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    春秋冬三季東弗里升奶綿羊體內(nèi)胚胎生產(chǎn)及移植效果

    2022-07-09 01:50:24馬文奎李繼成譚鑫星張金龍張效生姬鵬云李廣棟宋玉坤呂東穎楊明輝富俊才阿布力孜吾斯曼朱士恩劉國世
    黑龍江動物繁殖 2022年1期
    關(guān)鍵詞:弗里供體輸精

    馬文奎,李繼成,譚鑫星,張金龍,張效生,吳 昊,姬鵬云,李廣棟,宋玉坤,楊 海,呂東穎,楊明輝,富俊才,阿布力孜·吾斯曼,朱士恩,劉國世*

    (1.中國農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科技學(xué)院,北京 100193;2.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué) 動物科學(xué)學(xué)院,烏魯木齊 830052;3.北京奧鑫牧業(yè)有限公司,北京 101300;4.內(nèi)蒙古草原宏寶食品股份有限公司,內(nèi)蒙古 巴彥淖爾 015000;5.天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所,天津 300380)

    東弗里升奶綿羊(East Friensian milk sheep)以產(chǎn)奶能力強(qiáng)而著稱,原產(chǎn)于德國東北部。該品種體格較大、體型結(jié)構(gòu)良好;公、母羊均無角,被毛白色,體軀寬而長,腰部結(jié)實,肋骨拱圓,臀部略有傾斜,尾瘦長、無毛;乳房、乳頭發(fā)育良好,優(yōu)秀母羊年泌乳量達(dá)1 200 kg以上。早年我國東北、西北地區(qū)引進(jìn)過東弗里升奶綿羊,但存欄量較少。胚胎移植(embro transfer,ET)技術(shù)是普遍使用的良種快速擴(kuò)繁手段,可充分發(fā)揮優(yōu)良種畜在品種改良和種群擴(kuò)繁中的潛力。胚胎移植效率的高低不僅受供受體年齡、環(huán)境條件、激素劑量的影響,還與季節(jié)的變化具有一定的相關(guān)性。前期研究表明,不同季節(jié)對無角道賽特、特克塞爾和德國美利奴供體羊的胚胎數(shù)、黃體數(shù)和可用胚胎數(shù)沒有影響,但是胚胎的可用率秋季顯著高于春季。夏季較為炎熱,手術(shù)容易造成感染。因此,本試驗在春、秋、冬三季對東弗里升奶綿羊進(jìn)行同期發(fā)情—超數(shù)排卵—手術(shù)沖胚—胚胎移植,對收集的胚胎進(jìn)行鑒定、統(tǒng)計和分析,并統(tǒng)計妊娠率和產(chǎn)羔率,旨在探究春、秋、冬三季進(jìn)行東弗里升奶綿羊體內(nèi)胚胎生產(chǎn)和移植的效果是否有差異,以揭示季節(jié)變化對東弗里升奶綿羊胚胎移植效果的影響。

    1 材料

    1.1 試驗動物

    2018年4月份(春季)選用內(nèi)蒙古草原宏寶食品股份有限公司的12只進(jìn)口東弗里升奶綿羊為供體,85只本地烏珠穆沁羊為受體;2018年9月份(秋季)選用45只東弗里升奶綿羊為供體,373只烏珠穆沁羊為受體;2018年12月份(冬季)選用42只東弗里升奶綿羊為供體,476只烏珠穆沁羊為受體。供體母羊平均體重在53~88 kg之間,供受體母羊年齡均為2~3歲,胎次均為3~5胎,體況良好,無繁殖疾病。采精公羊性欲旺盛,精液品質(zhì)優(yōu)良,精子活力大于0.6。

    1.2 藥品與試劑

    促卵泡素(follicle-stimulating hormone,F(xiàn)SH)、促黃體素(luteinizing hormone,LH)、孕馬血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin,PMSG),購自寧波三生生物科技有限公司;EAZI-BREED-CIDR(20個/袋)、Holding培養(yǎng)液(50 mL/袋),購自北京綠欣康農(nóng)牧科技有限公司;75%乙醇、碘伏、高濃度新潔爾滅、磺胺、維生素A-D、林可霉素、生理鹽水等,均為市購。

    1.3 設(shè)備和器械

    采精設(shè)備(假陰道)、精液品質(zhì)檢測顯微鏡、內(nèi)窺鏡輸精設(shè)備、手術(shù)架、沖卵管、恒溫板、體視鏡(型號為SZ61,購自O(shè)LYMPUS公司)、B超儀(型號為RKU10,購自徐州市凱信電子設(shè)備有限公司)、手術(shù)刀柄、直剪、止血鉗、子宮鉗、創(chuàng)巾鉗等。以上儀器、設(shè)備、用品均由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院動物遺傳育種與繁殖重點(diǎn)實驗室提供。

    2 方法

    2.1 供體羊超數(shù)排卵

    采用CIDR+FSH+PMSG法進(jìn)行超數(shù)排卵。第0天對供體羊埋置CIDR栓,同時肌肉注射3~5 mL維生素A-D。埋栓后第10天晚上18:00給供體羊注射FSH,采用7針注射法依次遞減,分別在06:00和18:00進(jìn)行注射,根據(jù)體重和手術(shù)次數(shù)調(diào)控劑量,總劑量區(qū)間為300~500 IU/只,第13天18:00注射最后一針FSH,同時取出CIDR栓,取栓12 h后立即注射PMSG 330~450 IU/只。

    2.2 精子的采集與供體羊配種

    供體羊在取栓后48~54 h進(jìn)行腹腔鏡人工輸精。將無傳染性疾病、性欲旺盛的公羊生殖器部位用紗布擦拭干凈,采精前找一只發(fā)情母羊,利用假陰道采集精液。提前組裝好內(nèi)窺鏡設(shè)備、輸精槍、手術(shù)器械及創(chuàng)巾等。首先,做好消毒工作,將內(nèi)窺鏡用新潔爾滅清洗干凈,輸精槍用生理鹽水清洗干凈;其次,在備好表皮的前提下進(jìn)行開口,位置在距離供體羊乳房下側(cè)8 cm左右,一般兩側(cè)對稱開口;最后,左手持內(nèi)窺鏡探入羊腹腔找到子宮角,右手利用準(zhǔn)備好的輸精槍將公羊精液輸入兩側(cè)各2孔,每孔輸精0.2 mL。

    2.3 受體羊的處理和腹腔鏡胚胎移植

    受體羊采用CIDR+PMSG法與供體羊同步埋栓,且同時取栓,第13天取栓時肌肉注射PMSG,劑量為330 IU/只。取栓后24~36 h試情,記錄受體羊發(fā)情情況。5~6 d后進(jìn)行胚胎移植,采用腹腔鏡觀察受體羊子宮兩側(cè),單側(cè)發(fā)現(xiàn)1~3個黃體則可進(jìn)行移植,移植后肌肉注射土霉素3~5 mL消炎。

    2.4 供受體羊術(shù)后管理

    供受體羊術(shù)后分欄飼養(yǎng),均衡營養(yǎng),供給足量的清潔飲水,圈舍內(nèi)保持干燥整潔,防止術(shù)后感染。觀察1~2 d。

    2.5 測定項目

    腹腔鏡輸精5~6 d后,采用手術(shù)法從供體羊子宮角沖胚,沖胚時記錄左右側(cè)黃體數(shù),在40倍體視顯微鏡下?lián)斐雠咛?,剔除未受精卵,計?shù)胚胎數(shù),觀察胚胎狀態(tài)、色澤、大小、數(shù)量、飽滿度、桑椹胚及囊胚數(shù)。在受體羊胚胎移植45 d后進(jìn)行B超妊娠檢查,按照沖胚記錄統(tǒng)計單胚移植和雙胚移植妊娠數(shù),統(tǒng)計妊娠率。145 d后分娩,記錄產(chǎn)羔數(shù),產(chǎn)羔率。

    2.6 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析

    試驗數(shù)據(jù)先用Excel歸類匯總,使用SPSS 26.0軟件進(jìn)行單因素方差分析,以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 不同季節(jié)對東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵黃體數(shù)的影響

    在東弗里升奶綿羊供體羊腹腔鏡輸精后5~6 d進(jìn)行手術(shù)沖胚,結(jié)果表明:供體羊左側(cè)黃體數(shù)為春季10.08枚,秋季8.18枚,冬季9.07枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);右側(cè)黃體數(shù)為春季7.50枚,秋季7.36枚,冬季8.14枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);總黃體數(shù)為春季17.58枚,秋季15.53枚,冬季17.21枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);春、秋、冬三季東弗里升奶綿羊左側(cè)黃體數(shù)、右側(cè)黃體數(shù)和總的黃體數(shù)差異不顯著(P>0.05)。具體見表1。

    表1 東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵黃體數(shù)測定結(jié)果Table 1 Superovulation corpus luteum number in East Friensian sheep

    3.2 不同季節(jié)對東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵回收卵數(shù)和可用胚胎數(shù)的影響

    在東弗里升奶綿羊供體羊腹腔鏡輸精后5~6 d進(jìn)行手術(shù)沖胚,結(jié)果表明:供體羊左側(cè)子宮回收胚胎數(shù)為春季5.92枚,秋季7.76枚,冬季6.33枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);右側(cè)子宮回收胚胎數(shù)秋季(8.53枚)顯著高于春季(5.08枚)和冬季(5.69枚,P<0.05);回收胚胎數(shù)秋季(16.33枚)顯著高于春季(10.42枚)和冬季(12.19枚,P<0.05);可用胚胎數(shù)為春季9.08枚,秋季11.56枚,冬季9.36枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05)。說明秋季進(jìn)行東弗里升奶綿羊體內(nèi)胚胎生產(chǎn)效果最佳。具體見表2。

    表2 東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵回收卵數(shù)和可用胚胎數(shù)測定結(jié)果Table 2 The number of eggs recovered from superovulation and the number of available embryos in East Friensian sheep

    3.3 不同季節(jié)對東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵胚胎質(zhì)量的影響

    在東弗里升奶綿羊供體羊腹腔鏡輸精后5~6 d進(jìn)行手術(shù)沖胚,體視鏡下觀察胚胎質(zhì)量,結(jié)果表明:桑椹胚數(shù)為春季4.50枚,秋季6.98枚,冬季5.48枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);囊胚數(shù)為春季4.08枚,秋季4.33枚,冬季3.60枚,季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05)。說明春、秋、冬三季東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵所獲得的胚胎質(zhì)量沒有差異。具體見表3。

    表3 東弗里升奶綿羊超數(shù)排卵胚胎質(zhì)量測定結(jié)果Table 3 The quality of superovulated embryos in East Friensian sheep

    3.4 不同季節(jié)東弗里升奶綿羊受體移植不同數(shù)量胚胎對妊娠率的影響

    在東弗里升奶綿羊供體羊腹腔鏡輸精后5~6 d后對供體母羊進(jìn)行胚胎回收,用腹腔鏡給受體羊進(jìn)行胚胎移植,在移植45 d后進(jìn)行妊娠檢查。結(jié)果表明,單胚移植妊娠率秋季(63.34%)和冬季(58.99%)顯著高于春季(32.79%,P<0.05),雙胚移植妊娠率秋季(86.21%)顯著高于冬季(50.00%,P<0.05)。具體見表4。

    表4 東弗里升奶綿羊胚胎移植妊娠率測定結(jié)果Table 4 The pregnancy rate of East Friensian sheep by embryo transfer

    3.5 受體移植對妊娠率和產(chǎn)羔率測定結(jié)果

    在給東弗里升奶綿羊進(jìn)行胚胎移植45 d后進(jìn)行妊娠檢查,結(jié)果表明:妊娠率為秋季(66.21%)高于春季(51.76%)和冬季(60.71%),季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05);產(chǎn)羔率為春季(68.18%)高于秋季(67.83%)和冬季(65.13%),季節(jié)間均差異不顯著(P>0.05)。說明春、秋、冬三季東弗里升奶綿羊產(chǎn)羔率沒有差異,但秋季東弗里升奶綿羊胚胎移植妊娠率最高。具體見表5。

    表5 東弗里升奶綿羊胚胎移植妊娠率和產(chǎn)羔率測定結(jié)果Table 5 The pregnancy rate and lambing rate of East Friensian sheep by embryo transfer

    4 討論

    4.1 影響超數(shù)排卵因素分析

    供體羊超數(shù)排卵效果與品種、年齡、飼養(yǎng)方式、季節(jié)、超排程序、激素、劑量等息息相關(guān)。高立芳等發(fā)現(xiàn),采用CIDR+PG+FSH法進(jìn)行酉州烏羊超數(shù)排卵,5月份獲得的可用胚胎(11.76枚)顯著高于12月份(8.52枚,P>0.05)。袁玉國等報道,對徐淮白山羊進(jìn)行超數(shù)排卵,供體可用胚胎數(shù)4—6月份(15.55枚)顯著高于10—12月份(13.15枚,P>0.05)。本試驗結(jié)果表明,東弗里升奶綿羊供體羊可用胚胎數(shù)春季(9.08枚)、秋季(11.56枚)、冬季(9.36枚)之間差異不顯著(P>0.05),與高立芳和袁玉國等的研究結(jié)果有所不同,可能是由于品種、環(huán)境、激素狀況不同等原因造成。代相鵬等對波爾山羊進(jìn)行超數(shù)排卵,結(jié)果表明,4月份可用胚胎數(shù)(12.40枚)與11月份(12.80枚)差異不顯著(P>0.05),4月份黃體數(shù)(22.80枚)與11月份(17.60枚)差異不顯著(P>0.05)。本試驗結(jié)果表明,可用胚胎數(shù)春季(9.08枚)、秋季(11.56枚)、冬季(9.36枚)之間差異不顯著(P>0.05),黃體數(shù)春季(17.58枚)、秋季(15.53枚)、冬季(17.21枚)之間差異不顯著(P>0.05)。這與代相鵬等的研究結(jié)果一致。易金云對黑薩??撕投挪垂w母羊使用CIDR孕酮栓進(jìn)行同期發(fā)情,采用FSH+PMSG 7針遞減法進(jìn)行超數(shù)排卵,結(jié)果顯示,春季平均黃體數(shù)(16.80枚)高于秋季(10.20枚)。本試驗結(jié)果表明,東弗里升奶綿羊供體羊平均黃體數(shù)春季(17.58枚)高于秋季(15.53枚),本試驗所用超排程序和季節(jié)處理與易金云等的試驗一致,獲得的黃體數(shù)結(jié)果也一致。

    4.2 單胚移植和雙胚移植對妊娠率的影響

    在羊同期發(fā)情、超數(shù)排卵及胚胎移植過程中,卵泡成熟后如若受精則形成妊娠黃體,黃體通過分泌孕酮來維持母畜妊娠。因此,如果胚胎移植受體卵巢上形成的黃體數(shù)量較多妊娠率則高。胚胎質(zhì)量的優(yōu)劣及胚胎移植數(shù)量都是影響胚胎移植效率的重要因素。張紅等研究表明,移植胚胎的數(shù)量是決定妊娠率和胚胎存活率的關(guān)鍵因素。陳建泉等研究表明:移植2枚胚胎效果最佳,受體移植雙胚的妊娠率和胚胎存活率比移植單胚的高10%~15%;且2枚胚胎同時移植到黃體側(cè),要比分別移植于兩側(cè)子宮角的妊娠率高。韓紅葉等研究發(fā)現(xiàn),桑葚單胚移植妊娠率(71.80%)顯著低于雙胚移植妊娠率(82.4%,P<0.05),囊胚單胚移植妊娠率(48.20%)顯著低于雙胚移植妊娠率(58.30%,P<0.05)。本試驗結(jié)果表明,雙胚移植妊娠率為春季(75.00%)、秋季(86.21%)高于冬季(50.00%),與高志敏等及李俊杰等的研究結(jié)果一致。此外,本試驗中的供體母羊在腹腔鏡輸精后5~6 d時進(jìn)行手術(shù)沖胚,此時胚胎發(fā)育為桑葚胚和囊胚,更易附植,更適于受體子宮內(nèi)環(huán)境。該結(jié)果與洪瓊花等和K.F.Breuel等的報道一致。張金龍等的試驗結(jié)果表明,不論是囊胚還是桑葚胚,均是移植2枚胚胎的妊娠率顯著高于移植1枚胚胎。本試驗結(jié)果表明,春秋兩季雙胚移植優(yōu)于單胚移植,冬季則沒有表現(xiàn)出這種優(yōu)勢。

    5 結(jié)論

    選擇在春、秋、冬季節(jié)進(jìn)行胚胎移植都可獲得理想的效果,在秋季進(jìn)行超排和胚胎移植效果最佳,回收卵數(shù)和妊娠率最高,且雙胚移植效果最好。

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