三陰乳腺癌BRCA1/2基因表達及其與臨床病理特征的相關(guān)性

翁劍華，廖瑜玲，許素真 (惠州市第一人民醫(yī)院乳腺外科，廣東 惠州 516000)

乳腺癌屬于一種異質(zhì)性腫瘤，根據(jù)腫瘤疾病的免疫組化表達情況，往往將乳腺癌分成三陰性乳腺癌(TNBC)與非三陰性乳腺癌(NTNBC)，其中TNBC占到乳腺癌的15%～20%，并且TNBC也具有臨床分期晚、容易復發(fā)及容易遠處轉(zhuǎn)移等特點[1]。相關(guān)研究表明，TNBC可顯示出明顯組織學與分子亞型多樣性，不同亞型在結(jié)局上存在差異，并且驅(qū)動基因突變也存在差異，更好地揭示不同分子亞型基因變化有助于開發(fā)出新型靶向治療藥物[2]。乳腺癌易感基因(BRCA)是重要的抑癌基因，抑癌的機制是參加細胞內(nèi)DNA修復環(huán)節(jié)，對細胞的周期調(diào)節(jié)以及誘導相關(guān)蛋白質(zhì)生成，對腫瘤發(fā)生，越來越多的研究證實了BRCA1/2基因突變起到非常關(guān)鍵的作用，但是因為研究報道的方向不一致，使得結(jié)果間的差異性也比較大，關(guān)于具體BRCA1/2基因表達與TNBC關(guān)系的研究需進一步證實[3]。

1 資料與方法

1.1一般資料：選取2020年1月～2021年5月收治的89例TNBC患者為研究對象，并納入試驗組。納入標準：①患者均經(jīng)免疫組化檢查證實，同時2名病理專家均被證實為TNBC；②患者均為女性，臨床資料以及病理資料完整；③術(shù)前未接受相關(guān)放化療治療的患者；④自愿參加，本人在知情同意書上簽字。排除標準：①重要的臟器功能病變患者；②病理證實合并其他惡性腫瘤疾病者；③精神類疾病者或依從性差者。TNBC患者年齡27～70歲，平均(49.12±1.56)歲；體重42～65 kg，平均(53.15±2.17)kg。同時選擇同期進院診治的90例NTNBC患者為對照組，患者臨床資料完整并且認知良好，年齡26～70歲，平均(48.96±1.52)歲；體重41～65 kg，平均(52.96±2.16)kg。比較兩組一般資料，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，有可比性。本次研究經(jīng)過本院醫(yī)學倫理委員會同意。

1.2方法：采取二代測序技術(shù)檢測BRCA1/2基因突變情況，主要是抽取每名研究對象清晨空腹階段5ml的靜脈血液，保存在4℃ 10 ml EDTA抗凝試管中，定期提取DNA。對BRCA1、BRCA2的編碼區(qū)與外顯子內(nèi)含子拼接區(qū)做PCR擴增處理，引物序列根據(jù)條件以及要求設(shè)定。

PCR反應(yīng)體系如下：100 ng基因組DNA，1.5 mmol/L MgCl2、50 mmol/L KCl，10 mmol/L Tris-HCl(pH8.3)，200 μmol/L dNTPs，0.5 μmol/L引物，0.2 μl TaqDNA聚合酶。PCR反應(yīng)條件：95℃ 5 min預變性后做35個周期的循環(huán)(94℃ 30 s，55℃ 45 s，72℃ 1 min，最后一步為72℃ 5 min)。應(yīng)用變性高效液相色譜法分析篩選突變BRCA1、BRCA2基因編碼的外顯子以及鄰近內(nèi)含子剪接區(qū)域，篩選出異常的DNA序列。

1.3觀察指標：①觀察試驗組與對照組經(jīng)檢查BRCA1/2基因突變情況。②收集試驗組患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理類型、TNM分期等資料，分析BRCA1/2基因表達與臨床病理特征的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計學方法：使用SPSS21.0軟件行t及χ2檢驗。

2 結(jié)果

2.1BRCA1/2基因突變：在BRCA基因突變的檢測情況上，試驗組BRCA1/2基因突變20例，突變率為22.47%，其中BRCA1突變13例，BRCA2突變7例。對照組BRCA1/2基因突變8例，突變率8.89%，其中BRCA1突變5例，BRCA2突變3例。試驗組在BRCA1/2突變與BRCA1突變發(fā)生率上均高于對照組(P<0.05)，在BRCA2突變上比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組BRCA1/2基因突變情況比較[n(%)]

2.2BRCA1/2基因表達同臨床病理特征相關(guān)性：相關(guān)性分析結(jié)果表明，年齡<35歲、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期Ⅰ期、Ⅱ期的BRCA1/2基因突變率高，同未突變比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 BRCA1/2基因表達同臨床病理特征相關(guān)性[n(%)]

3 討論

乳腺癌在女性中有非常高的發(fā)生率，并且也具有高度異質(zhì)性的特征，發(fā)病的過程復雜并且生物學行為特征也較特殊，一些患者雖然分期一致但也常見不同表現(xiàn)以及預后差異[4]。TNBC是一種特殊類型的乳腺癌，這種類型的乳腺癌的遠處轉(zhuǎn)移可能性較常規(guī)的乳腺癌更為強烈，在預后上較差，且治療難度上也比較高，因此在臨床中對此類疾病的診治研究關(guān)注度也比較高[5]。

TNBC好發(fā)群體是中年婦女，尤其在絕經(jīng)前后有很高的發(fā)生率，伴有BRCA基因突變是常見的情況[6]。BRCA1基因?qū)儆谳^為常見的基因，主要為腫瘤抑制基因，存在的部位位于正常上皮細胞核，基因的作用上在于參與細胞周期的調(diào)控，基因的轉(zhuǎn)錄以及細胞生長的抑制，并且還可以修復損傷的DNA，重構(gòu)其功能[7]。而如果在BRCA基因出現(xiàn)突變的情況，同時在表達量上呈降低趨勢，使得BRCA原本的作用出現(xiàn)逆轉(zhuǎn)及喪失，參加細胞裂解的作用消失，細胞增殖隨之控制，腫瘤就出現(xiàn)持續(xù)增長。因此BRCA基因就被作為基因組保護的成員，參與基因修復，對損傷嚴重的情況修復難度也高，可誘發(fā)細胞凋亡作用。在多項研究中發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細胞同正常的上皮細胞比較，存在BRCA1/2基因表達水平下降的情況[8]。TNBC在BRCA1/2基因表達上也存在一些表型特征，因此檢測BRCA基因表達對TNBC的治療及預后有重要價值。

綜上所述，BRCA1/2基因表達同三陰性乳腺癌患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與TNM分期存在顯著的相關(guān)性，存在BRCA基因突變的攜帶者更容易患乳腺癌尤其是三陰性乳腺癌，因此需要臨床中加強相關(guān)檢查，為疾病早期診治提供重要幫助。