微小RNA-92a在前列腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平及其臨床意義

鄭燕深，董 忠 (1.汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院泌尿外科，廣東 汕頭 515041；2.惠州市中心人民醫(yī)院泌尿外科，廣東 惠州 516001)

前列腺癌是臨床最為常見的惡性腫瘤之一，在男性惡性腫瘤中發(fā)病率僅次于肺癌，具有較高的致死率，已引起全世界的廣泛關(guān)注[1]。近年來(lái)，隨著男性生活、飲食、工作等因素的變化，再加上老齡化趨勢(shì)的加劇，前列腺癌的發(fā)病率逐年上升，已經(jīng)嚴(yán)重威脅到了男性的健康乃至生命安全[2]。目前，臨床對(duì)于前列腺的治療主要是手術(shù)治療，輔助相應(yīng)放化療，但是仍有大約5%的患者診斷時(shí)存在轉(zhuǎn)移性病變，導(dǎo)致效果不是非常理想[3]。因此，尋找一種新的診斷標(biāo)志物對(duì)臨床治療效果的提升至關(guān)重要。微小RNA-92a(miR-92a)是內(nèi)源性小分子單鏈RNA之一，與肝癌、肺癌、胃癌等惡性腫瘤密切相關(guān)，呈現(xiàn)出高表達(dá)的現(xiàn)象[4]，但與前列腺癌的關(guān)系，并且在前列腺癌中的表達(dá)尚未清楚。為此，本研究納入我院收集到的60例前列腺癌標(biāo)本，針對(duì)miR-92a的表達(dá)及其臨床意義展開分析。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2014年1月～2021年6月在我院泌尿外科接受治療的前列腺癌患者60例進(jìn)行研究，并選取相應(yīng)的癌旁組織作為對(duì)照，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。全部患者中，年齡45～78歲，平均(62.31±2.45)歲；病程2～6年，平均(3.25±0.32)年；臨床分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期26例，Ⅲ期12例，Ⅳ期7例。收集所有患者的其他資料，如特異抗原、Gleason評(píng)分、骨轉(zhuǎn)移情況等。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合前列腺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]；②均病理結(jié)果證實(shí)，首次發(fā)病，初次接受治療；③術(shù)前未接受放化療，未接受雄激素剝奪治療；④臨床各項(xiàng)資料完整、齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他類型的惡性腫瘤；②術(shù)前已實(shí)施放化療；③依從性較差，不配合研究者；④身體狀態(tài)較差，預(yù)計(jì)生存期無(wú)法完成本次調(diào)查。

1.2研究方法：采用免疫組化學(xué)檢測(cè)miR-92a表達(dá)水平：取前列腺癌組織、癌旁組織病理石蠟塊切片，厚度3 μm左右。對(duì)采集到的切片進(jìn)行處理，如烤片、脫臘、脫水等，隨后進(jìn)行抗原修復(fù)。完成上述操作后，滴入過(guò)氧化氫(H2O2)阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶活性，分別將兔多克隆mi R-802、RAB23抗體(購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司)加入其中，調(diào)節(jié)好稀釋比為1∶100，溫度為4℃留置一夜。將辣根過(guò)氧化酶HRP標(biāo)記親和純化山羊抗兔二抗(購(gòu)自賽默飛世爾中國(guó)公司)加入其中，室溫下留置30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，封片。

1.3結(jié)果判定：針對(duì)檢測(cè)結(jié)果的判定[6]，采用雙盲法進(jìn)行。隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)，對(duì)陽(yáng)性染色細(xì)胞的數(shù)量、占比等予以明確。①染色強(qiáng)度：0分:無(wú)色，1分:淡黃色，2分:棕黃色，3分:棕褐色。②陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)百分率：0分:≤5%，1分:5%～25%；2分:25%～50%，3分:≥50%。(3)組織學(xué)評(píng)分計(jì)算公式：染色強(qiáng)度×陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)百分率，陰性表達(dá)說(shuō)明0～1分，陽(yáng)性表達(dá)說(shuō)明≥2分。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同細(xì)胞組織miR-92a表達(dá)水平的比較:前列腺癌組織中，miR-92a的表達(dá)水平為(0.82±0.10)%；前列腺癌旁組織中，miR-92a的表達(dá)水平為(0.56±0.06)%。前列腺癌組織明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2前列腺癌組織miR-92a表達(dá)水平與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系:Gleason評(píng)分≥7分、腫瘤分期Ⅲ期～Ⅳ期、骨轉(zhuǎn)移患者的miR-92a表達(dá)水平高于Gleason評(píng)分<7分、腫瘤分期Ⅰ期～Ⅱ期、無(wú)骨轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。但不同年齡、血清特異抗原的miR-92a表達(dá)水平相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。如表1。

表1 前列腺癌組織miR-92a表達(dá)水平與各臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3miR-92a表達(dá)水平與患者預(yù)后的關(guān)系：miR-92a表達(dá)陽(yáng)性患者3年生存率為11例(24.44%)、生存期為(39.45±3.51)個(gè)月，均低于陰性表達(dá)者的8例(53.33%)、(24.16±2.78)個(gè)月，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

前列腺癌是臨床作為常見的惡性腫瘤之一，好發(fā)于中老年男性群體中，具有較高的死亡率。相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，美國(guó)每年因癌癥死亡的人數(shù)中，前列腺癌位居第二，超過(guò)29 000人死于轉(zhuǎn)移性去勢(shì)抵抗性前列腺癌[7]。前列腺癌發(fā)病后，早期患者不會(huì)進(jìn)展為侵襲性疾病或死亡，因此目前急需評(píng)估新診斷患者和晚期前列腺癌患者的風(fēng)險(xiǎn)。既往研究發(fā)現(xiàn)[8]，在部分前列腺癌手術(shù)標(biāo)本的惡性組織中，發(fā)現(xiàn)了miRNAs存在差異性，并且在相當(dāng)一部分晚期前列腺癌患者血清中也檢測(cè)到了miRNAs基因的差異性表達(dá)。因此，在對(duì)前列腺癌檢測(cè)、預(yù)后評(píng)估和治療靶點(diǎn)尋找時(shí)，miRNAs可以作為重要的評(píng)估指標(biāo)。

miR-92a是miRNAs的重要成員之一，以往研究表明[9]，其在諸多惡性腫瘤中均呈現(xiàn)出高表達(dá)現(xiàn)象，常見的如肝癌、胃癌、肺癌等，作為一個(gè)癌基因，它能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖、遷移和轉(zhuǎn)移，反之若能夠下調(diào)其表達(dá)，則可以對(duì)癌細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移起到抑制作用。本研究中結(jié)果說(shuō)明了與其他類型的惡性腫瘤一樣，前列腺癌患者的確存在miR-92a高表達(dá)的現(xiàn)象。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Gleason評(píng)分≥7分、腫瘤分期Ⅲ-Ⅳ期、骨轉(zhuǎn)移患者的miR-92a的表達(dá)水平要高于Gleason評(píng)分<7分、腫瘤分期Ⅰ-Ⅱ期、無(wú)骨轉(zhuǎn)移患者，表明了miR-92a不僅單純?cè)谇傲邢侔┙M織中存在高表達(dá)，并且與預(yù)測(cè)該腫瘤預(yù)后和評(píng)估病情的關(guān)鍵指標(biāo)有關(guān)。另外發(fā)現(xiàn)相較于miR-92a陰性表達(dá)患者，陽(yáng)性表達(dá)患者的3年生存率和生存期更低，提示前列腺癌組織中的miR-92a表達(dá)狀況，會(huì)對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生較大的影響。MiR-92a是一種較為常見的miRNA，通過(guò)對(duì)其靶基因的研究，能夠全方位地評(píng)估m(xù)iR-92a的生物學(xué)功能，其過(guò)度表達(dá)時(shí)，可以抑制F-box和WD重復(fù)含蛋白質(zhì)7來(lái)促進(jìn)骨肉瘤腫瘤生長(zhǎng)[10]，對(duì)其的檢測(cè)操作，與其他傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，檢測(cè)時(shí)更加的穩(wěn)定，并且無(wú)創(chuàng)，可用于早期診斷及病情評(píng)估，因此作為腫瘤標(biāo)志物更加具有優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，前列腺癌細(xì)胞組織中的miR-92a表達(dá)水平高于癌旁組織，陽(yáng)性表達(dá)會(huì)對(duì)患者的預(yù)后產(chǎn)生不良影響。