血清結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體檢測在肺結(jié)核診斷中的作用分析

殷紅玉

（高臺縣人民醫(yī)院，甘肅 高臺 734300）

結(jié)核病是由于結(jié)核分枝桿菌感染所致，可累及全身各個系統(tǒng)，由于其發(fā)病較為隱匿，臨床診斷困難。調(diào)查顯示，結(jié)核病已成為全球各類感染性疾病中導(dǎo)致成年人死亡的首要原因[1]，我國每年因結(jié)核病死亡的人數(shù)將近13 萬例[2]。目前細(xì)菌學(xué)檢查為結(jié)核病診斷金標(biāo)準(zhǔn)，但臨床研究發(fā)現(xiàn)[3]，傳統(tǒng)抗酸染色涂片敏感性僅為19.5%～35%，且分枝桿菌培養(yǎng)條件高，所需培養(yǎng)時間較長，通常超過6 周才能出報告。結(jié)核菌素皮膚試驗(yàn)（Tuberculin Skin Test,TST）為臨床應(yīng)用廣泛的檢測方法，但其所有的抗原結(jié)核菌素純蛋白衍生物出現(xiàn)假陽性的概率較高，且對有免疫抑制疾病的患者敏感度較低。PCR 基因診斷技術(shù)因?qū)嶒?yàn)條件限制，無法在很多基層單位開展。因此，應(yīng)尋找靈敏度、特異度高且簡便快速的診斷方法。血清結(jié)核抗體是國內(nèi)常用的肺結(jié)核篩查的主要方法，但其診斷結(jié)果易受多種因素影響，臨床多將其作為輔助診斷方式[4]。本研究中肺結(jié)核診斷應(yīng)用血清結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選取2017 年3 月—2019 年10 月甘肅省高臺縣人民醫(yī)院收治的肺結(jié)核患者137 例作為肺結(jié)核組，另選取103 例其他肺部疾病患者作為對照組。肺結(jié)核組男、女分別為75 例、62 例，年齡18～78 歲。對照組男、女分別為56 例、47 例，年齡18～81 歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）肺結(jié)核組均符合 《肺結(jié)核診斷和治療指南》[5]中相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，對照組均確診為肺部感染、支氣管擴(kuò)張并發(fā)感染與慢阻肺疾病，且均經(jīng)影像學(xué)檢查確診；（2）近3 個月未服用免疫抑制劑；（3）2 組患者均自愿參與研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）對照組患者既往無結(jié)核病史，無肺結(jié)核高風(fēng)險感染；（2）合并免疫功能缺陷；（3）合并嚴(yán)重臟器疾病。2 組一般資料相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

采用促凝血負(fù)壓管抽取患者肘靜脈血，以3 000 r/min 速率離心，取血清置于冰箱內(nèi)待檢。將冷藏的芯片與試劑取出后靜置至室溫，將鋁箔中芯片取出，并進(jìn)行編號。使用滴管或加樣器向蛋白芯片窗口中加入Tris 緩沖液與2%吐溫試劑配比而成的試劑A 200 μL，浸潤后采用滴管或加樣器注入100 μ 血清標(biāo)本，完全滲入后及時加入Tris 緩沖液與2%吐溫試劑配比而成的試劑B 300 μL，觀察其完全滲入后加樣器注入試劑C 500 μL (金標(biāo)抗人IgG)，滲入后加入Tris 緩沖液與2%吐溫試劑配比而成的試劑D 300 μL，采用生物芯片識別儀識別相應(yīng)芯片。操作方法嚴(yán)格遵循說明書，認(rèn)真記錄檢測結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

采用膠體金法檢測IgG、免疫球蛋白M（IgM），在出現(xiàn)質(zhì)控線C 的前提下若僅出現(xiàn)T1 反應(yīng)線，則提示IgM 抗體陽性，若僅出現(xiàn)T2 反應(yīng)線，則提示IgG 陽性，若同時出現(xiàn)T1、T2 反應(yīng)線，則提示IgG/IgM 陽性。采用蛋白芯片法檢測相對分子質(zhì)量3.8×104（38kD）蛋白抗體、相對分子質(zhì)量1.6×104 以下（16kD）蛋白抗體、血清脂阿拉伯甘露聚糖（LAM）蛋白抗體。記錄以上指標(biāo)單獨(dú)與聯(lián)合檢測結(jié)果，聯(lián)合檢測各指標(biāo)均為陽性則判斷為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

計數(shù)資料以%表示，采用檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。使用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件處理。

2 結(jié)果

2.1 2 組結(jié)核桿菌抗原陽性率結(jié)果分析

肺結(jié)核組結(jié)核桿菌抗原檢測陽性率74.45%高于對照組32.04%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 2 組結(jié)核桿菌抗原陽性率結(jié)果分析

2.2 2 組不同血清結(jié)核抗體單一及聯(lián)合檢測結(jié)果分析

肺結(jié)核組中IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測陽性率最高為62.75%，高于對照組的21.21%（χ2=17.250，P=0.000）。對照組中單一抗體IgG 檢測陽性率最高為69.70%，其次為IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測，見表2。

表2 2 組不同血清結(jié)核抗體單一及聯(lián)合檢測結(jié)果分析

2.3 血清結(jié)核抗體IgG+38kD+LAM 對肺結(jié)核的診斷價值

診斷靈敏度為73.56%（64/87），特異度為73.33%（11/15），陽性預(yù)測值為94.11%（64/68），陰性預(yù)測值為32.35%（11/34），見表3。

表3 血清結(jié)核抗體IgG+38kD+LAM 對肺結(jié)核的診斷價值

3 討論

細(xì)菌學(xué)以往是結(jié)核病診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于痰液性狀或標(biāo)本留取不當(dāng)?shù)龋瑢?dǎo)致其診斷準(zhǔn)確性不高，報道指出[6]，細(xì)菌學(xué)診斷肺結(jié)核陽性率在20%～40%之間。肺結(jié)核為慢性疾病，其發(fā)生發(fā)展與機(jī)體免疫功能有關(guān)。結(jié)核分枝桿菌生存于細(xì)胞內(nèi)，在機(jī)體內(nèi)能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生抗感染的細(xì)胞免疫，可使機(jī)體處于持續(xù)感染狀態(tài)，降低免疫功能。此外，還可對臨床診斷肺結(jié)核產(chǎn)生阻礙，威脅患者健康。研究顯示[6]，結(jié)核分枝桿菌刺激機(jī)體時分泌的B 淋巴細(xì)胞，可對免疫球蛋白IgG、IgM 產(chǎn)生刺激。血清結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測是目前常用的肺結(jié)核輔助診斷方法之一。結(jié)合抗體檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）、免疫膠體層析法與免疫色譜法（DIG-FA），結(jié)核抗體IgG 檢測時主要選擇純化的結(jié)核菌細(xì)胞壁多糖，LAM 為最常用的結(jié)核菌。LAM 為特異性非蛋白結(jié)核桿菌抗原，主要存在于結(jié)核桿菌表面糖脂結(jié)構(gòu)中，對結(jié)核桿菌具有免疫調(diào)節(jié)作用。

本研究中肺結(jié)核患者結(jié)核桿菌抗原陽性率高于其他肺部疾病患者，不同血清結(jié)核抗體單一及聯(lián)合檢測結(jié)果顯示，IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測陽性率最高為62.75%，對照組中單一抗體IgG 檢測陽性率最高為69.70%。提示，IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測可在一定程度上提高肺結(jié)核診斷陽性率，與趙建研究結(jié)果具有一致性[7]。IgG 在血清總免疫球蛋白中占比在70%以上，巨噬細(xì)胞可殺傷結(jié)核桿菌，而LAM 蛋白抗原能夠?qū)ζ洚a(chǎn)生抑制作用，結(jié)核桿菌被吞噬后留存于巨噬細(xì)胞內(nèi)，刺激機(jī)體產(chǎn)生IgG 抗LAM 結(jié)核桿菌抗體。有研究指出[8]，LAM 可作為結(jié)核桿菌檢測的特異性分子。38 kD 蛋白抗體為磷酸鹽特異轉(zhuǎn)運(yùn)體，是診斷體內(nèi)是否存在結(jié)合桿菌的重要血清學(xué)指標(biāo)之一。因此IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測可提高檢測陽性率。本研究結(jié)果顯示IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測靈敏度為73.56%、特異度為73.33%、陽性預(yù)測值為94.11%、陰性預(yù)測值為32.35%。提示肺結(jié)核患者采用IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測陽性率較高。可能與結(jié)合桿菌蛋白質(zhì)抗體的研究使血清學(xué)診斷的技術(shù)水平提高，因此提高了診斷準(zhǔn)確性。但血清結(jié)核抗體檢測仍存在不少假陽性與假陰性問題，出現(xiàn)假陰性可能與抗原的敏感性不同、不同個體抗體譜存在差異有關(guān)。同時，患者的病程、病灶及試劑的質(zhì)量、操作時的人為失誤等，也會對體內(nèi)血清結(jié)核抗體的檢出產(chǎn)生一定影響[9]。

綜上所述，血清結(jié)核分枝桿菌IgG 抗體檢測可為肺結(jié)核的診斷提供一定輔助作用，IgG+38kD+LAM 聯(lián)合檢測能夠在一定程度上提高診斷效果。但本研究為單中心研究，納入樣本量較少，而影響血清結(jié)核抗體檢出陽性率的因素復(fù)雜，因此，可能使結(jié)果存在一定偏倚。后續(xù)可進(jìn)行多中心研究，擴(kuò)充樣本，做更深入的分析探討。