)，活動期血清IFN-γ的含量顯著高于穩(wěn)定期(P<0.05)(表2)。

表1 患者的基本信息和臨床特征Table 1 Basic information and clinical features of patients(n=30)

表2 白癜風(fēng)活動期和穩(wěn)定期患者與健康對照者血清CRP、TNF-α、TNF-β、E-cad、IFN-γ、CD8 的含量

2.3 活動期組藥物治療3個月和6個月后，與治療前血清IFN-γ含量的比較

活動期白癜風(fēng)患者用藥3個月后，血清IFN-γ含量為(822±78)μg/L，與用藥前相比含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義；活動期白癜風(fēng)患者用藥6個月后，血清IFN-γ含量為(772±60)μg/L，與用藥前相比含量顯著降低(P<0.05)。

3 討論

CRP是一種急性反應(yīng)蛋白，在炎性反應(yīng)、細(xì)胞損傷或感染的情況下，由白細(xì)胞介素-6誘導(dǎo)后迅速從肝臟釋放出來。E-cad是一種細(xì)胞間連接蛋白，與EGFR/ERK和c-Src介導(dǎo)的信號傳導(dǎo)途徑存在協(xié)同作用[7]。白癜風(fēng)的發(fā)生過程伴隨黑素細(xì)胞的破壞，可能存在細(xì)胞間黏附性的減少，而且有研究表明E-cad在黑素細(xì)胞中的表達(dá)低于成纖維細(xì)胞[8]。CD8分子是一種白細(xì)胞分化抗原，在特異T細(xì)胞(CD8+T細(xì)胞)表面表達(dá)[9]，研究表明，白癜風(fēng)患者的皮膚病變區(qū)域CD4+T和CD8+T細(xì)胞高表達(dá)[10]。白癜風(fēng)的發(fā)生過程中伴隨著自身免疫反應(yīng)和黑素細(xì)胞的損傷、凋亡，這些因子可能參與其中，但本研究表明白癜風(fēng)患者血清中CRP、E-cad和CD8的含量與健康對照組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

在腫瘤壞死因子家族中，TNF-α和TNF-β是兩個具有代表性的成員。最初TNF-α是作為一種抗腫瘤分子被發(fā)現(xiàn)的；而TNF-β，又稱淋巴毒素-α，主要由活化的T、B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。白癜風(fēng)是一種自身免疫性疾病， TNF-α和TNF-β可能是參與激活了免疫反應(yīng)。

γ干擾素(IFN-γ)具有多種生物活性包括抗菌和免疫調(diào)節(jié)作用[11]。IFN-γ在腫瘤微環(huán)境中，能夠阻斷程序性死亡受體，提高免疫應(yīng)答反應(yīng)[12]。IFN-γ-JAK/STAT 是CTL-CXCL9/CXCL10 的上游調(diào)節(jié)通路，趨化因子 CXCL9 和 CXCL10能趨化血管中的CD8+T細(xì)胞向表皮真皮交界處遷移，對黑素細(xì)胞產(chǎn)生特異性殺傷作用，導(dǎo)致白癜風(fēng)的發(fā)生[13]。血清中IFN-γ含量升高可能促使趨化因子 CXCL9 和 CXCL10的產(chǎn)生。血清IFN-γ含量降低，可能是藥物治療后免疫反應(yīng)減弱CD8+T細(xì)胞遷移相應(yīng)減少。提示白癜風(fēng)血清IFN-γ含量或可作為輔助評價白癜風(fēng)活動性的實驗室指標(biāo)。