糖槭多糖體外抗氧化活性研究★

王朝興，王蕭鳴，趙 宏，王宇亮

（黑龍江省新藥創(chuàng)制與藥效毒理評價重點實驗室 佳木斯大學，黑龍江 佳木斯 154007）

畜禽行業(yè)禁用抗生素產(chǎn)品的政策已經(jīng)頒發(fā)執(zhí)行，研究新的畜禽飼用產(chǎn)品代理抗生素是目前畜禽行業(yè)發(fā)展刻不容緩的問題[1-2]。

糖槭是槭樹科槭屬落葉喬木植物，學者們從中提取得到了多種生物活性成分[3]，其中多糖因結(jié)構(gòu)的復雜性，使得研究進展緩慢，給其多種生物活性作用機制的研究帶來難度[4-5]。

本文有針對性地研究糖槭熱提總多糖在體外抗氧化活性的影響[6]，篩選出糖槭多糖中調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)菌群平衡的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為進一步研究其調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)菌群平衡的作用機制及藥用植物飼料在減抗、替抗的綜合性開發(fā)利用領(lǐng)域奠定基礎(chǔ)[7]。

1 儀器與材料

糖槭葉于2018 年9 月采于佳木斯大學校園，經(jīng)藥學院張宇教授鑒定為槭樹科Aceraceae 槭屬Acer落葉喬木植物糖槭Acer Saccharum 的干燥葉子。DPPH、維生素C、Tris-HCl 緩沖液等，購于上海源葉生物科技有限公司。

SP-756P 型紫外可見分光光度計；上海光譜儀器有限公司。

2 實驗方法

2.1 體外抗氧化實驗

2.1.1 對DPPH 自由基的清除實驗

分別取不同質(zhì)量濃度糖槭均一多糖樣品（0.05、0.10、0.20、0.40 和0.80 mg/mL）2 mL 與2 mL 0.20 mmol/L DPPH，混勻，于37 ℃溫度環(huán)境下避光靜置30 min，用甲醇（2 mL）和蒸餾水（2 mL）調(diào)零，在波長517 nm 處記錄吸光值。

配制同濃度Vc 溶液，根據(jù)上述方法開展實驗。清除率公式如式（1）：式中：Ac是蒸餾水（2 mL）中加DPPH 溶液（2 mL）的吸光度；Ai是多糖（2 mL）中加DPPH 溶液（2 mL）的吸光度。

2.1.2 糖槭均一多糖對超氧陰離子自由基的清除實驗

精確加入2.5 mL Tris-鹽酸緩沖液（濃度50 mmol/L，pH=8.2），然后加蒸餾水（1 mL），兩者混合均勻，于25 ℃水浴加熱20 min。取出，快速加入100 μL鄰苯三酚溶液（經(jīng)25 ℃預熱，濃度5 mmol/L；以pH=8.2的Tris-鹽酸緩沖液為試劑的空白對照）。搖勻之后，即刻倒在比色皿中，每隔30 s 在波長為320 nm 下進行掃描測定試液的吸光度（總時間為5 min）。

精確加入2.5 mL Tris-鹽酸緩沖液（濃度50 mmol/L，pH=8.2），再分別加入不同濃度的多糖溶液（體積均為1 mL，質(zhì)量濃度分別為1、2、3、4、5 mg/mL），再參考鄰苯三酚的測定步驟操作。配備同濃度Vc 溶液，按照上述方法開展實驗，清除率公式如式（2）。

式中：ΔA0/Δt 為平行對照組中，某時間段內(nèi)，鄰苯三酚的自氧化速率；ΔAi/Δt 為加入樣品后，在該時間段內(nèi)，鄰苯三酚的自氧化速率。

2.2 方法統(tǒng)計

實驗所得數(shù)據(jù)采用“平均數(shù)±標準差”表示。以SPSS17.0 軟件為工具對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，兩組別之間的比較采取兩樣本t 檢驗，多組別之間的比較采取方差分析。差異有顯著性以P＜0.05 表示，差異極顯著以P＜0.01 表示，兩種表示方法均具有統(tǒng)計學意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 糖槭均一多糖對DPPH 自由基的清除作用結(jié)果

ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 對DPPH 作用結(jié)果，見第10 頁圖1-1。從圖中可見，樣品ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 均有清除作用。0 mg/mL～0.1 mg/mL 質(zhì)量濃度范圍時，所有實驗樣品的清除作用得到快速提升；0.1 mg/mL～0.8 mg/mL 質(zhì)量濃度范圍時，所有實驗樣品的清除作用變成緩緩提升，之后達到穩(wěn)定；當質(zhì)量濃度為0.8 mg/mL 時，Vc 清除率達94.1%，多糖樣品中的ASP-A-d 最高清除率是55.3%，ASP-A-c 次之。

3.2 糖槭均一多糖對超氧陰離子的清除作用結(jié)果

ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 對超氧陰離子作用結(jié)果，見圖1-2。從圖中可見，樣品ASP-A-c、ASP-A-d 和ASP-A-e 均有清除作用。當多糖濃度增加時，多糖對超氧陰離子的清除作用分別增大。多糖質(zhì)量濃度為5 mg/mL 時，Vc 清除率高達96.5%，多糖樣品中的ASP-A-c 最高清除率是51.3%，ASP-A-d次之。

圖1 糖槭均一多糖抗氧化作用

4 結(jié)論

糖槭多糖有抗氧化活性，且程度不同。隨著糖槭多糖樣品濃度增加，其抗氧化活性不斷增大，但抗氧化效果不同，原因可能是單糖組分不同、糖鏈連接方式不同和單糖相對分子質(zhì)量不同，使得抗氧化的作用結(jié)果不同。

通過糖槭多糖抗氧化和抗腫瘤的實驗結(jié)果，對于深入研究其微生態(tài)調(diào)節(jié)物質(zhì)基礎(chǔ)及綠色飼料的多元化利用開發(fā)奠定理論依據(jù)。