液相色譜法測(cè)定蘋(píng)果中 滅幼脲殘留量的不確定度評(píng)估

李 云，章 穎，李牛江杰，莊 瓊

（安徽省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)研究院，安徽合肥 230000）

滅幼脲可高效殺滅鱗翅目類等幼蟲(chóng)蟲(chóng)卵，作為一種低毒殺蟲(chóng)劑被廣泛應(yīng)用于果蔬類黏蟲(chóng)、螟蟲(chóng)、菜青蟲(chóng)和小菜蛾等蟲(chóng)害的防治工作[1]。然而，長(zhǎng)期食用含滅幼脲的食品會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定的損傷[2-3]。

不確定度是反映測(cè)量結(jié)果的分散性，與測(cè)量結(jié)果具有相關(guān)性[4-5]。本文擬參照《植物性食品中滅幼脲殘留量的測(cè)定》（GB/T 5009.135—2003）建立滅幼脲的檢測(cè)方法；參照《測(cè)量不確定度評(píng)定與表示》 （JJF 1059.1—2012）建立數(shù)字模型，《化學(xué)分析測(cè)量不確定度評(píng)定》（JJF 1135—2005）評(píng)定蘋(píng)果中滅幼脲的不確定度。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

選擇蘋(píng)果為植物性食品代表樣品，購(gòu)置于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)品，純度99.8%，中國(guó)計(jì)量院；二氯甲烷為色譜純，其他試劑為分析純。

1.2 儀器設(shè)備

電子天平，精確至0.1 mg，METTLER TOLEDO； 均質(zhì)器，轉(zhuǎn)速可達(dá)3 000～25 000 r/min，德國(guó)IKA；離心機(jī)，轉(zhuǎn)速可達(dá)100～14 000 r/min，賽默飛世爾科技公司；LC30液相色譜儀，配有PDA檢測(cè)器，島津公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 色譜條件

色譜柱：C18柱（200 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng) 相：甲醇-水（75+25）；流速：1 mL/min。

1.3.2 樣品提取

蘋(píng)果樣品去柄，搗碎成漿狀，后稱取2.500 g試樣，根據(jù)《植物性食品中滅幼脲殘留量的測(cè)定》 （GB/T 5009.135 —2003）進(jìn)行樣品提取，合并上清液，用提取液定容至25 mL。

1.3.3 樣品凈化

根據(jù)《植物性食品中滅幼脲殘留量的測(cè)定》 （GB/T 5009.135 --2003）進(jìn)行樣品凈化，將樣品凈化液于40 ℃下水浴氮吹近干，加入1 mL二氯甲烷溶解，過(guò)0.45 μm濾膜上機(jī)測(cè)定。

1.3.4 數(shù)學(xué)模型建立

樣品中滅幼脲含量計(jì)算的數(shù)學(xué)模型建立如下：

式中：X為樣品中滅幼脲的含量，mg/kg；m為樣品質(zhì)量，g；V1為試樣浸出液的定容體積，mL；C為利用標(biāo)準(zhǔn)曲線算得的試樣殘?jiān)芤褐袦缬纂宓臐舛?，μg/mL；V2為上柱的試樣浸出液的體積，mL；V3為溶解試樣殘?jiān)玫娜軇w積，mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 不確定度因素的分析

本方法不確定因素主要來(lái)源為稱取樣品過(guò)程中引入的不確定度、配制標(biāo)準(zhǔn)溶液過(guò)程中引入的不確定度、定容樣品時(shí)引入的不確定度、標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合時(shí)引入的不確定度、重復(fù)性測(cè)定時(shí)引入的不確定度和樣品加標(biāo)時(shí)引入的不確定度。

2.2 稱取樣品過(guò)程中引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(m)

2.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(C)

2.3.1 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度引入的相對(duì)不確定度urel(C1)

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)，標(biāo)準(zhǔn)品滅幼脲的相對(duì)不確定度為urel(C1)=0.7%（k=2）。

2.3.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度urel(C2)

標(biāo)樣的制備方法：稱取10.0 mg滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)品于10 mL容量瓶中，加水定容至刻度。滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度為0.1 mg/mL。然后準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液10 μL、 20 μL、50 μL、100 μL和200 μL置于10 mL容量瓶。所以標(biāo)準(zhǔn)溶液配制引入的不確定度由3個(gè)分量合成。

2.4 定容樣品時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(V1)

2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(A)

標(biāo)準(zhǔn)曲線每一個(gè)濃度分別進(jìn)樣2次，取兩次峰面積平均值，結(jié)果如表1所示。

表1 滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)溶液5個(gè)濃度點(diǎn)與對(duì)應(yīng)的峰面積

由表1可知，工作曲線線性方程為：

式中：Ai為第i個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積；Ci為第i個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，μg/mL；a為線性方程的斜率；b為線性方程的截距。按照線性擬合，得到線性方程為A=220.357C，線性相關(guān)系數(shù)r為1。

故工作曲線擬合產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

式中：u(A)為由擬合直線求C0時(shí)產(chǎn)生的不確定度；SR為由擬合直線求得的A與相應(yīng)Ai測(cè)定值之差按貝塞爾公式求出的標(biāo)準(zhǔn)偏差；p為試樣溶液的進(jìn)樣次數(shù)，p=2；n為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液總的進(jìn)樣次數(shù)，n=5；Ai為標(biāo)準(zhǔn)工作溶液峰面積測(cè)定值；a為斜率，其值為220.357；b為截距，其值為0；Ci為滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，μg/mL；C—為滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度的平均值，為0.76 μg/mL；C0為試樣中滅幼脲的濃度，為2 μg/mL。

根據(jù)上述公式得到標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合時(shí)引入的不確定度為u(A)=0.003 73 μg/mL。

將表1中的數(shù)據(jù)代入上述公式，計(jì)算得SR=0.024 0，u(A)=0.003 73 μg/mL，則標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合時(shí)引入的相對(duì)不確定度為urel(A)=u(A)/C0=0.003 73/2=0.001 865。

2.6 重復(fù)性測(cè)定時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(F)

表2為7次重復(fù)試驗(yàn)測(cè)定蘋(píng)果中滅幼脲殘留量的匯總表。

表2 蘋(píng)果中滅幼脲重復(fù)性結(jié)果

根據(jù)正態(tài)分布計(jì)算，重復(fù)性測(cè)定時(shí)引入滅幼脲的不確定度為：

試樣溶液測(cè)定平均值為C=2.038 mg/kg，計(jì)算得到重復(fù)性測(cè)定時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為urel(F)=u(F)/C=0.014 4/2.038=0.007 06。

2.7 樣品加標(biāo)時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(B)

取2.500 g樣品，添加1.00 mg/L滅幼脲標(biāo)準(zhǔn)溶液，根據(jù)式（1）計(jì)算出蘋(píng)果中滅幼脲的加標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表3。

表3 蘋(píng)果中滅幼脲加標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果

樣品加標(biāo)進(jìn)行了兩次平行測(cè)定，因此，樣品加標(biāo)引入的不確定度為：

樣品平均回收率為x=94%。因此，樣品加標(biāo)時(shí)引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度urel(B)=u(B)/x=0.000 022 7。

2.8 相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度ucrel(x)和擴(kuò)展不確定度U

蘋(píng)果中滅幼脲的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

蘋(píng)果中滅幼脲含量x=2.00 mg/kg，則滅幼脲合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度為uc(x)=0.011 7×2.00=0.023 4 mg/kg。 選擇包含因子k=2，則擴(kuò)展不確定度為U=2uc(x)= 0.046 8 mg/kg。蘋(píng)果中滅幼脲的含量測(cè)量結(jié)果為（2.00±0.046 8）mg/kg，k=2。

3 結(jié)論

本研究建立了測(cè)定蘋(píng)果中滅幼脲殘留量過(guò)程中的不確定度評(píng)定方法，歸納了不確定度因素的來(lái)源，根據(jù)最終評(píng)定結(jié)果可以看出，滅幼脲的不確定度主要來(lái)源于標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的擬合、重復(fù)性測(cè)定和標(biāo)準(zhǔn)溶液的樣品加標(biāo)，應(yīng)當(dāng)注意標(biāo)準(zhǔn)曲線的配制和重復(fù)性測(cè)定。