柊葉對急性酒精中毒小鼠解酒作用的研究

盧海嘯. 黃青艷. 曹小華. 潘珍燕. 姚水蓮. 莫小節(jié)

【關(guān)鍵詞】柊葉;急性酒精中毒;解酒

中國具有悠久歷史的酒文化，在如今社會經(jīng)濟快速發(fā)展的時代，因為應(yīng)酬、婚宴、慶祝、節(jié)日等喝酒更是必不可少[1]。而過量飲酒可引起急性、慢性酒精中毒，給身體帶來很多的危害。如：增加心臟負(fù)擔(dān)、破壞肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)、引起消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)以及神經(jīng)系統(tǒng)在內(nèi)等多個組織器官的病變和損傷，導(dǎo)致人體出現(xiàn)頭昏、惡心、嘔吐、動作遲緩、記憶力減退、昏迷等癥狀，嚴(yán)重時可導(dǎo)致死亡[2-4]。目前社會，因為社交，飲酒的人越來越多，解酒隨著人們生活水平的提高，人們對健康也愈發(fā)重視。因此，人們對一種可以有效解酒的產(chǎn)品充滿期待。

柊葉又名粽葉、粽粑葉，為竹芋科柊葉屬草本植物，廣泛分布于中國廣東、廣西、云南等地。柊葉不僅可用于加工民族傳統(tǒng)食品——粽葉，其根、莖、葉、花還具有藥用及解酒價值。據(jù)《中國民族藥志要》[5]記載，柊葉的民族用藥情況為仫佬藥：根莖用于醒酒;瑤藥：根莖治酒精中毒、風(fēng)濕骨痛、腰痛;壯藥：葉用于解酒毒，花用于治月經(jīng)過多，失音。據(jù)《中國中藥資源志要》記載，柊葉全草性味甘、淡、微寒;具有清熱解毒、涼血止血、利尿的功效;根狀莖可治肝腫大、痢疾、尿赤;葉清熱解毒，治音啞、喉痛、口腔潰瘍，醒酒等[6-7]。目前，柊葉僅用于粽子的加工，資源開發(fā)利用單一，綜合利用率不高[8]。因此，本研究通過探討柊葉的解酒作用，為柊葉的進一步開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

本研究通過建立動物模型，觀察各組小鼠醉酒行為學(xué)指標(biāo)，采用氣相色譜法測定各組小鼠血清中乙醇濃度，進一步分析比較柊葉根、葉、花提取物的解酒效果，尋找柊葉最佳解酒部位，為能夠開發(fā)全方位解酒毒且安全無毒副作用的解酒產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 實驗動物

清潔級KM雄性小鼠50只（SPF級），體重25～45 g、7～8 周齡，購于廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。生產(chǎn)許可號：SCXK（桂）2014-0002。

1.2 藥物和試劑

柊葉Phrynium capitayum willd 于2019 年5 月采于廣西靈山縣那隆鎮(zhèn)路司鋪村，經(jīng)玉林師范學(xué)院盧海嘯教授鑒定為竹芋科柊葉屬植物。陽性對照藥海王金樽片（深圳市海王健康科技有限公司，批號20200601）;56度二鍋頭（北京紅星二鍋頭有限公司）;0.9%氯化注射液（廣西裕源藥業(yè)有限公司，批號P19121302），無水乙醇（分析純，成都市科隆化學(xué)品有限公司）。

1.3 主要儀器

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（上海亞榮生化儀器廠，RE-2000A）;循環(huán)水式真空泵（上海亞榮生化儀器廠，YR-PTB）;電子分析天平（奧豪斯儀器有限公司，AR224CN）;氣相色譜儀（島津公司，島津GC-2030）;離心機（德國eppendorf 艾本德公司，5424R）。

2 方法

2.1 葉提取物的制備

稱取柊葉葉、柊葉花、柊葉根原材料粉末各100 g，加入250 mL的蒸餾水熱回流提取3 h，得柊葉葉、柊葉花、柊葉根提取液，重復(fù)三次，合并提取液，減壓濃縮至浸膏，得到柊葉葉、柊葉花、柊葉根提取物。

2.2 急性酒精中毒小鼠模型的建立

小白鼠試驗前，飼養(yǎng)7 d后禁食12 h。取小白鼠50只，分成模型對照組、陽性藥對照組、柊葉葉組、柊葉花組、柊葉根組，每組10 只。灌胃給藥后30 min后按0.1 mL/0.01 kg 再灌胃56 度二鍋頭酒。給藥劑量：模型對照組0.1 mL/0.01 kg 0.9%生理鹽水;陽性藥對照組200 mg/kg 海王金樽;柊葉葉實驗組200 mg/kg 柊葉葉提取物;柊葉花實驗組200 mg/kg柊葉花提取物;柊葉根實驗組200 mg/kg 柊葉根提取物。

2.3 小白鼠醉酒醒酒判斷

觀察小鼠活動情況，以小白鼠爬行不穩(wěn)、后腹拖地、閉眼懶動為睡眠（ 醉酒） 指標(biāo)，以行動自如、四肢靈活、精神恢復(fù)為蘇醒（ 醒酒） 指標(biāo)，記錄各組小白鼠醉酒時間和醒酒時間，計算醉酒持續(xù)時間（ min，從醉酒到醒酒的時間）。

2.4 血液乙醇濃度的測定

取小白鼠50 只，分成模型對照組、陽性藥對照組、柊葉葉組、柊葉花組、柊葉根組，每組10 只，小白鼠禁食不禁水12 h后。模型對照組：每只小白鼠按0.1 mL/0.01 kg（200 mg/kg）灌胃生理鹽水，30 min后按0.1 mL/10 g再灌胃56度二鍋頭酒;海王金樽對照組、柊葉葉實驗組、柊葉花實驗組、柊葉根實驗組：每只小白鼠按200 mg/kg灌胃柊葉提取物，30 min后按0.1 mL/10 g再灌胃56 度二鍋頭酒;30 min后摘除眼球取血，靜置2 h，置離心機中3000 r/min離心10 min[9-12] ，氣相色譜分析小白鼠血清中乙醇濃度。

2.5 統(tǒng)計學(xué)處理數(shù)據(jù)

所有數(shù)據(jù)均以（x—± s）表示，采用SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計分析，根據(jù)研究目的和數(shù)據(jù)類型采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 各組小白鼠醉酒持續(xù)時間比較

與模型組小白鼠的醉酒持續(xù)時間相比，陽性對照組、柊葉葉組、柊葉花組、柊葉根組小白鼠的醉酒持續(xù)時間明顯縮短，且柊葉花組、柊葉根組小白鼠的醉酒持續(xù)時間比陽性對照組小鼠的醉酒持續(xù)時間短。由此可見，柊葉能顯著縮短小白鼠醉酒時長，醒酒效果明顯。詳見表1。

3.2 乙醇標(biāo)椎曲線的建立

以乙醇峰面積為橫坐標(biāo)，以乙醇不同濃度含量為縱坐標(biāo)，建立標(biāo)椎曲線，計算得回歸方程為，Y=3E-0.9×（R2=0.9999），結(jié)果顯示乙醇在濃度含量在0%～50% 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

3.3 葉血清乙醇含量測定

與模型組小白鼠的血清乙醇含量相比，柊葉葉組、柊葉花組、柊葉根組小白鼠的血清乙醇含量顯著降低，且柊葉葉組、柊葉花組、柊葉根組小白鼠的血清乙醇含量比陽性對照組小白鼠的血清乙醇含量低。其中，柊葉根、柊葉花的解酒效果最為顯著。由此可見，柊葉能顯著降低小白鼠血清乙醇含量，針對急性酒精中毒小白鼠的解酒效果明顯。詳見表2。

4 討論

柊葉在中國產(chǎn)于南部及西南部，為廣西傳統(tǒng)民族食品和特色藥材，在壯、瑤、仫佬族中常用于解酒毒。本研究通過建立小鼠急性酒精中毒模型[13-16]，采用氣相色譜法測定各組小鼠血清中乙醇濃度，探討柊葉的解酒效果，提高柊葉綜合利用率。

據(jù)研究報道表明，枳椇子提取物、趕黃草的主要化學(xué)成分黃酮類能夠促進乙醇代謝而降低小鼠灌酒后血清中乙醇濃度。葛根可通過影響白介素-6和抑制一氧化氮蛋白表達，來抑制酒精代謝產(chǎn)生的炎癥變化。在人體細(xì)胞實驗中，人們發(fā)現(xiàn)葛花茶中皂角苷類化合物有強大的保肝作用。姜黃中的姜黃素可通過減輕肝臟氧化應(yīng)激和抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)來降低酒精造成的肝損傷。山藥多糖 [17]可通過促進乙醇代謝和脂質(zhì)過氧化等多種途徑產(chǎn)生肝細(xì)胞保護作用。玉郎傘多糖可降低肝臟中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、谷丙轉(zhuǎn)酶（ALT），提高乙醇脫氫酶（ADH）、超氧化物歧化酶（SOD）的活性從而達到加快乙醇分解的目的[18]。藤茶中主要成分為黃酮類的二氫楊梅素，二氫楊梅素的解酒護肝功效可通過抑制四氫化碳所致AST、ALT活性升高以及降低血清膽紅素。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，柊葉葉提取物、柊葉花提取物、柊葉根提取物可明顯縮短小鼠的醉酒持續(xù)時間并有效降低小鼠的血清中乙醇濃度。由此可見，柊葉可顯著縮短小鼠醉酒時長，降低小鼠血清乙醇濃度，解酒效果明顯。其中，柊葉花組、柊葉根組解酒效果尤為明顯。本研究初步證實，柊葉具有顯著的解酒效果，柊葉最佳的解酒部位為柊葉花、根。本研究為柊葉解酒效果提供科學(xué)依據(jù)，奠定了相關(guān)解酒保健食品的研發(fā)基礎(chǔ)。D800C85F-75EC-4D29-9045-8A2DF618967F