鐵皮石斛開(kāi)放組培快繁研究*

王 娟，徐東亞，常 瑋

（河南南陽(yáng)師范學(xué)院/生命科學(xué)與農(nóng)業(yè)工程學(xué)院，河南 南陽(yáng) 473000）

石斛屬是蘭科最大屬之一，在全世界范圍內(nèi)約有1 500種，且屬內(nèi)多種植物具有不同程度的藥用價(jià)值和遺傳多樣性[1]。鐵皮石斛含有豐富的氨基酸、生物堿、多糖等活性成分，具有很好的降血糖、抗氧化、抗腫瘤、抗衰老、提高免疫力等功效[2-3]。梁楚燕[4]等研究還證明鐵皮石斛鮮汁具有保肝護(hù)胃的作用。

目前，野生鐵皮石斛日漸稀少，生產(chǎn)上通常采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)（Plant tissue culture）進(jìn)行石斛種苗的快速繁殖。組培技術(shù)需要特定的設(shè)備及操作手段保證在整個(gè)培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)物始終處于無(wú)菌的環(huán)境內(nèi)。在培養(yǎng)過(guò)程中，主要通過(guò)高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)等設(shè)備來(lái)確保無(wú)菌培養(yǎng)環(huán)境。然而這兩種設(shè)備的成本較高，限制了組培生產(chǎn)的規(guī)模。針對(duì)這一問(wèn)題，一些研究者開(kāi)展了大量的探索，提出了開(kāi)放組培的概念。趙江雷[5]等在開(kāi)放組培的基礎(chǔ)上，根據(jù)日本千葉大學(xué)古在豐樹(shù)教授的研究結(jié)果并結(jié)合自身研究成功實(shí)現(xiàn)了無(wú)糖組培技術(shù)；趙青華[6]等利用開(kāi)放組培技術(shù)進(jìn)行魔芋快繁技術(shù)研究；解輝[7]等將NaClO應(yīng)用到香蕉開(kāi)放式組織培養(yǎng)體系研究中，結(jié)果表明NaClO具有顯著地抑菌效果，可降低生產(chǎn)成本；崔剛[8]等探索了開(kāi)放組培操作的工藝流程。

開(kāi)放組培快繁技術(shù)是由實(shí)驗(yàn)室組培向工廠(chǎng)化生產(chǎn)的必要步驟。本研究擬采用植物友好型抑菌劑植培靈和成本更低的塑料杯來(lái)進(jìn)行鐵皮石斛的開(kāi)放組培研究，通過(guò)對(duì)比開(kāi)放組培技術(shù)及常規(guī)組培技術(shù)在污染率、增殖情況方面的差異，來(lái)研究開(kāi)放組培的可行性，同時(shí)通過(guò)對(duì)二者前期投入及年累積成本的核算來(lái)比較二者的生產(chǎn)成本。對(duì)鐵皮石斛開(kāi)放組培的相關(guān)研究，不僅可以促進(jìn)鐵皮石斛的工廠(chǎng)化育苗，同時(shí)還能將其應(yīng)用到其他種苗工廠(chǎng)化育苗當(dāng)中。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鐵皮石斛無(wú)菌苗。

MS大量元素：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O。

MS微量元素：MnSO4·4H2O、ZnSO4·7H2O、Cu-SO4·5H2O、NaMoO4·2H2O、CoCl2·6H2O、H3BO3、KI。

FeSO4·7H2O、Na2-EDTA、肌酸、煙酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、甘氨酸、NAA、6-BA、植培靈（上海涵宇生物科技有限公司）。

1.2 儀器與設(shè)備

超凈臺(tái)（蘇凈安泰BCM -1000A）、高溫滅菌鍋（100 L/3.5 kW）、恒溫培養(yǎng)箱。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 培養(yǎng)基制備比較

本研究所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，母液配制采用混配法，分別按照表1中所列試劑及其所需劑量進(jìn)行大量元素、微量元素及有機(jī)物母液配制。

表1 MS培養(yǎng)基母液配制 mg/L

對(duì)于科學(xué)素養(yǎng)而言，其主要就是指人對(duì)于自然界的總體看法，主要包含科學(xué)觀(guān)、哲學(xué)觀(guān)念等，是人綜合素養(yǎng)中不可缺少的一項(xiàng)內(nèi)容。而在初中階段的化學(xué)教學(xué)中，科學(xué)素養(yǎng)主要包含以下幾個(gè)方面：

DG-SHGR路由引用兩種轉(zhuǎn)發(fā)模式:直接轉(zhuǎn)發(fā)GSF(Go Straight Forwarding)[10]和空洞繞開(kāi)轉(zhuǎn)發(fā)HBF(Hole Bypassing Forwarding)。當(dāng)節(jié)點(diǎn)未遭遇路由空洞時(shí),即正常情況,就利用地理位置路由的貪婪轉(zhuǎn)發(fā)模式傳輸數(shù)據(jù)包,將這種方式稱(chēng)為GSF。這不是本文研究的重點(diǎn)。本文的研究重點(diǎn)是HBF。

以相同的工作效率進(jìn)行常規(guī)組培時(shí)，一次性投入（10臺(tái)滅菌鍋+15個(gè)超凈臺(tái)）為：b常（萬(wàn)元）=1.50（萬(wàn)元/臺(tái)）× 10（臺(tái)）+0.12（萬(wàn)元/個(gè)）× 15（個(gè)）=16.80（萬(wàn)元）；年累計(jì)投入（200個(gè)工作日所需滅菌鍋和超凈臺(tái)電費(fèi)）為：a常（萬(wàn)元）=200（天）×（7.80 ×10-5（萬(wàn)元/度）× 3.50（度/次）× 40（次）+7.80 × 10-5（萬(wàn)元/度）×0.80（度/時(shí)）×120（時(shí)））=3.68（萬(wàn)元）。

他剛到連隊(duì)感覺(jué)格外新鮮，住的是半挖半蓋的地窩子，吃的是大食堂，早上敲鐘上班，中午工地就餐，下午吹哨收工，完全是軍事化管理的模式。因剛從學(xué)校門(mén)出來(lái)，對(duì)于緊張的集體生活也能夠適應(yīng)，只是每天勞動(dòng)十幾個(gè)小時(shí)，加之勞動(dòng)強(qiáng)度大有些吃不消，有過(guò)暗自流淚，也有過(guò)思想斗爭(zhēng)。那時(shí)的領(lǐng)導(dǎo)經(jīng)常鼓勵(lì)他們，生活上問(wèn)寒問(wèn)暖，激勵(lì)他們克服困難，堅(jiān)持鍛煉，就這樣，他順利地過(guò)了勞動(dòng)關(guān)，完全適應(yīng)了這個(gè)陌生的環(huán)境。

在常規(guī)組培中，每天可消毒288瓶（72瓶×4次，每瓶50 mL，可接種15株苗），按照每個(gè)工人平均每天接種200瓶計(jì)算，可供1.44人接種使用，即開(kāi)放組培的1個(gè)生產(chǎn)單元為1.44人。

秸稈反應(yīng)堆啟動(dòng)后一個(gè)半月內(nèi)的二氧化碳濃度明顯高于對(duì)照區(qū)，并且棚溫越高二氧化碳濃度差越明顯。之后影響逐漸下降，二個(gè)月后影響不明顯，詳見(jiàn)表1。

試驗(yàn)所采用的培養(yǎng)基為鐵皮石斛不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基（培養(yǎng)基A），主要成分為：MS+2.5 mg/L 6-BA+0.25 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7 g/L瓊脂。在此基礎(chǔ)上開(kāi)放培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基（培養(yǎng)基B）額外添加了體積比為0.25%的植培靈。所有培養(yǎng)基的pH控制在5.6～5.8。

從現(xiàn)有的研究來(lái)看，有些研究只是單純注意到了這幾種句式的語(yǔ)體差異或只是關(guān)注了句式的表層意義，即使有學(xué)者將將句法和語(yǔ)義結(jié)合研究，但是對(duì)于現(xiàn)代漢語(yǔ)“讓”字句的分析仍不是十分完善和系統(tǒng)?！被诖?，該文在加的夫語(yǔ)法的指導(dǎo)下，對(duì)現(xiàn)代漢語(yǔ)“讓”字引領(lǐng)的句法特征、語(yǔ)義特征和句法功能進(jìn)行多維角度的論述，以期為漢語(yǔ)學(xué)界對(duì)有關(guān)“讓”字的研究提供一個(gè)新的研究視角和研究思路。

在開(kāi)放組培中，每天可消毒6 000杯（2 000杯×3次，每杯30 mL，可接種7～8株苗），按照每個(gè)工人平均每天接種400杯計(jì)算，可供15人接種使用，即開(kāi)放組培的1個(gè)生產(chǎn)單元為15.00人。

1.3.2 接種環(huán)節(jié)比較

如果企業(yè)是侵權(quán)人的，企業(yè)應(yīng)在接到權(quán)利人通知后及時(shí)核實(shí)是否侵權(quán)，并通過(guò)以下幾方面尋找合理的抗辯事由：如不侵權(quán)抗辯，即被控侵權(quán)產(chǎn)品未落入專(zhuān)利的保護(hù)范圍；二是自由公知技術(shù)抗辯，被控侵權(quán)產(chǎn)品使用了專(zhuān)利申請(qǐng)日前的技術(shù)；三是專(zhuān)利權(quán)無(wú)效抗辯，通過(guò)無(wú)效對(duì)方的專(zhuān)利權(quán)來(lái)達(dá)到不侵權(quán)的目的；四是先用權(quán)抗辯，主張?jiān)趯?zhuān)利申請(qǐng)日前已經(jīng)使用的；五是合法來(lái)源抗辯，僅適用于銷(xiāo)售者；六是法定不侵權(quán)抗辯。

Thanksgiving Day is a time to offer thanks, please express your gratitude and blessings to your family and friends with the help of the following expressions on this special day!

1.3.3 生產(chǎn)成本比較

為了更好地將開(kāi)放組培技術(shù)應(yīng)用到實(shí)際生產(chǎn)中，本研究擬通過(guò)對(duì)比開(kāi)放組培及常規(guī)組培的生產(chǎn)成本來(lái)更合理地指導(dǎo)生產(chǎn)。對(duì)比方法如下：首先按照1臺(tái)100 L滅菌鍋對(duì)組培杯進(jìn)行滅菌的效率計(jì)算為標(biāo)準(zhǔn)，分別計(jì)算開(kāi)放組培時(shí)所需簡(jiǎn)易臺(tái)數(shù)目，以及常規(guī)組培時(shí)所需超凈臺(tái)數(shù)目以及所需配套的滅菌鍋數(shù)目。再根據(jù)前期的設(shè)備投入計(jì)算一次性投入（b）；根據(jù)電費(fèi)、抑菌劑費(fèi)用計(jì)算相應(yīng)的年累積投入（a），最終以年為自變量，分別計(jì)算并比較隨時(shí)間增加2種方法的總成本投入情況。

1.4 數(shù)據(jù)分析

污染情況以污染率表示：污染率=污染瓶（杯）數(shù)/接種瓶（杯）數(shù)；增殖情況以增殖系數(shù)表示：增殖系數(shù)=再生不定芽數(shù)/接種外植體數(shù)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、描述統(tǒng)計(jì)、方差分析及相關(guān)圖表用PASW Statistics（formerly SPSS Statistics）軟件進(jìn)行分析和制作。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 污染率比較

在培養(yǎng)基制備10 d后，以未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基A為對(duì)照，分別統(tǒng)計(jì)經(jīng)高溫高壓滅菌的培養(yǎng)基A和未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基B的污染率，以此對(duì)高溫高壓滅菌效果和抑菌劑的抑菌效果進(jìn)行比較。結(jié)果如圖1所示，未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基A污染率為100%；經(jīng)高溫高壓滅菌的培養(yǎng)基A污染率為2.41%；未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基B污染率為0.33%。

2.2 接種過(guò)程比較

接種過(guò)程比較分別從接種過(guò)程和培養(yǎng)過(guò)程進(jìn)行比較。在培養(yǎng)基接種40 d后，以高溫高壓滅菌培養(yǎng)基A在開(kāi)放環(huán)境下接種為對(duì)照，分別統(tǒng)計(jì)經(jīng)高溫高壓滅菌的培養(yǎng)基A在無(wú)菌環(huán)境和未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基B在開(kāi)放環(huán)境的污染率，以此對(duì)高溫高壓滅菌效果和抑菌劑的抑菌效果進(jìn)行比較。結(jié)果如圖2所示，經(jīng)高溫高壓在開(kāi)放培養(yǎng)下的污染率為15%；經(jīng)高溫高壓滅菌的培養(yǎng)基A在無(wú)菌環(huán)境下污染率為5%；未經(jīng)滅菌的培養(yǎng)基B的污染率為0。

培養(yǎng)60 d后，選擇未污染組培苗進(jìn)行增殖率比較。經(jīng)方差分析顯示，開(kāi)放組培和常規(guī)組培在接種苗增殖上差異不顯著（p=0.604 7）。進(jìn)一步證明了開(kāi)放組培的可行性。

鐵鹽溶液中先稱(chēng)量FeSO4·7H2O 以及Na2-EDTA，分別用450 mL的蒸餾水進(jìn)行溶解，分別加熱，并不停攪拌至完全融化，再把FeSO4·7H2O溶液緩緩倒入Na2-EDTA溶液中，將2種溶液混合均勻后倒入容量瓶定容后倒入棕色試劑瓶中，并放置于冰箱中保存。

2.3 成本比較

2.3.1 組培生產(chǎn)單元計(jì)算

本研究將1臺(tái)滅菌鍋在1個(gè)工作日（8 h）內(nèi)能滿(mǎn)足的最大生產(chǎn)人數(shù)作為1個(gè)生產(chǎn)單元，即1臺(tái)滅菌鍋1 d內(nèi)生產(chǎn)的培養(yǎng)基至少可供接種的人數(shù)。以1臺(tái)100 L高壓滅菌鍋為例：

上述2種培養(yǎng)基經(jīng)加熱煮沸后分別進(jìn)行分裝，培養(yǎng)基A分裝于220 mL透氣組培瓶，培養(yǎng)基B分裝于經(jīng)高壓蒸汽滅菌（121 ℃，20 min）的塑料杯中，并用滅菌透氣封口膜封口。分裝過(guò)程均在開(kāi)放環(huán)境下進(jìn)行（分裝前15 min，用75%乙醇進(jìn)行室內(nèi)降塵）。分裝結(jié)束后培養(yǎng)基A經(jīng)高壓蒸汽滅菌，培養(yǎng)基B不進(jìn)行滅菌，待培養(yǎng)基A滅菌結(jié)束后，放置于室溫環(huán)境下，10 d后觀(guān)察各處理培養(yǎng)基污染情況，每個(gè)處理3次重復(fù)。

6-BA母液的濃度為1 mg/mL，配制時(shí)先用少量1 mol/L的HCl將100 mg 6-BA進(jìn)行溶解，再溶于90 mL蒸餾水中，最后用蒸餾水定容100 mL，貯藏于棕色試劑瓶中，貼好標(biāo)簽放入冰箱內(nèi)低溫保存。

因此，為達(dá)到與開(kāi)放組培1個(gè)生產(chǎn)單元同樣的生產(chǎn)效率，至少需要約10個(gè)常規(guī)組培生產(chǎn)單元。

2.3.2 投入成本計(jì)算

為比較常規(guī)組培與開(kāi)放組培的應(yīng)用效果，將上述2種培養(yǎng)基分別在超凈臺(tái)內(nèi)及開(kāi)放環(huán)境下進(jìn)行接種，接種方法如下：（1）超凈臺(tái)內(nèi)接種：在超凈臺(tái)內(nèi)分別將石斛接種到培養(yǎng)基A、B中，接種方法按常規(guī)無(wú)菌操作流程進(jìn)行，主要步驟如下：接種前先在超凈工作臺(tái)內(nèi)噴75%乙醇，并打開(kāi)紫外燈消毒20 min后打開(kāi)風(fēng)機(jī)，正式接種前再用75%酒精仔細(xì)擦一遍臺(tái)面，消毒結(jié)束后按無(wú)菌操作步驟進(jìn)行接種操作，每種培養(yǎng)基分別接種10瓶（杯），接種后放于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（環(huán)境溫度：25 ℃；濕度60%；光周期：12 h/12 h）。分別于接種40 d和60 d統(tǒng)計(jì)鐵皮石斛組培苗的污染情況及增殖情況。（2）開(kāi)放環(huán)境接種：在簡(jiǎn)易工作臺(tái)內(nèi)分別將石斛接種到培養(yǎng)基A、B中，除沒(méi)有風(fēng)機(jī)外，其余步驟與在超凈臺(tái)內(nèi)接種相同。每種培養(yǎng)基分別接種10瓶（杯），接種后放于光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（環(huán)境溫度：25 ℃；濕度60%；光周期：12 h/12 h）。分別于接種40 d和60 d統(tǒng)計(jì)鐵皮石斛組培苗的污染情況及增殖情況。

以開(kāi)放組培1個(gè)生產(chǎn)單元的生產(chǎn)效率為標(biāo)準(zhǔn)，在進(jìn)行開(kāi)放組培時(shí)，一次性投入（1臺(tái)滅菌鍋+15個(gè)簡(jiǎn)易臺(tái)）為：b開(kāi)（萬(wàn)元）=1.50（萬(wàn)元/臺(tái)）× 1（臺(tái)）+0.02（萬(wàn)元/個(gè)）×15（個(gè)）=1.80（萬(wàn)元）；年累計(jì)投入（200個(gè)工作日所需滅菌鍋電費(fèi)+抑菌劑費(fèi)用）為：a開(kāi)（萬(wàn)元）=200（天）×（7.80×10-5（萬(wàn)元/度）×3.50（度/次）×3（次）+6.50×10-3（萬(wàn)元/瓶）×4.50（瓶））=6.01（萬(wàn)元）。

NAA母液的濃度為1 mg/mL，配制時(shí)先用少量95%的乙醇將100 mg NAA進(jìn)行溶解，再溶于90 mL蒸餾水中，最后用蒸餾水定容100 mL，貯藏于棕色試劑瓶中，貼好標(biāo)簽放入冰箱內(nèi)低溫保存。

2.3.3 生產(chǎn)成本計(jì)算

現(xiàn)如今，隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)發(fā)展速度的不斷加快，城市化進(jìn)程速度也在不斷提升，道路橋梁建設(shè)項(xiàng)目也越來(lái)越多，人們對(duì)市政道路橋梁的建設(shè)質(zhì)量也越來(lái)越高度關(guān)注。因?yàn)槭姓缆窐蛄汗こ痰慕ㄔO(shè)質(zhì)量直接關(guān)系到城市的經(jīng)濟(jì)發(fā)展以及人們的通行順暢安全，而道路橋梁工程的伸縮縫是質(zhì)量管理中最重要的內(nèi)容之一，因此進(jìn)一步加強(qiáng)對(duì)其的研究非常有必要。在實(shí)際應(yīng)用中工作人員需要做好準(zhǔn)備工作，同時(shí)采取有效的措施進(jìn)行優(yōu)化，并嚴(yán)格的控制每一個(gè)環(huán)節(jié)，從而能夠更好的確保道路橋梁工程建設(shè)質(zhì)量?；诖吮疚姆治隽耸姓缆窐蛄荷炜s縫施工質(zhì)量技術(shù)控制。

以年為自變量（X），以一次性投入（b）和年累計(jì)投入（a）為參數(shù)，如圖3所示，生產(chǎn)成本可以表示為一條隨著時(shí)間增加而持續(xù)增長(zhǎng)的直線(xiàn)。根據(jù)前面的研究結(jié)果，開(kāi)放組培的成本可表示為：y開(kāi)（萬(wàn)元）=a開(kāi)× x+b開(kāi)=6.01x+1.80（x ≥0）；常規(guī)組培的成本可表示為：y常（萬(wàn)元）=a常× x+b常=3.68x+16.80（x ≥0）。根據(jù)二者直線(xiàn)方程可知，在定義域內(nèi)，二直線(xiàn)相交，經(jīng)計(jì)算，其交點(diǎn)為（6.44，40.50），即當(dāng)生產(chǎn)時(shí)間增加至6.44年的時(shí)候，二者生產(chǎn)成本相等，為40.50萬(wàn)元。

3 討論

3.1 生產(chǎn)效果比較

在本研究中，開(kāi)放組培培養(yǎng)基的污染率為0.33%，常規(guī)組培的培養(yǎng)基污染率為2.41%。開(kāi)放組培接種過(guò)程污染率為0%；常規(guī)組培接種過(guò)程污染率為5%。對(duì)比二者增殖情況，開(kāi)放組培和常規(guī)組培中不定芽的增殖率差異不顯著。崔剛[9]等進(jìn)行葡萄開(kāi)放式組織培養(yǎng)研究以及徐曉敏[10]薯類(lèi)作物開(kāi)放式組培研究等都證明了這一點(diǎn)?？梢?jiàn)，通過(guò)開(kāi)放組培的方式進(jìn)行鐵皮石斛種苗的培育是可行的。

由圖3可知，由于示例飛機(jī)最大飛行高度較低，其駕駛艙和客艙壓差峰值較8000ft高度下主風(fēng)擋破裂小。在決定是否在駕駛艙門(mén)上設(shè)置泄壓板時(shí)，可選取兩者中較嚴(yán)酷的壓差峰值，與駕駛艙門(mén)結(jié)構(gòu)承載能力進(jìn)行比較。當(dāng)壓差峰值超過(guò)駕駛艙門(mén)結(jié)構(gòu)壓差承載限值時(shí)，則需在駕駛艙門(mén)上加裝泄壓板。

3.2 生產(chǎn)成本比較

由結(jié)果可知，常規(guī)組培前期的成本投入非常高，主要是儀器費(fèi)用以及電費(fèi)這兩個(gè)方面。開(kāi)放組培在前期投入就遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于常規(guī)組培。張艷[11]在杉木開(kāi)放式組織培養(yǎng)的初步研究中也證實(shí)了這一情況。在相同生產(chǎn)效率下，且不考慮設(shè)備維修及報(bào)廢的前提下，開(kāi)放組培在6.44年后的生產(chǎn)累計(jì)成本才高于常規(guī)組培。如果當(dāng)電力成本減小那么這個(gè)時(shí)間將往前移。同樣，當(dāng)植培靈成本降低或者換用其他價(jià)格較低的抑菌劑能達(dá)到同樣效果時(shí)，那么這個(gè)時(shí)間會(huì)推遲。

例2：“Z文件中的24小時(shí)降水量與實(shí)際統(tǒng)計(jì)計(jì)算值不相等”。該疑誤信息出現(xiàn)的原因有以下幾種：(1)臺(tái)站作維護(hù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)有滯后降水、昆蟲(chóng)致其空翻等原因造成的虛假降水并將其刪除，但未及時(shí)發(fā)更正報(bào)，導(dǎo)致省局接收的對(duì)應(yīng)時(shí)次Z文件中小時(shí)降水量有誤；(2)臺(tái)站作維護(hù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)有滯后降水、昆蟲(chóng)致其空翻等原因?qū)е碌奶摷俳邓⑵鋭h除，同時(shí)發(fā)送了更正報(bào)，但由于發(fā)現(xiàn)虛假降水的時(shí)間較晚，導(dǎo)致后續(xù)時(shí)次Z文件中累計(jì)降水量有誤(3)其他未知原因。

3.3 開(kāi)放組培優(yōu)點(diǎn)

由于開(kāi)放組培最初成本投入比較小，因此有利于企業(yè)成立初期資金較為短缺的情況下進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，不僅可以解決資金短缺的問(wèn)題，還能降低運(yùn)營(yíng)風(fēng)險(xiǎn)，使組培育苗成為低投入、高產(chǎn)出、低風(fēng)險(xiǎn)的生產(chǎn)方式。

除上述優(yōu)點(diǎn)之外，在進(jìn)行鐵皮石斛開(kāi)放組培的同時(shí)，還采用相同的技術(shù)進(jìn)行雜交構(gòu)樹(shù)組培苗的培育工作。在培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)：采用開(kāi)放組培時(shí)，由于“塑料杯+封口膜”的培養(yǎng)容器透氣性較好，與玻璃組培瓶相比玻璃化現(xiàn)象大大降低，極大提高了組培苗的成活幾率。張敏[12]等對(duì)影響草莓玻璃化若干因素的研究也表明：增加封口膜的透氣性可大大減少玻璃化現(xiàn)象的產(chǎn)生。同時(shí)塑料杯由于質(zhì)量輕，轉(zhuǎn)運(yùn)方便，更適合組培苗煉苗及轉(zhuǎn)運(yùn)，可大幅提高轉(zhuǎn)運(yùn)效率，降低人工成本。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，開(kāi)放組培培養(yǎng)基無(wú)需高壓滅菌，接種只需在自然、開(kāi)放的環(huán)境中進(jìn)行，不用超凈工作臺(tái)，可從根本上簡(jiǎn)化組織培養(yǎng)環(huán)節(jié)，降低組培成本；開(kāi)放組培與常規(guī)組培相比污染率和增殖效果差異不明顯。同時(shí)，生產(chǎn)成本比較結(jié)果表明，在相同生產(chǎn)規(guī)模下，一定時(shí)間內(nèi)（6.44年）開(kāi)放組培的生產(chǎn)投入低于常規(guī)組培。開(kāi)放組培與傳統(tǒng)組培對(duì)比，不僅可以降低成本，而且操作簡(jiǎn)單，只要按不同的培養(yǎng)基配方配制后，再加上抑菌劑即可。投資少，實(shí)用性強(qiáng)，推廣性好，可將開(kāi)放組培技術(shù)應(yīng)用到鐵皮石斛的種苗生產(chǎn)中。