調(diào)血降脂丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

閆偉亞

摘要：：目的：建立調(diào)血降脂丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對(duì)何首烏（制）、山楂進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法對(duì)女貞子中特女貞苷進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果：何首烏（制）、山楂中熊果酸的薄層鑒別分離度好，斑點(diǎn)清晰、陰性無(wú)干擾，專屬性強(qiáng);特女貞苷的含量線性范圍為0.1896-3.792μg（r=0.9999），平均回收率為99.41%，RSD為0.34%。結(jié)論：建立了調(diào)血降脂丸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，該方法操作方法簡(jiǎn)便易行、準(zhǔn)確、靈敏度高、穩(wěn)定可靠，可用于控制該制劑的質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：調(diào)血降脂丸;TLC;何首烏（制）;熊果酸;HPLC;特女貞苷

【中圖分類號(hào)】 R283 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）13--02

ABSTRACT：? Objective： To establish an HPLC method for determination of Trevor privet glycosides? in TiaoXueJiangZhi pill. Method： Agilent-C18（250mm×4.6mm，5μm） column was used.The mobile? phase was consisting of methanol and water（40：60）with a flow rate of ml·min-1.The column temperature was set at 30℃.The detection wawelength? was 224 nm，and theinjecticn volume was 10μl.Result： The linear range of Trevor privet glycosides in TiaoXueJiangZhi pill was 0.1896-7.587μg （r=0.9999）. The average recovery of Trevor privet glycosides was 99.41%and RSD was 0.34%. Conclusion： The method is simple ，sensitive and accurte and can be used to determine Trevor privet glycosides? in TiaoXueJiangZhi pill and quality control of TiaoXueJiangZhi pill.

Key words： TiaoXueJiangZhi pill;Determination;HPLC;Trevor privet glycosides

調(diào)血降脂丸是由平頂山煤業(yè)（集團(tuán)）有限責(zé)任公司總醫(yī)院生產(chǎn)的醫(yī)院中藥制劑[1]（豫藥制字Z04040039），處方由女貞子，何首烏（制）、丹參、山楂、大黃、澤瀉等味藥組成，具有補(bǔ)活血、祛濕瀉濁的功效。主要用于高血脂、高血粘綜合征，脂肪肝，肥胖癥;防治動(dòng)脈粥樣硬化及冠心病等?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)簡(jiǎn)單，不能有效的控制藥品質(zhì)量。女貞子是處方中的主藥，其有效成分是特女貞苷，因此，測(cè)定調(diào)血降脂丸制劑中特女貞苷含量對(duì)控制調(diào)血降脂丸的質(zhì)量有著十分積極的意義。何首烏（制）、山楂也是調(diào)血降脂丸處方中的主要藥味，何首烏（制）具有補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨功效，用于血虛萎黃，眩暈耳鳴，須發(fā)早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，久瘧體虛;高血脂。主要適宜人群是脂肪肝，三高，肥胖癥，失眠，脫發(fā)，少白頭及亞健康人群。山楂具有消食健胃、活血化淤、收斂止痢的功效，主要應(yīng)用于降血脂、血壓、強(qiáng)心、抗心律不齊等，所以為了進(jìn)一步提高標(biāo)準(zhǔn)，保證制劑的穩(wěn)定可靠，我們采用TLC法對(duì)何首烏、山楂進(jìn)行定性鑒別，采用HPLC法對(duì)女貞子中特女貞苷進(jìn)行含量測(cè)定，以便更好地控制制劑調(diào)血降脂丸的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1儀器

Agilent 1200高效液相色譜儀;DAD檢測(cè)器;色譜柱Agilent-C18（5μm，4.6mm×250mm）;XS205DU電子分析天平 [梅特勒 超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2試藥

特女貞苷對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111926-201404，含量97.3%），甲醇為色譜純，水為超純化水，其他試劑均為分析純。

調(diào)血降脂丸為平頂山煤業(yè)（集團(tuán)）有限責(zé)任公司總醫(yī)院提供（批號(hào)為160317，160426，160521），缺位陰性對(duì)照樣品由平頂山煤業(yè)（集團(tuán)）有限責(zé)任公司總醫(yī)院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1何首烏薄層鑒別

2.1.1 供試品溶液制備：取本品粉末0.5g，加乙醇50ml，加熱回流1小時(shí)，濾過(guò)，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照溶液制備：另取何首烏對(duì)照藥材0.25g，同法制成對(duì)照藥材溶液。

2.1.3 陰性對(duì)照溶液的制備：除何首烏外，其他各藥按供試品處方量投料按調(diào)血降脂丸的制備工藝制成陰性對(duì)照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液的制備。

2.1.4 照薄層色譜法（2015年版中國(guó)藥典通則0502）試驗(yàn)，吸取上述五種種溶液各2μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠H薄層板上使成條狀，以三氣甲烷-甲醇（7：3）為展開(kāi)劑，展至約3.5cm ，取出，晾干，再以三氯甲烷-甲醇（20： 1）為展開(kāi)劑，展至約7cm，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。

2.1.5 供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。

1.樣品（批號(hào)：180317）2.樣品（批號(hào)：180426）3.樣品（批號(hào)：190221）

4.何首烏對(duì)照藥材? ?5.缺何首烏陰性對(duì)照

2.2山楂中熊果酸薄層鑒別

2.2.1供試品溶液制備：取本品粉末lg，加乙酸乙酯40ml超聲處理15分鐘，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。

2.2.2對(duì)照品溶液制備：取熊果酸對(duì)照品，加甲醇制成每l ml含l mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2.3陰性對(duì)照溶液的制備：除山楂外，其他各藥按供試品處方量投料按調(diào)血降脂丸的制備工藝制成陰性對(duì)照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液的制備。

2.2.4試驗(yàn)方法：照薄層色譜法（2015年版中國(guó)藥典通則0502）試驗(yàn)，吸取上述五種溶液各4μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G 薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（20： 4： 0.5）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液（3-10），在80℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。

2.2.5實(shí)驗(yàn)結(jié)果：供試品色譜中，置紫外光燈（365nm）下檢視，顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。

1.樣品（批號(hào)：180317）2.樣品（批號(hào)：180426）3.樣品（批號(hào)：190221）

4.熊果酸對(duì)照品? ? ? 5.缺山楂陰性對(duì)照

2.3 女貞子中特女貞苷含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件

Agilent-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇-水（40：60），檢測(cè)波長(zhǎng)為224nm，柱溫：30℃，流速為1.0ml·min-1，進(jìn)樣量10μl。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取對(duì)照品特女貞苷9.48mg，置50ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解至刻度，搖勻，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備[2]

取供試品2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，加50%甲醇50ml，稱重，超聲處理（功率240W，頻率45kHz）30分鐘，放冷，加50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用0.45μm 微孔濾膜濾過(guò)，即得。

2.3.4 陰性對(duì)照溶液的制備

除女貞子外，其他各藥按供試品處方量投料按調(diào)血降脂丸的制備工藝制成陰性對(duì)照，然后按供試品的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液的制備。

2.3.5 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

分別精密吸取2.2、2.3、2.4項(xiàng)下溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果見(jiàn)圖 1。 特女貞苷的保留時(shí)間為14.207min，與相鄰雜質(zhì)峰分離度均大于1.5，拖尾因子為0.72，峰形良好。陰性對(duì)照色譜圖在主成分色譜峰位置處無(wú)干擾，理論塔板數(shù)按特女貞苷計(jì)，不低于4000。

2.3.6 線性關(guān)系考察

分別吸取對(duì)照品溶液（0.1896mg·ml-1）1、3、5、8、10、20μl各進(jìn)樣兩次，記錄峰面積分值，以特女貞苷峰面積積分值對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得到回歸曲線y=109.25x+38.702，r=0.9999。結(jié)果表明其線性關(guān)系良好，線性范圍為：0.1896～3.792μg 。

2.3.7 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述對(duì)照品溶液10μL ，重復(fù)進(jìn)樣6 次，按上述色譜條件測(cè)定峰面積。結(jié)果， RSD = 0.57% ，表明儀器精密度良好。

2.3.8重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批（批號(hào)： 160426） 樣品6 份，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定。結(jié)果，平均含量為1.202mg/g，RSD = 0.71 % ，表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.9 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液（批號(hào)： 160426） ，分別于0 、1 、2 、4 、8 、12h 各精密吸取10μL ， 按上述色譜條件測(cè)定峰面積積分值。結(jié)果，RSD = 0.64% ，表明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.10 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的樣品9份，分別精密加入一定量的特女貞苷對(duì)照品，照“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μL ，測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果詳見(jiàn)表1 。

結(jié)果表明，平均回收率均介于95% ～105%，符合要求。

2.3.11 樣品含量測(cè)定

按上述含量測(cè)定方法測(cè)定樣品中特女貞苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2 。

3 結(jié)論

采用TLC法對(duì)何首烏、山楂進(jìn)行定性鑒別時(shí)，考察了不同提取溶劑（甲醇、乙腈、乙醇、乙酸乙酯）和不同的提取方法（超聲提取、加熱回流提取、浸漬提?。?duì)提取效果及專屬性的影響，發(fā)現(xiàn)以乙醇為溶劑，加熱回流1小時(shí)的制何首烏提取效果最佳，山楂的最佳提取方法為乙酸乙酯為溶劑，超聲提取15分鐘。同時(shí)參照中國(guó)藥典一部制何首烏、山楂項(xiàng)下的薄層色譜條件進(jìn)行定性鑒別，該方法穩(wěn)定可靠，操作簡(jiǎn)便，專屬性較強(qiáng)。

根據(jù)女貞子中化學(xué)成分及性質(zhì)[3]，在供試品制備的過(guò)程中，也曾考慮到其他樣品對(duì)女貞提取以及含量測(cè)定的影響[4-5]，考察了用不同濃度的甲醇進(jìn)行提取和處理方法，在超聲、回流等方法的基礎(chǔ)上，經(jīng)反復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以50%甲醇和超聲提取30分鐘的效果最佳[6]，考慮到操作的方便性，可操作性，本實(shí)驗(yàn)采取了50%甲醇超聲提取。

調(diào)血降脂丸是醫(yī)院制劑，在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中證明，就有良好的療效，但是長(zhǎng)期以來(lái)，以薄層鑒別作為該藥的標(biāo)準(zhǔn)，沒(méi)有具體的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，女貞子是調(diào)血降脂丸的主藥之一，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)用HPLC法對(duì)調(diào)血降脂丸中特女貞苷的含量進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)以上實(shí)驗(yàn)，建立了調(diào)血降脂丸制劑的質(zhì)量控制方法，該方法穩(wěn)定可靠，操作簡(jiǎn)便，專屬性較強(qiáng)，可以作為調(diào)血降脂丸制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的參考。

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