超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定化妝品中莫西沙星等喹諾酮類禁用物質(zhì)*

黨昊星， 曹海榮， 李曉宇

(1.上?；ぱ芯吭河邢薰?上海 200062；2.上海應(yīng)用技術(shù)大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院 上海 201418)

0 前言

喹諾酮類藥物指的是人工合成的含4-喹諾酮結(jié)構(gòu)的抗菌藥，具有抗菌譜廣、口服方便、價(jià)格低廉等特點(diǎn)，常見的喹諾酮類藥物有莫西沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、諾氟沙星等。由于喹諾酮類成本低，且具有一定的祛痘、除螨效果，生產(chǎn)廠商會(huì)在很多化妝品中添加一些喹諾酮類組分[1]。消費(fèi)者如果錯(cuò)用、誤用或過量使用含有喹諾酮類藥物的化妝品，很有可能引起過敏反應(yīng)[2]，嚴(yán)重時(shí)甚至有致癌的可能[3]。有些喹諾酮類藥物還被發(fā)現(xiàn)能使致病菌產(chǎn)生耐藥性[4]，不利于臨床治療。因此，我國已在《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》(2015版)中將喹諾酮類藥物列為化妝品禁用組分[5]，研究有關(guān)化妝品中多種喹諾酮類藥物同時(shí)測(cè)定的方法非常必要。

目前，檢測(cè)化妝品中喹諾酮類藥物的常用方法有電化學(xué)法[6]、毛細(xì)管電泳技術(shù)[7]、表面增強(qiáng)拉曼技術(shù)[8]、高效液相色譜法[9-11]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[12-14]等。文獻(xiàn)[1，15-16]報(bào)道用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法或反相液相色譜法檢測(cè)化妝品中多種抗生素，檢測(cè)一個(gè)樣品所用時(shí)間超過20 min；文獻(xiàn)[3,10,12,17]報(bào)道的方法僅針對(duì)家禽畜肉中一種或多種喹諾酮類物質(zhì)的檢測(cè)。由于上述檢測(cè)方法普遍存在操作煩瑣、耗時(shí)較長、適用范圍窄等不足，因此需要建立一種簡(jiǎn)便、快速測(cè)定化妝品中多種喹諾酮類物質(zhì)的方法。本文基于超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，提出了一種同時(shí)測(cè)定化妝品中莫西沙星等10種喹諾酮類藥物的分析方法，其中液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析方法選擇性強(qiáng)、分辨率高、準(zhǔn)確性好、靈敏度高[17]，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)10種喹諾酮類組分的有效分離及定性定量分析，并可應(yīng)用于化妝品檢測(cè)。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

ACQUITY UPLC?H-CLASS超高效液相色譜-Xevo TQD MS三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀,美國Waters公司；Simplicity超純水純化系統(tǒng)，美國Millipore公司；KUDOS科導(dǎo)超聲波清洗器，上?？茖?dǎo)超聲儀器公司；AL204-IC型分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

莫西沙星(98.00%，質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同)、雙氟沙星(96.18%)、沙拉沙星(85.82%)、恩諾沙星(99.90%)、環(huán)丙沙星(92.31%)、培氟沙星(98.60%)、諾氟沙星(97.29%)、氧氟沙星(99.31%)、氟羅沙星(98.48%)、依諾沙星(95.84%)標(biāo)準(zhǔn)品，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；甲醇、甲酸，色譜純，德國CNW Technologies。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取莫西沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg(精確至0.001 g)置于50 mL燒杯中，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中，稀釋至刻度并搖勻，配制成100 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取莫西沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、諾氟沙星標(biāo)準(zhǔn)品各10 mg(精確至0.001 g)分別置于不同的50 mL燒杯中，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中定容，搖勻，配制成100 mg/L的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 色譜條件

ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱(2.1 mm×50 mm，1.7 μm)，柱溫為25 ℃，進(jìn)樣量為5 μL；流動(dòng)相中有機(jī)相選用甲醇(A)，水相為0.2%(體積分?jǐn)?shù)，下同)甲酸溶液(B)，流量為0.3 mL/min，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

電噴霧正離子源(ESI+)模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式，干燥氣溫度為600 ℃，干燥氣流量為900 L/h，錐孔流量為50 L/h，毛細(xì)管電壓為0.50 kV。

1.3 樣品前處理

稱取化妝水空白樣品1 g(精確至0.001 g)置于50 mL比色管中，加入2 mL飽和氯化鈉溶液和2%甲酸溶液30 mL，超聲5 min，加入甲醇10 mL，超聲振蕩15 min，靜置3 min后，將上層清液進(jìn)行過濾，得到的濾液作為待測(cè)樣品。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將已制備的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液經(jīng)蠕動(dòng)泵注入到離子源中進(jìn)行質(zhì)譜分析后，得到目標(biāo)物的母離子質(zhì)荷比，通過對(duì)比正、負(fù)離子模式下的響應(yīng)值發(fā)現(xiàn)，在ESI+模式下，喹諾酮類物質(zhì)均有較強(qiáng)的分子-離子峰，因此試驗(yàn)選用電噴霧正離子源模式。

采用ESI+進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，通過調(diào)節(jié)碰撞能量(CE)和電壓參數(shù)，選擇并確定響應(yīng)較好的定量離子和定性離子對(duì)，使待測(cè)物的離子化效率達(dá)到最優(yōu)，同時(shí)確定最優(yōu)的質(zhì)譜條件。10種喹諾酮類分析物的質(zhì)譜參數(shù)見表2。

表2 10種喹諾酮類分析物的質(zhì)譜參數(shù)

2.2 流動(dòng)相的選擇

首先制備乙腈-0.2%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液、甲醇-0.1%甲酸溶液和甲醇-0.2%甲酸溶液等混合溶液，分別作為流動(dòng)相；將10種喹諾酮類分析物溶于甲醇和乙腈，靜置搖勻后經(jīng)色譜柱進(jìn)行分析。結(jié)果表明，選用甲醇-0.2%甲酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)，峰形較明顯，各組分的分離度較高。因此，試驗(yàn)選用甲醇-0.2%甲酸溶液作為流動(dòng)相[18]。

考慮到氟羅沙星、培氟沙星等10種喹諾酮類分析物相互之間存在較為明顯的極性差異，選用梯度洗脫程序。在梯度洗脫條件下，10種喹諾酮類分析物的MRM色譜圖見圖1。

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性關(guān)系、檢出限和定量限

(1)線性關(guān)系

移取10種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋后得到5、10、20、50、80、100 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。將混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液按儀器工作條件分別進(jìn)樣，以混合標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的質(zhì)量濃度在5～100 μg/L內(nèi)與峰面積呈線性相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.998 2～0.999 8。

(2)檢出限和定量限

記錄最低質(zhì)量濃度待測(cè)樣品的信號(hào)和空白樣品信號(hào)(高度)的比值，以3倍信噪比和10倍信噪比分別計(jì)算檢出限LOD和定量限LOQ[19]，計(jì)算公式見式(1)和式(2)：

(1)

(2)

式中：Cmin——標(biāo)準(zhǔn)曲線中最低質(zhì)量濃度；

S/N——信噪比。

計(jì)算得10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的檢出限為0.002 53～0.025 5 mg/kg，定量限為0.008 44～0.085 2 mg/kg。

10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限見表3。

表3 10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限

2.3.2 加標(biāo)回收率

稱取1 g待測(cè)樣品，加入至混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中，按試驗(yàn)方法處理后得到質(zhì)量濃度分別為0、40、60、80 μg/L的4個(gè)不同樣品；采用選定的儀器工作條件，每個(gè)樣品進(jìn)行3組平行測(cè)定，共測(cè)定12次，計(jì)算加標(biāo)樣品的回收率，計(jì)算公式見式(3)[20]：

(3)

式中：ρi——第i次測(cè)量的質(zhì)量濃度；

ρ0——待測(cè)樣品的質(zhì)量濃度；

ρs——實(shí)際加入的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的質(zhì)量濃度。

以加入40 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液為例，在加標(biāo)回收試驗(yàn)過程中，空白樣品的MRM色譜圖和加標(biāo)樣品的MRM色譜圖分別見圖2和圖3。

10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的加標(biāo)回收率(見表4)為100.00%～116.43%，說明試驗(yàn)方法準(zhǔn)確度較好。

表4 10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的加標(biāo)回收率

2.3.3 精密度

稱取1 g待測(cè)樣品，加入至混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液中，得到質(zhì)量濃度為40、60、80 μg/L的3個(gè)試樣；在選定的儀器工作條件下，每個(gè)樣品進(jìn)行6次平行測(cè)定，計(jì)算測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)，計(jì)算公式見式(4)和式(5)[20]：

(4)

(5)

式中：S——質(zhì)量濃度測(cè)量值的標(biāo)準(zhǔn)偏差；

ρi——第i次測(cè)定的質(zhì)量濃度；

n——測(cè)定次數(shù)。

試驗(yàn)測(cè)得的10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的RSD(見表5)為1.77%～5.90%(n=6)，小于15%，表明試驗(yàn)方法的精密度較好。

3 結(jié)語

本文提出了一種同時(shí)測(cè)定化妝品中莫西沙星、雙氟沙星、沙拉沙星、氟羅沙星、氧氟沙星、恩諾沙星、培氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、諾氟沙星等10種喹諾酮類禁用物質(zhì)的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。方法簡(jiǎn)便快捷、耗時(shí)較短，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)為0.998 2～0.999 8，10種物質(zhì)的檢出限為0.002 53～0.025 5 mg/kg，定量限為0.008 44～0.085 2 mg/kg，加標(biāo)回收率為100.00%～116.43%，精密度平均值小于15%，表明所提出方法的靈敏度較高、準(zhǔn)確性較好、可重復(fù)性較好，可快速測(cè)定化妝品中多種喹諾酮類藥物，以期為化妝品中禁用物質(zhì)的檢測(cè)提供技術(shù)支持。