鎖陽(yáng)黃酮提取純化工藝優(yōu)選及吸附特性研究

呂 鑫，顧志榮，祁 梅，張 銳，郭 燕，毛小文，葛 斌*

（1.甘肅中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省人民醫(yī)院 藥劑科，甘肅 蘭州 730000）

鎖陽(yáng)黃酮（Cynomorium songaricumflavonoids，CSF）提取自鎖陽(yáng)科植物鎖陽(yáng)（Cynomorium songaricumRupr.）的干燥肉質(zhì)莖［1］。CSF 主要由兒茶素、柑桔素-4-O-吡喃葡萄糖苷、異槲皮苷、表兒茶素、原花青素、表兒茶素沒(méi)食子酸酯等成分組成［2］。CSF具有抗氧化［3］、延緩衰老［4］、清除自由基及抗癌［5］等多種生理活性。CSF 作為鎖陽(yáng)的有效成分之一，其科學(xué)、穩(wěn)定的提取純化工藝在藥效學(xué)研究方面具有關(guān)鍵作用?？偨Y(jié)關(guān)于CSF 提取純化的文獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)提取方法主要有超聲波輔助提取法［6］和溶劑提取法［7］，純化方法均為大孔吸附樹(shù)脂法［8］，而關(guān)于CSF提取純化工藝的系統(tǒng)研究未見(jiàn)報(bào)道。本研究以CSF提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，首先對(duì)CSF 的提取溶劑和提取方法進(jìn)行考察，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行單因素試驗(yàn)，最后通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)選提取工藝；查閱文獻(xiàn)統(tǒng)計(jì)大孔樹(shù)脂用于黃酮純化工藝研究中所用樹(shù)脂類型的頻次，選用AB-8、HPD-826、HPD-100、D-101 型大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行樹(shù)脂優(yōu)選，在最佳提取工藝的基礎(chǔ)上，從靜態(tài)吸附和動(dòng)態(tài)吸附兩方面探討CSF 的純化工藝，并闡明其吸附特性。首次對(duì)CSF 的提取純化工藝進(jìn)行系統(tǒng)完整的研究，旨在為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用CSF提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鎖陽(yáng)，2021年3月采集于內(nèi)蒙古，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李碩副教授鑒定為（Cynomorium songaricumRupr.）的干燥肉質(zhì)莖，將其晾至完全干透，粉碎，過(guò)二號(hào)藥典篩，60℃烘干，于干燥器保存?zhèn)溆?。蘆?。ㄅ?hào)：CHB170303，含量≥98%），購(gòu)自成都克洛瑪生物科技有限公司；所用試劑均為分析純；水為純化水。AB-8、HPD-826、HPD-100、D-101 型大孔吸附樹(shù)脂，均購(gòu)于武漢市偉琪博星生物科技有限公司，參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 不同型號(hào)大孔樹(shù)脂的參數(shù)Tab. 1 Parameters of different types of macroporous resins

1.2 儀器與設(shè)備

紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（UV8100A 型，北京萊伯泰科儀器有限公司），調(diào)速多用振蕩器（HY-4 型，常州普天儀器有限公司），萬(wàn)分之一電子天平（AL204型，瑞士梅特勒-托利多公司），超聲波清洗機(jī)（SB25-12DTD 型，寧波新芝生物科技股份有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋（HH-6 型，西安超杰儀器有限公司），真空干燥箱（DZF-6090 型，上海一恒科學(xué)儀器有限公司），低速大容量離心機(jī)（DD-5M 型，湘儀離心機(jī)儀器有限公司），EV351 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（北京萊伯泰科儀器有限公司）等。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 CSF的提取工藝

取鎖陽(yáng)粉末約50 g，按照所考察的工藝參數(shù)設(shè)定（即一定的提取時(shí)間、提取溫度、液料比及乙醇濃度）進(jìn)行回流提取，提取結(jié)束后，將提取液趁熱過(guò)濾，濾液濃縮至無(wú)醇味，定容于250 mL容量瓶中。

1.3.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品10 mg，用50%乙醇溶解并定容至50 mL 容量瓶中，搖勻，置于4℃藥品保存箱。

1.3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)選擇［9］

取“1.3.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2.5 mL 于10 mL 容量瓶中，先加入5%亞硝酸鈉（NaNO2）溶液0.4 mL，振蕩搖勻，靜置6 min；再加入10%硝酸鋁［Al（NO3）3］溶液0.4 mL，振蕩搖勻，靜置6 min，最后加4 mL10%氫氧化鈉（NaOH）溶液，振蕩搖勻，放置15 min，待顯色結(jié)束用50%乙醇溶液定容至刻度。以50%乙醇溶液為參比，在波長(zhǎng)200～800 nm 進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明在513 nm處有最大吸收。

1.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

精密量取“1.3.2”項(xiàng)下溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mL，分 別 置 于10 mL 容 量 瓶 中，同“1.3.3”方法顯色，測(cè)定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，A=12.036 0C+0.009 3，r=0.999 5，表明線性范圍在0.01～0.08 mg/mL。

1.3.5 方法學(xué)考察

1.3.5.1 精密度考察

精密吸取“1.3.2”項(xiàng)下溶液1.0 mL 于10 mL 容量瓶中，按“1.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定A513，連續(xù)測(cè)定6 次，A513值分別為0.241 9、0.241 9、0.241 6、0.241 8、0.241 9、0.241 9，RSD為0.05%，表明儀器精密度良好。

1.3.5.2 重復(fù)性考察

取鎖陽(yáng)粕粉約2g，加12 倍量75%乙醇，80℃回流提取60 min，趁熱過(guò)濾，濾液濃縮至無(wú)醇味，定容于25 mL容量瓶中，再精密量取0.1 mL定容至25 mL容量瓶中供后續(xù)測(cè)定使用。精密吸取1.0 mL于10 mL容量瓶中（下同），按“1.3.3”項(xiàng)下方法測(cè)定A513，A513值分別為0.572 9、0.562 0、0.572 3、0.545 1、0.552 5、0.567 3，RSD為2.0%，CSF 的 質(zhì) 量 分 數(shù) 分 別 為146.33、143.50、146.18、139.11、141.04、144.88 mg/g，RSD為2.03%，表明該方法重復(fù)性良好。

1.3.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取上述1.0 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，按“1.3.3”項(xiàng)下方法分別在0、10、20、30、40、50、60 min 測(cè)定A513，A513值分別為0.571 6、0.569 4、0.564 2、0.570 0、0.559 8、0.561 4、0.562 8，RSD為0.83%，表明樣品在1 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.5.4 加樣回收率

精密吸取6份上述供試品溶液各1.0 mL于10 mL容量瓶中，分別加入一定量的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.3.3”項(xiàng)下方法分別測(cè)定A513，得平均加樣回收率為98.79%，RSD為2.12%，結(jié)果表明本方法回收率良好。

1.3.6 大孔樹(shù)脂的預(yù)處理和再生處理

參照安曉婷［10］和馮靖［11］對(duì)樹(shù)脂的預(yù)處理和再生處理方法。

1.3.7 大孔樹(shù)脂的吸附解吸實(shí)驗(yàn)

錐形瓶中加入優(yōu)選得到的樹(shù)脂2 g，加入一定質(zhì)量濃度的CSF 提取液25 mL，將錐形瓶置于調(diào)速多用振蕩器中，頻率為120次/min，振蕩24 h，使之達(dá)到吸附平衡，取樣，測(cè)定A513，計(jì)算吸附率。

將達(dá)到吸附平衡的樹(shù)脂用純化水清洗后，加入70%乙醇25 mL，同上振蕩24 h，使之達(dá)到解吸平衡，取樣，測(cè)定A513，計(jì)算解吸率。

1.4 數(shù)據(jù)處理方法

式中：c為質(zhì)量濃度，v為提取液體積，n為稀釋倍數(shù)，m為鎖陽(yáng)粗粉質(zhì)量，C0、Ce分別為吸附前、后吸附液中CSF的質(zhì)量濃度，V、Vd分別為吸附液、解吸液的體積，m為樹(shù)脂質(zhì)量，Cd為解吸液濃度。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取工藝優(yōu)化

2.1.1 提取溶劑和提取方法考察

為探究最高提取工藝，在單因素試驗(yàn)前期，設(shè)定一定的提取時(shí)間、提取溫度、液料比及乙醇濃度，對(duì)提取溶劑和提取方法進(jìn)行考察，結(jié)果顯示醇提和水提的提取率分別為11.13%、8.56%；回流提取和超聲提取的提取率分別為13.47%、12.02%。因此，本研究采用熱乙醇回流提取CSF，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行后續(xù)單因素試驗(yàn)。

2.1.2 單因素試驗(yàn)

分別準(zhǔn)確稱取6份鎖陽(yáng)粗粉，設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，因素與水平見(jiàn)表2，以CSF 為指標(biāo)確定各因素的中心點(diǎn)。具體操作如下：

表2 單因素試驗(yàn)因素與水平Tab. 2 Parameters of different types of macroporous resins

設(shè)定料液比1∶10，提取溫度80℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)75%，按A列進(jìn)行提取，由圖1 可知：在90 min 以前，提取率與提取時(shí)間成正比，之后成反比，原因可能是受熱過(guò)久導(dǎo)致CSF某些不耐熱成分被破壞從而提取率降低［12］。因此，選擇90 min 作為提取時(shí)間的中心點(diǎn)；設(shè)定提取時(shí)間為90 min，提取溫度為80℃，乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%，按B列進(jìn)行提取，由圖2 可知：當(dāng)料液比小于1∶12時(shí)，提取率與料液比成正比，之后成反比，可能當(dāng)料液比增加到一定程度后，黃酮類成分基本溶出，再繼續(xù)增加雜質(zhì)的溶出也相繼增加。因此，選擇1∶12 作為料液比的中心點(diǎn)；設(shè)定提取時(shí)間為90 min，料液比為1∶12，乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%，按C列進(jìn)行提取，由圖3可知：70℃時(shí)提取率最高，70℃之前提取率隨溫度的升高而增大，之后反而減小，這可能是因?yàn)楦邷貢?huì)破壞組織細(xì)胞，低溫達(dá)不到溶出溫度［13］。因此，選擇70℃作為提取溫度的中心點(diǎn)；設(shè)定提取時(shí)間為90 min，料液比為1∶12，提取溫度為70℃，按D列進(jìn)行回流提取，由圖4 可知：乙醇濃度為65%時(shí)，提取率達(dá)到最大，而繼續(xù)增加乙醇濃度時(shí)，提取率逐漸降低。其原因可能在于隨著乙醇濃度的逐步增加時(shí)，某些脂溶性成分（醇溶性色素、親脂性成分等）溶出量也隨之增加，這些成分會(huì)與黃酮同時(shí)競(jìng)爭(zhēng)乙醇-水分子，導(dǎo)致提取率呈現(xiàn)出降低的趨勢(shì)［14］。因此，選擇65%作為乙醇濃度的中心點(diǎn)。

圖3 提取溫度對(duì)提取率的影響Fig.3 Effect of extraction temperature on extraction rate

圖4 乙醇濃度對(duì)提取率的影響Fig.4 Effect of ethanol concentration on extraction rate

2.1.3 正交試驗(yàn)

在“2.1.2”基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)，以CSF提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)篩選最佳提取工藝，因素水平見(jiàn)表3，結(jié)果見(jiàn)表4，方差分析見(jiàn)表5。結(jié)果顯示，4 個(gè)因素對(duì)CSF 提取率的影響依次為D＞C＞B＞A，其中以乙醇濃度和提取溫度的影響較為顯著。所得CSF的最佳提取條件為A3B2C3D2，即提取時(shí)間為120 min，料液比1∶12 g/mL，提取溫度80℃，乙醇濃度65%。在此條件下進(jìn)行重復(fù)提取3批樣品進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，CSF平均提取率可達(dá)19.95%，RSD為2.43%，見(jiàn)表6。

表3 因素與水平Tab.3 Factors and levels

表4 正交試驗(yàn)結(jié)果Tab.4 The results of orthogonal experiments

表5 方差分析Tab. 5 Analysis of variance

表6 驗(yàn)證試驗(yàn)Tab. 6 Confirmatory experiment

2.2 大孔樹(shù)脂的篩選

統(tǒng)計(jì)大孔樹(shù)脂用于黃酮純化工藝相關(guān)文獻(xiàn)中所用樹(shù)脂類型的頻次，選擇排名前4 的大孔樹(shù)脂類型，以吸附率、吸附量、解吸率、解吸量為指標(biāo)篩選樹(shù)脂。由表7可知，4種大孔樹(shù)脂均具有較高的吸附率，但HPB-826 同時(shí)具有最高的吸附率和解吸率，因此，本研究選擇HPD-826 型大孔樹(shù)脂作為后續(xù)研究。

表7 4種大孔樹(shù)脂的吸附與解吸效果比較Tab.7 Comparison of adsorption and desorption effects of four macroporous resins

2.3 吸附特性考察

2.3.1 樹(shù)脂的吸附動(dòng)力學(xué)考察

吸附動(dòng)力學(xué)研究有助于在實(shí)際工業(yè)化生產(chǎn)中優(yōu)化工藝參數(shù)及選擇加工設(shè)備［15］，本研究對(duì)HPD-826 大孔樹(shù)脂純化CSF 進(jìn)行吸附動(dòng)力學(xué)考察。精密稱取2.0 g HPD-826 大孔樹(shù)脂，進(jìn)行靜態(tài)吸附，在不同吸附時(shí)間下取樣，分別測(cè)定CSF質(zhì)量濃度，計(jì)算吸附量。用準(zhǔn)一級(jí)、準(zhǔn)二級(jí)動(dòng)力學(xué)模型和顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型［16］對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，結(jié)果見(jiàn)圖5、表7。

圖5（A）所示，吸附量在120 min 前隨時(shí)間延長(zhǎng)而顯著增加，之后趨于緩慢，在270 min 達(dá)到平衡。由表8 可知，準(zhǔn)一級(jí)吸附動(dòng)力學(xué)模型方程計(jì)算得到的理論平衡吸附量（90.55 mg/g）與試驗(yàn)值（91.72 mg/g）更為相近，可能較好地描述CSF 靜態(tài)吸附過(guò)程。圖5（B）顯示，顆粒內(nèi)擴(kuò)散模型擬合圖為不經(jīng)過(guò)原點(diǎn)的非線性三段式圖，說(shuō)明吸附的過(guò)程是一個(gè)連續(xù)性的分段過(guò)程，由液膜擴(kuò)散和顆粒內(nèi)擴(kuò)散共同控制［17］。

圖5 吸附動(dòng)力學(xué)擬合曲線Fig. 5 Adsorption kinetics fitting curve

表8 CSF吸附動(dòng)力學(xué)參數(shù)Tab. 8 Adsorption kinetic parameters of total flavonoids

2.3.2 樹(shù)脂的吸附等溫線考察

圖6 建立了Langmuir 和Freundlich 模型擬合曲線，從表9 可看出，Langmuir 模型擬合的回歸方程相關(guān)系數(shù)總體高于Freundlich 模型，說(shuō)明Langmuir 吸附等溫線更能準(zhǔn)確反映CSF 在HPD-826 型樹(shù)脂上的吸附過(guò)程，并表明吸附是單分子層吸附，所有吸附位點(diǎn)均勻且具有相同的能量，被吸附分子之間沒(méi)有相互作用［18］。

表9 CSF吸附等溫線參數(shù)Tab. 9 Adsorption isotherm parameters of CSF

圖6 吸附等溫線模型擬合曲線Fig. 6 Fitting curve of adsorption isotherm model

2.3.3 純化工藝參數(shù)優(yōu)選

2.3.3.1 上樣溶液pH對(duì)靜態(tài)吸附的影響

精密稱定8份2 g預(yù)處理好的HPD-826樹(shù)脂，依次加入質(zhì)量濃度為7.63 mg/mL，pH 值為2、3、4、5、6、7、8、9 的CSF 提取液25 mL，置于振蕩器中振蕩12 h，測(cè)定吸附液中的CSF 質(zhì)量濃度，結(jié)果見(jiàn)表10?？芍?，當(dāng)pH≤7 時(shí)，對(duì)吸附率無(wú)顯著影響；pH＞7 時(shí)，吸附率和解吸率均呈現(xiàn)下降趨勢(shì)；在pH=5 時(shí)，有最大吸附率和解吸率，故pH值確定為5。

表10 pH值對(duì)CSF吸附與解吸的影響Tab. 10 Effect of pH on the adsorption and desorption of CSF

2.3.3.2 泄露曲線的繪制

在徑高比為1∶6、上樣濃度為7.63 mg/mL、pH 為5、體積流量為1.0 mL/min 的條件下，進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)，分段收集流出液，10 mL/份，計(jì)算CSF 含量，并繪制泄露曲線，尋找泄漏點(diǎn)［19］。結(jié)果見(jiàn)圖7，從第2份收集液開(kāi)始，CSF 開(kāi)始明顯泄露；在第15 份流出液中，CSF 質(zhì)量濃度達(dá)到了上樣質(zhì)量濃度的1/10（泄漏點(diǎn)），因此選擇上樣體積為150 mL。

圖7 泄漏曲線Fig. 7 Leakage curve

2.3.3.3 上樣液濃度對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響

在徑高比為1∶6、pH為5、體積流量為1.0 mL/min的條件下，分別配置上樣濃度為3.71、7.63、10.00、15.98、21.11、28.43 mg/mL 的上樣液各150 mL，分別收集流出液，計(jì)算不同濃度條件下的吸附率和吸附量，確定最佳上樣濃度，結(jié)果見(jiàn)圖8，發(fā)現(xiàn)吸附率隨著上樣濃度的加大而減小，吸附量隨著上樣濃度的增大先增大后減小，在上樣濃度為15.98 mg/mL達(dá)到最大值。由于濃度太低致使樹(shù)脂沒(méi)有得到充分利用，且延長(zhǎng)純化周期；若濃度太高則致使CSF 溶液沒(méi)有得到充分吸附，還會(huì)造成樹(shù)脂空間結(jié)構(gòu)的堵塞，不易洗脫，故選擇上樣質(zhì)量濃度為15.98 mg/mL。

圖8 上樣濃度對(duì)吸附效果的影響Fig. 8 Effect of sample concentration on adsorption effect

2.3.3.4 上樣體積流量對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響

設(shè)置徑高比為1∶6，配置上樣濃度為15.98 mg/mL、pH 為5 的4 份CSF 溶液各150 mL，分別以1.0、2.0、3.0、4.0 mL/min的體積流量通過(guò)樹(shù)脂柱，分別收集流出液，計(jì)算吸附率，確定最佳上樣體積流量。結(jié)果見(jiàn)圖9，隨著上樣體積流量的增加，吸附率呈顯著下降趨勢(shì)，可能是流速過(guò)快導(dǎo)致CSF 與樹(shù)脂接觸不充分，因此選擇上樣體積流量為1 mL/min。

圖9 上樣體積流量對(duì)吸附效果的影響Fig. 9 Effect of sample volume flow rate on adsorption influence

2.3.3.5 徑高比對(duì)動(dòng)態(tài)吸附的影響

設(shè)置徑高比為1∶6、1∶8、1∶10、1∶12，將15.98 mg/mL、pH 為5 的CSF 溶 液150 mL 分 別 以1.0 mL/min 的 體積流量通過(guò)樹(shù)脂柱，分別收集流出液，計(jì)算不同徑高比下的吸附率和吸附量，確定最佳徑高比。結(jié)果見(jiàn)圖10，隨著徑高比增大，吸附率呈顯著增長(zhǎng)趨勢(shì)，而吸附量呈顯著下降趨勢(shì)。當(dāng)徑高比為1∶12時(shí)，雖有最大吸附率，但由于樹(shù)脂床層過(guò)高，上樣液穿透能力較差，耗時(shí)長(zhǎng)延長(zhǎng)生產(chǎn)周期，樹(shù)脂容易堵塞，且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，待吸附完全后靠近吸附柱下部的部分樹(shù)脂仍為乳白色，表明樹(shù)脂沒(méi)有得到充分利用。因此，本研究選擇徑高比為1∶10（即1 g 樹(shù)脂可較好的吸附7.69 mL CSF溶液）。

圖10 徑高比對(duì)吸附效果的影響Fig. 10 Effect of diameter-height ratio on adsorption influence

2.3.3.6 水洗脫曲線

結(jié)果見(jiàn)圖11，當(dāng)水洗用量達(dá)到160 mL 時(shí)，大部分未被吸附的CSF 及雜質(zhì)已經(jīng)被洗脫下來(lái)；160 mL之后，水洗脫曲線基本趨于平衡，故本研究選擇水洗用量為160 mL。

圖11 水洗脫曲線圖Fig. 11 Water elution curve

2.3.3.7 洗脫溶劑對(duì)靜態(tài)解吸的影響

分別稱取10 份2 g 達(dá)到吸附平衡的樹(shù)脂置于錐形瓶中，依次加入濃度為10 %～100 %乙醇溶液25 mL，置于振蕩器上振蕩24 h，使之達(dá)到解吸平衡，計(jì)算解吸率。結(jié)果見(jiàn)圖12，當(dāng)洗脫液濃度為50%時(shí)解吸率最高，為97.53%。再繼續(xù)升高洗脫液濃度，解吸率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，可能是濃度過(guò)高破壞了黃酮類化合物結(jié)構(gòu)［20］。

圖12 洗脫液濃度對(duì)CSF解吸效果的影響Fig. 12 Effect of eluent concentration on desorption of CSF

2.3.3.8 溶劑洗脫曲線

用50%乙醇對(duì)吸附飽和的HPD-826 樹(shù)脂進(jìn)行解吸，每10 mL 收集1 份，期間洗脫液顏色變化為：無(wú)色（10 mL）→黃色（20 mL）→酒紅色（30 ～40 mL）→黃色（50 ～70 mL）→淺黃色（80 ～120 mL）→無(wú)色（130 ～200 mL）。測(cè)量A513，計(jì)算CSF濃度，結(jié)果見(jiàn)圖13，隨著溶劑洗脫用量的增加，CSF 濃度先增加，繼而降低，當(dāng)洗脫溶劑達(dá)到120 mL 時(shí)溶劑洗脫曲線趨于平衡，綜合考慮時(shí)間成本，本研究選擇洗脫溶劑用量為120 mL。

圖13 溶劑洗脫曲線圖Fig. 13 Solvent elution curve

2.3.3.9 洗脫流速對(duì)動(dòng)態(tài)解吸的影響

結(jié)果見(jiàn)圖14，隨著洗脫流速的逐漸增大，解吸率先升高后減低，在2 mL/min 時(shí)解吸效率最高?？赡茉?yàn)榱魉龠^(guò)快導(dǎo)致50%的乙醇與CSF 溶液在HPD-826 樹(shù)脂上的吸附位點(diǎn)接觸時(shí)間短，不足以將CSF全部解吸，因此本研究選擇洗脫流速為2 mL/min。

圖14 洗脫流速對(duì)解吸效果的影響Fig. 14 The influence of eluent rate on desorrtion properby

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn)

按照最佳工藝條件，對(duì)CSF 進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附與解吸，將洗脫后的溶液進(jìn)行旋蒸、真空干燥，得到純化后的CSF，對(duì)其進(jìn)行純度檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表11?？芍?，經(jīng)最佳工藝純化后，CSF 純度由17.02%提高到88.86%；3次試驗(yàn)RSD值為0.95%，符合要求，表明本試驗(yàn)方案可行。

表11 CSF純化前后純度對(duì)比Tab. 11 ComparisonofpurityofCSFbeforeandafterpurification

3 結(jié)論

大孔樹(shù)脂在黃酮類活性部位的分離純化研究中具有良好的吸附性和反復(fù)利用等特點(diǎn)，通過(guò)物理作用將黃酮類物質(zhì)吸附在自身孔隙中，從而達(dá)到有效分離純化的目的［21］。本研究首先對(duì)提取溶劑和提取方法進(jìn)行考察，在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步進(jìn)行單因素試驗(yàn)和L9（34）正交試驗(yàn)，旨在選出最佳提取工藝，最終得出以65%乙醇作溶劑，熱回流提取120 min，料液比1∶12 g/mL，提取溫度80℃，CSF 提取量為19.95%。所選用于純化工藝的HPD-826 樹(shù)脂是一種新型的氫鍵樹(shù)脂，多用于多酚類、黃酮類、有機(jī)酸類等多羥基成分的提取分離，其吸附動(dòng)力學(xué)符合準(zhǔn)一級(jí)吸附動(dòng)力學(xué)模型，吸附等溫線符合Langmuir 吸附等溫線模型，屬于單分子層吸附。本研究還對(duì)純化工藝參數(shù)進(jìn)行了系統(tǒng)考察，如上樣溶液pH、上樣液濃度、上樣體積流量、徑高比、水洗脫用量、洗脫溶劑濃度、洗脫流速等，使其純度較未純化前提高了5.22 倍，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果顯示，工藝穩(wěn)定可行，表明大孔樹(shù)脂HPD-826 用于CSF 純化效果較好，為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用CSF提供了有力支持。