JMJD2B和HPIP在宮頸癌中的表達(dá)及其與臨床預(yù)后的關(guān)系

苗曉紅

(唐山市婦幼保健院婦科,河北省唐山市 063000)

宮頸癌是常見婦科惡性腫瘤，近年來(lái)其發(fā)病率增長(zhǎng)并趨于年輕化，如何尋找宮頸癌發(fā)病的分子學(xué)基礎(chǔ)，尋找潛在的靶點(diǎn)，成為目前重要課題[1]。組蛋白去甲基化酶JMJD2B是缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)的下游靶點(diǎn)，可通過(guò)催化Jumonji-C結(jié)構(gòu)域，來(lái)減少對(duì)單甲基化狀態(tài)的兩種修飾，從而促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活[2]。研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的JMJD2B在腫瘤(肝癌、結(jié)腸癌)細(xì)胞增殖、侵襲與遷移中發(fā)揮著重要作用，且與預(yù)后明顯相關(guān)[3]。造血前B細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白(hematopoietic pre-B-cell leukemia transcription factor interactingprotein,HPIP)參與器官形成和腫瘤發(fā)生[4]。但目前對(duì)JMJD2B和HPIP在宮頸癌機(jī)制中作用的報(bào)道較少，本文研究JMJD2B和HPIP在宮頸癌組織中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系，為臨床提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

搜集本院2015年1月—2018年1月97例宮頸癌患者的臨床資料?；颊吣挲g(45.50±6.14)歲；鱗癌72例，腺癌25例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟標(biāo)準(zhǔn)(FIGO)臨床分期[5]ⅠB1期45例，ⅠB2期20例，ⅡA期22例，ⅡB期10例；低分化20例，中分化35例，高分化42例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)確診[6]；②年齡25～80歲；③術(shù)前均未接受放化療；④臨床資料完整；⑤無(wú)放療禁忌證。排除標(biāo)準(zhǔn)：①器質(zhì)性疾??；②合并其他惡性腫瘤；③代謝異常性疾??；④嚴(yán)重生物制劑過(guò)敏史；⑤骨髓功能異常；⑥既往腫瘤病史。

1.2 免疫組化檢測(cè)JMJD2B、HPIP表達(dá)

宮頸癌組織和癌旁組織石蠟切片，68 ℃烘烤固片20 min，然后常規(guī)二甲苯脫蠟梯度乙醇脫水后阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，3%H2O2，37 ℃孵育10 min，PBS沖洗3次，5 min/次，并置0.01 mmol/L枸櫞酸緩沖液(pH 6.0)修復(fù)，PBS沖洗3次，每次5 min，然后滴加正常山羊血清封閉液室溫20 min甩去液體，無(wú)需洗片，4 ℃過(guò)夜后37 ℃復(fù)溫30 min，PBS沖洗3次，5 min/次；滴加二抗37 ℃孵育30 min，PBS沖洗3次，5 min/次；一抗、二抗孵育后PBS洗片可適當(dāng)延長(zhǎng)，洗去未結(jié)合的二抗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水干燥，中性樹膠封片烤干，顯微鏡下鏡檢。

1.3 染色陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)

JMJD2B、HPIP陽(yáng)性表達(dá)在腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)呈棕黃色顆粒。光鏡調(diào)節(jié)高倍視野查看組織細(xì)胞染色，計(jì)數(shù)著色細(xì)胞數(shù)目和著色強(qiáng)度。采用半定量評(píng)分法[7]，陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)弱不著色0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；陽(yáng)性細(xì)胞百分比1%～10%為1分，11%～50%為2分；51%～80%為3分；81%～100%為4分。兩者乘積0分為(-)，1～4分為(+)，5～8分為(++)，9～12分為(+++)。最終結(jié)果(-)為陰性，(+)～(+++)為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0和GraphPad Prism6軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料采取ANOVA分析或t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料及分級(jí)資料采用卡方檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)，生存分析采用Kaplan-Meier生存曲線法、Log-rank檢驗(yàn)及Cox回歸分析，ROC曲線下面積評(píng)價(jià)JMJD2B、HPIP聯(lián)合預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 癌組織和癌旁組織JMJD2B、HPIP表達(dá)的比較

JMJD2B、HPIP在宮頸癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為67.01%(65/97)和60.82%(59/97)，JMJD2B、HPIP在癌旁組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為5.15%和3.09%，JMJD2B、HPIP陽(yáng)性表達(dá)率宮頸癌組織高于癌旁組織(P<0.05)。

2.2 JMJD2B、HPIP表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

JMJD2B、HPIP表達(dá)與宮頸癌腫瘤直徑、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度有關(guān)(P<0.05)，與年齡、病理類型及腫瘤分期無(wú)關(guān)(P>0.05；表1)。

表1 JMJD2B、HPIP表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理特征的關(guān)系 單位：例(%)

2.3 宮頸癌預(yù)后影響因素的Cox回歸分析

所有患者均隨訪至2021年1月，平均隨訪(20.16±2.43)個(gè)月，隨訪期間無(wú)失訪，以死亡為隨訪終點(diǎn)事件，3年無(wú)進(jìn)展生存率為72.16%(76/97)。將臨床病理資料進(jìn)行Cox回歸和多因素分析顯示，腫瘤直徑、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、JMJD2B表達(dá)、HPIP表達(dá)為影響預(yù)后的獨(dú)立因素(P<0.05；表2)。

表2 宮頸癌患者預(yù)后的影響因素分析

2.4 JMJD2B、HPIP表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系

JMJD2B、HPIP表達(dá)陽(yáng)性患者3年生存率和中位生存期均低于表達(dá)陰性患者(P<0.05；表3)。

表3 JMJD2B、HPIP表達(dá)水平與預(yù)后的關(guān)系

2.5 JMJD2B、HPIP表達(dá)預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的效能

ROC曲線分析顯示，JMJD2B、HPIP聯(lián)合預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的靈敏度和AUC均高于單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05；表4和圖1)。

表4 JMJD2B、HPIP表達(dá)預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的效能

圖1 JMJD2B、HPIP表達(dá)預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的ROC曲線

3 討 論

宮頸癌是女性常見惡性腫瘤，中國(guó)宮頸癌發(fā)病率每年遞增4.1%，死亡率每年遞增5.9%，嚴(yán)重危害女性健康[8]，其發(fā)病機(jī)制尚不明確。相關(guān)報(bào)道顯示，宮頸癌是多種基因、蛋白共同作用的結(jié)果[9]，有研究表明，JMJD2B、HPIP與腫瘤惡性程度有關(guān)[10-11]，但其與宮頸癌相關(guān)的報(bào)道較少，因此本研究檢測(cè)JMJD2B和HPIP在宮頸癌組織及癌旁組織中表達(dá)情況，并分析其與宮頸癌臨床病理特征及預(yù)后關(guān)系，從而為宮頸癌診斷及治療提供參考。

HIF-1α在多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，是正常組織和癌癥組織中缺氧反應(yīng)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，并且作為潛在的抗癌藥物靶點(diǎn)已經(jīng)引起越來(lái)越多的關(guān)注。HIF-1α通過(guò)促進(jìn)血管生成、上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性等促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移，其在宮頸癌中呈高表達(dá)并與臨床預(yù)后相關(guān)[12]。而JMJD2B是HIF-1α的下游靶點(diǎn)，其通過(guò)催化Jumonji-C結(jié)構(gòu)域，來(lái)減少對(duì)單甲基化狀態(tài)的修飾，從而促進(jìn)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄激活。有研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的JMJD2B在腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲與遷移中發(fā)揮著重要作用[13]。HPIP是一種微管結(jié)合蛋白，HPIP在腫瘤的發(fā)生、遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用[14]。有研究證明，HPIP可通過(guò)與雌激素受體(estrogen receptor，ER)相互作用促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖，而ER在宮頸癌中高表達(dá)并與臨床預(yù)后關(guān)聯(lián)[15]。由此可見，HPIP蛋白與腫瘤密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，JMJD2B、HPIP在癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高于癌旁組織，與徐紅苗等[16]研究相符，說(shuō)明JMJD2B、HPIP在宮頸癌中可能發(fā)揮促癌基因作用。本研究顯示，JMJD2B、HPIP表達(dá)與腫瘤直徑、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)程度有關(guān)；與年齡、病理類型及腫瘤分期無(wú)關(guān)，提示隨著JMJD2B、HPIP表達(dá)的升高，宮頸癌病情進(jìn)展快，惡性程度越高，可進(jìn)一步促進(jìn)癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。同時(shí)本研究對(duì)患者進(jìn)行3年隨訪發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑、腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度、JMJD2B表達(dá)、HPIP表達(dá)為影響患者預(yù)后的獨(dú)立因素，說(shuō)明JMJD2B、HPIP高表達(dá)的宮頸癌患者惡性程度高、分化差，且腫瘤易發(fā)生轉(zhuǎn)移及浸潤(rùn)。且JMJD2B、HPIP陽(yáng)性表達(dá)患者3年生存率和中位生存期均低于陰性表達(dá)患者，提示JMJD2B、HPIP表達(dá)與宮頸癌預(yù)后相關(guān)，且高表達(dá)者預(yù)后不良。此外，ROC曲線分析顯示，JMJD2B、HPIP聯(lián)合預(yù)測(cè)宮頸癌預(yù)后的靈敏度為92.00%、AUC為0.845，均高于單獨(dú)檢測(cè)，進(jìn)一步證實(shí)了JMJD2B、HPIP表達(dá)對(duì)宮頸癌具有較好預(yù)測(cè)價(jià)值，且聯(lián)合預(yù)測(cè)價(jià)值更高，因此臨床應(yīng)監(jiān)測(cè)其水平，并進(jìn)行針對(duì)性干預(yù)，以改善預(yù)后。但本研究納入樣本數(shù)較少，且為回顧性研究，下一步將擴(kuò)大樣本量進(jìn)行前瞻性研究。

綜上所述，JMJD2B、HPIP表達(dá)可能是推測(cè)宮頸癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移程度及評(píng)價(jià)預(yù)后的重要指標(biāo)，因此在治療時(shí)建議分析JMJD2B、HPIP表達(dá)，可根據(jù)陽(yáng)性表達(dá)情況采取相應(yīng)措施，以提高臨床治療效果。