有氧運(yùn)動(dòng)改善肥胖易感大鼠食物獎(jiǎng)賞：伏隔核CP-AMPARs介導(dǎo)的調(diào)控機(jī)制研究

魏龍威，牛亞凱，王振民，劉 陽(yáng),2，李 娟，陳 巍,2*

（1.河北師范大學(xué) 體育學(xué)院， 河北 石家莊 050024；2.河北省人體運(yùn)動(dòng)生物信息測(cè)評(píng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050024）

肥胖與過(guò)度進(jìn)食及體力活動(dòng)不足有關(guān)（陳巍等，2018；魏龍威 等，2020；Ferrario et al.，2016）。過(guò)度進(jìn)食通常由超越能量穩(wěn)態(tài)信號(hào)的獎(jiǎng)賞環(huán)路所介導(dǎo)，該環(huán)路激活可增強(qiáng)進(jìn)食動(dòng)機(jī)（魏龍威 等，2020；Ferrario et al.，2016）。其中，來(lái)自腹側(cè)被蓋區(qū)（ventral tegmental area，VTA）的多巴胺（dopamine，DA）以及來(lái)自前額葉皮層和杏仁核的谷氨酸（glutamate，Glu）投射對(duì)此過(guò)程具有重要影響。上述神經(jīng)信息匯聚到腹側(cè)紋狀體γ-氨基丁酸能的中等棘狀神經(jīng)元（medium spiny neurons，MSNs）（Brown et al.，2017；Fer?rario et al.，2016）進(jìn)而產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。Glu是MSNs的主要興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異唑丙酸型受體（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionicaci re?ceptors，AMPARs）作為Glu的快速配體門(mén)控陽(yáng)離子通道對(duì)紋狀體的突觸可塑性具有關(guān)鍵作用。肥胖易感群體處于同樣環(huán)境中具有更高的肥胖風(fēng)險(xiǎn)，伏隔核對(duì)食物獎(jiǎng)賞信息加工異?？赡苁欠逝诛L(fēng)險(xiǎn)增加的重要原因之一（陳巍等，2018；Stice et al.，2010）。例如，肥胖易感動(dòng)物伏隔核MSNs表現(xiàn)為過(guò)度興奮，引起皮層-基底神經(jīng)節(jié)獎(jiǎng)賞信息網(wǎng)絡(luò)改變，進(jìn)食動(dòng)機(jī)增強(qiáng)，這可能與伏隔核Glu傳遞增強(qiáng)有關(guān)（Oginsky et al.，2016，2019）。因此，肥胖也被視為一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙（Souza-Fagundes et al.，2015），這可能包括單類(lèi)神經(jīng)元或以局部病理性振蕩活動(dòng)為特征的異常神經(jīng)元群活動(dòng)。局部腦區(qū)振蕩活動(dòng)會(huì)影響?yīng)勝p信號(hào)處理（Brown et al.，2011），伏隔核 AMPARs功能對(duì)神經(jīng)元及其局部群活動(dòng)具有重要的調(diào)控作用。

運(yùn)動(dòng)可減少肥胖嚙齒類(lèi)動(dòng)物的過(guò)度進(jìn)食行為，緩解其體重增長(zhǎng)（Chen et al.，2019；Lee et al.，2020）。研究表明，運(yùn)動(dòng)可改善PD動(dòng)物運(yùn)動(dòng)皮層-紋狀體β振蕩相干系數(shù)和相位同步指數(shù)，并促進(jìn)其自主活動(dòng)（時(shí)凱旋等，2020）；有氧運(yùn)動(dòng)可調(diào)節(jié)阿爾茲海默癥大鼠海馬區(qū)θ頻段異常振蕩活動(dòng)改善記憶能力及認(rèn)知行為（Mehak et al.，2022）。鑒于AMPARs與神經(jīng)元及其局部群活動(dòng)的關(guān)系，推測(cè)其可能參與了運(yùn)動(dòng)改善肥胖相關(guān)過(guò)度進(jìn)食行為。伏隔核作為誘導(dǎo)獎(jiǎng)賞和成癮的關(guān)鍵腦區(qū)，其介導(dǎo)肥胖發(fā)生及其運(yùn)動(dòng)干預(yù)的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)機(jī)制尚未完全闡明。Ca可滲透性AM?PA 受體（Ca-permeable AMPA receptors，CP-AMPARs）在肥胖引起伏隔核突觸可塑性改變中的作用已有報(bào)道（Alonso-Caraballo et al.，2021），但其如何調(diào)節(jié)進(jìn)食行為以及是否參與了有氧運(yùn)動(dòng)防治肥胖的過(guò)程，仍未取得一致認(rèn)識(shí)。本研究利用行為學(xué)、在體電生理學(xué)、分子生物學(xué)等手段，探討伏隔核CP-AMPARs在有氧運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)肥胖易感大鼠食物獎(jiǎng)賞中的作用。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

采用高脂飲食方案篩選肥胖易感（obesity-prone，OP）與肥胖抵抗（obesity-resistant，OR）大鼠。雄性SD大鼠（152.5 g±4.8 g）購(gòu)于遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)股份有限公司［生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2015-0001］，鑒于術(shù)后恢復(fù)需要，采取單籠單只飼養(yǎng)，12 h/12 h晝夜循環(huán)，動(dòng)物房溫度22℃～26℃。實(shí)驗(yàn)程序嚴(yán)格遵守河北師范大學(xué)生物醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)要求（編號(hào)：2021LLSC050）。

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，隨機(jī)分為普通飲食組（C，n=15）和高脂飲食組（high food diet，HFD，n=45），分別給予普通飼料（3.31 kcal/g、12.5%脂肪、62.9%碳水化合物、24.6%蛋白質(zhì)）和高脂飼料（5.24 kcal/g、60%脂肪、20%碳水化合物、20%蛋白質(zhì)）。每3天稱(chēng)一次大鼠體質(zhì)量，每天計(jì)算熱量攝入。自由飲水、進(jìn)食8周后，以體質(zhì)量為標(biāo)準(zhǔn)篩選OP大鼠（HFD體質(zhì)量前1/3大鼠，n=15）和OR大鼠（HFD體質(zhì)量后1/3大鼠，n=15）。OP組隨機(jī)分為肥胖易感對(duì)照組（OPC）和肥胖易感運(yùn)動(dòng)組（OPE），OR組隨機(jī)分為肥胖抵抗對(duì)照組（ORC）和肥胖抵抗運(yùn)動(dòng)組（ORE），每組7只。

1.2 運(yùn)動(dòng)干預(yù)及給藥方案

運(yùn)動(dòng)方案參考H?ydal等和Wang等的研究（H?ydal et al.，2007；Wang et al.，2020）：采用電動(dòng)跑臺(tái)，零坡度，初始速度為14 m/min，每周增加2 m/min。訓(xùn)練時(shí)間50 min/天，其中熱身及整理活動(dòng)速度均為10 m/min×5 min，每周連續(xù)訓(xùn)練6天，持續(xù)6周。

藥物輸注方案：將CP-AMPARs選擇性拮抗劑NASPM（20 μg/0.5 μL）溶于含 6%DMSO 的 ACSF溶液。給藥時(shí)將導(dǎo)管與微量注射泵相連，以0.25 μL/min的速度進(jìn)行藥物輸注，輸注1 μL后注射內(nèi)管停留10 min，封閉防塵帽（Derman et al.，2018；Twomey et al.，2018）。

1.3 操作式條件反射進(jìn)食行為訓(xùn)練及測(cè)試

8周高脂飲食及分組后進(jìn)行操作式條件反射進(jìn)食行為訓(xùn)練，當(dāng)大鼠按下獎(jiǎng)賞側(cè)壓桿時(shí)，指示燈亮并釋放1粒適口性食物。按下非獎(jiǎng)賞側(cè)壓桿時(shí)，另一指示燈亮但不釋放食物。每次訓(xùn)練將兩側(cè)壓桿互換位置，訓(xùn)練及測(cè)試時(shí)間均為45 min/天，訓(xùn)練期第1～7天大鼠以固定按壓比率FR1（fixed ratio 1，F(xiàn)R1）自給食物，即主動(dòng)按壓獎(jiǎng)賞壓桿1次可獲1粒食物。第8～12天為固定按壓比率FR3（即主動(dòng)按壓獎(jiǎng)賞壓桿3次可獲1粒食物）、第13～17天為固定按壓比率FR5（即主動(dòng)按壓獎(jiǎng)賞壓桿5次可獲1粒食物）。第18、19天進(jìn)行漸進(jìn)比率（progressive ratio，PR）測(cè)試期（Brown et al.，2017）。PR 測(cè)試期漸進(jìn)比率=［5e］-5，其中R為已獲食物顆粒數(shù)加1（Alonso-Caraballo et al.，2019；Richardson et al.，1996；Sharma et al.，2012）。漸進(jìn)比率計(jì)劃為1、2、4、6、9、12、15、20、25、32、40、50、62、77、95、118、145、178、219、268、328、402、492、603……。以此得出PR測(cè)試期對(duì)應(yīng)的斷點(diǎn)（Breakpoint）值（兩次按壓間隔超過(guò)20 min或45 min測(cè)試總時(shí)到，判定終止）。訓(xùn)練期給予大鼠的食量為日常每日攝入量的70%～80%（Inbar et al.，2019；Oginsky et al.，2019）。運(yùn)動(dòng)干預(yù)6周及伏隔核CP-AMPARs拮抗劑給藥后，分別再次進(jìn)行測(cè)試。訓(xùn)練及測(cè)試時(shí)間段為19：00至次日07：00。

1.4 條件位置偏愛(ài)測(cè)試

條件位置偏愛(ài)（conditioned place preference，CPP）檢測(cè)箱（40 cm×70 cm×40 cm）包括3個(gè)不同背景隔室，其中，中間為白色，一側(cè)為灰色，另一側(cè)黑白相間。訓(xùn)練前，預(yù)先讓大鼠熟悉環(huán)境，大鼠在每個(gè)隔室停留時(shí)間無(wú)顯著差異。首先，給予大鼠1 g適口性食物以避免食物新穎性影響。訓(xùn)練中，隨機(jī)分配10 g適口性食物放置任一室內(nèi)，然后將大鼠放置中間室，自由活動(dòng)15 min，連續(xù)訓(xùn)練8天后正式測(cè)試（Tuplin et al.，2019）。當(dāng)大鼠全身2/3處于新室時(shí)，可判定其已從一室移至另一室。計(jì)算大鼠進(jìn)入每一室停留總時(shí)間，根據(jù)“［獎(jiǎng)賞區(qū)所處總時(shí)間/（獎(jiǎng)賞區(qū)所處總時(shí)間＋非獎(jiǎng)賞區(qū)所處總時(shí)間）］×100%”計(jì)算適口性食物誘導(dǎo)的條件位置偏愛(ài)度。運(yùn)動(dòng)干預(yù)后及伏隔核CPAMPARs拮抗劑給藥后分別再次測(cè)試。

1.5 給藥導(dǎo)管及電極植入手術(shù)

大鼠禁食24 h后，腹腔注射水合氯醛（0.35 mL/100 g）深度麻醉后固定于腦立體定位儀，下置保溫墊。使前后囟處同一水平，根據(jù)大鼠腦立體圖譜（Paxinos et al.，1997）以前囟為零點(diǎn)定位伏隔核，顱骨鉆打孔，將給藥套管固定于夾持器以0.2 mm/min推進(jìn)速度植入伏隔核上方（AP：1.4 mm，ML：-2.2 mm；DV：-5.6 mm）。將4個(gè)不銹鋼螺釘植入顱骨作為錨點(diǎn)，連接地線。選取伏隔核核部（AP：＋0.8～2.2 mm，ML：1.2～2.4 mm；DV：-6.5～-7.5 mm）植入16通道陣列電極（電極間距100 μm，2×8模式），監(jiān)測(cè)各通道神經(jīng)元活動(dòng)，出現(xiàn)3通道穩(wěn)定信號(hào)后，利用生物硅膠封口，牙科水泥固定，術(shù)后連續(xù)3天腹腔注射10萬(wàn)單位青霉素，然后按原方案繼續(xù)飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后采用尼氏染色確定導(dǎo)管及電極位置（圖1）。

圖1 大鼠給藥導(dǎo)管埋藏與電生理手術(shù)記錄位點(diǎn)示意圖Figure 1.Schematic Diagram of Recording Sites of Drug Administration Catheter Embedding and Electrophysiologic Operation in Rats

1.6 Western blotting

禁食24 h后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.40 mL/100 g）麻醉，生理鹽水主動(dòng)脈灌流，迅速取腦，置冰上分離腹側(cè)紋狀體。稱(chēng)取30 mg紋狀體組織，按100 mg/mL加入300 μL細(xì)胞裂解液，超聲粉碎，4℃靜置2 h，12 000 r/min離心20 min，取上清液。采用BCA法測(cè)蛋白濃度，加熱變性后，-80℃儲(chǔ)存。配制10%分離膠，4%濃縮膠，膠孔加蛋白樣品，恒壓80 V電泳50 min后，改為恒壓150 V繼續(xù)電泳120 min。然后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜，300 mA恒流2.5 h，轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h；TBST清洗3次，每次5 min，一抗4℃孵育過(guò)夜（abcam，GluA1 1∶2 000；GluA2 1∶5 000），TBST洗膜4次，分別為5 min、10 min、10 min、5 min，加入二抗室溫低速搖床孵育1.5 h，TBST洗膜5次，每次5 min，加同體積混合顯影液和定影液后蛋白條帶發(fā)光，F(xiàn)usion FX成像系統(tǒng)分析，以目標(biāo)條帶與β-actin的積分光密度（IOD）比值表示相對(duì)表達(dá)量。

1.7 免疫熒光實(shí)驗(yàn)

禁食24 h后，大鼠腹腔注射10%水合氯醛（0.40 mL/100 g）過(guò)度麻醉，生理鹽水主動(dòng)脈灌流，迅速取腦。脫水后OCT包埋，切片（4 μm），切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)緩沖液（pH=6.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)中火8 min至沸，?；? min，再轉(zhuǎn)中低火7 min，置PBS（pH=7.4）洗滌3次，每次5 min，后血清封閉，滴加BSA，封閉30 min。加一抗4℃孵育過(guò)夜（abcam，GluA1∶1 00，GluA2 1∶200），玻片置于PBS（pH=7.4）中搖床洗滌3次，每次5 min。加二抗，避光室溫孵育50 min。PBS（pH=7.4）洗滌3次，每次5 min，滴加DAPI染液，避光室溫孵育10 min，淬滅組織加自發(fā)熒光淬滅劑5 min，后沖洗10 min。甩干后抗熒光淬滅封片劑封片，鏡檢拍照，熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。使用Image J軟件定量分析免疫熒光結(jié)果，測(cè)得陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量。每一樣本均選取伏隔核核部區(qū)域，測(cè)量免疫陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。

1.8 電生理數(shù)據(jù)采集及分析

設(shè)置Spike帶通250 Hz，采樣頻率2 000 Hz，記錄電信號(hào)。單次信號(hào)采集時(shí)間20 min～30 min。分別采用Neu?roExplorer、Offline Sorter分析局部場(chǎng)電位（local field poten?tials，LFPs）、峰電位（spike）、Spike-LFPs相干性等。超過(guò)3∶1信噪比和自動(dòng)波形檢測(cè)功能設(shè)置閾值，利用主成分分析（principal component analysis，PCA）、K-均值（K-mean）及波谷波峰（valley-seeking）算法將每個(gè)通道波形分離成不同簇。根據(jù)神經(jīng)元波形、峰谷持續(xù)時(shí)間、峰峰間隔直方圖、峰峰持續(xù)時(shí)間、放電頻率及波形對(duì)稱(chēng)指數(shù)等識(shí)別Spike。P＜0.05為獨(dú)立聚類(lèi)間差異顯著（Geng et al.，2019；Wang et al.，2016）。

LFPs分為 5 個(gè)主頻段：delta（1～4 Hz）、theta（4～8 Hz）、alpha（8～12 Hz）、beta（12～30 Hz）和 gamma（30～80 Hz）。Spike-LFPs相干值顯示伏隔核Spike與LFPs間的關(guān)系（圖2），通過(guò)計(jì)算每一個(gè)通道LFPs和Spike譜函數(shù)Sx(f)和Sy(f)互譜Sxy(f)，可計(jì)算頻域相干函數(shù)Cxy(f)（劉迢迢 等，2011；Van Der Meer et al.，2009；）。

圖2 Spike與LFPs振蕩關(guān)系示意圖Figure 2.Diagram of Spike and LFPs Oscillation

計(jì)算一個(gè)固定窗口Spike-LFPs數(shù)據(jù)在頻域相干函數(shù)Cxy(f)，以步長(zhǎng)逐個(gè)移動(dòng)時(shí)間窗口，Cxy(f)為時(shí)間t的函數(shù)，記為：

式中：Sx(f，t)、Sy(f，t)、Sxy(f，t)為一通道同時(shí)記錄不同模態(tài)信號(hào)LFPs和Spike的Multitaper頻譜和互譜；Cxy(f，t)為2者在頻率f、時(shí)間t時(shí)相干值，表示同一通道LFPs和Spike在頻率域中同步程度及其隨時(shí)間變化相干值，相干值在0和1之間變化，0表示兩個(gè)信號(hào)在該頻域無(wú)關(guān)系，1表示完全相關(guān)。

1.9 統(tǒng)計(jì)分析

計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）表示，采用SPSS 24.0和GraphPad Prism 8軟件分析數(shù)據(jù)及制圖。不同組別大鼠體質(zhì)量、熱量攝入在不同時(shí)間的比較，采用重復(fù)測(cè)量雙因素方差分析（two-way repeated measures ANOVA）。運(yùn)動(dòng)干預(yù)前行為變化比較采用單因素方差分析（one-way ANOVA）。運(yùn)動(dòng)干預(yù)后各變量比較采用雙因素方差分析（two-way ANOVA）；以“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”為主因素，交互效應(yīng)顯著（P＜0.05）進(jìn)行簡(jiǎn)單效應(yīng)分析，不顯著（P＞0.05）比較主效應(yīng)；每個(gè)因素主效應(yīng)顯著（P＜0.05），表示存在組間差異。多重比較采用Turkey檢驗(yàn)，相關(guān)性采用Pear?son檢驗(yàn)，顯著水平設(shè)為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食后大鼠體質(zhì)量及熱量攝入變化

8周高脂飲食后，大鼠體質(zhì)量增加呈正態(tài)分布（圖3A）。按標(biāo)準(zhǔn)將HFD大鼠分為OP大鼠（575.5 g±13.3 g）和OR大鼠（478.3 g±10.5 g）。大鼠體質(zhì)量穩(wěn)定增長(zhǎng)，“時(shí)間”與“飲食”存在顯著交互效應(yīng)（P＜0.01）。OP組大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)顯著高于C組與OR組大鼠（P＜0.01，圖3B）。此外，大鼠熱量攝入呈遞增趨勢(shì)，“時(shí)間”與“飲食”存在交互效應(yīng)（P＜0.05）。OP組大鼠熱量攝入顯著高于C組與OR組大鼠（P＜0.01，圖3C）。

圖3 前8周各組大鼠體質(zhì)量及熱量攝入變化Figure 3.Changes of Body Weight and Caloric Intake in Each Group at the First 8 Weeks

2.2 高脂飲食后大鼠進(jìn)食行為學(xué)變化

如圖4B～I(xiàn)，8周高脂飲食后，大鼠操作式條件反射進(jìn)食行為訓(xùn)練中FR1測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)存在組間差異。與C組大鼠比較，OP大鼠獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)顯著增高（P＜0.05）。FR3測(cè)試期與FR5測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)均存在組間差異，OP大鼠獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)顯著高于C組和OR大鼠（P＜0.05）。漸進(jìn)比率PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)結(jié)果顯示，與C組和OR組比較，OP組大鼠獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)均顯著升高（P＜0.01）。OP大鼠的斷點(diǎn)值顯著高于C組大鼠（P＜0.001）與OR大鼠（P＜0.01）。此外，OP大鼠在PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)（R=0.561，P＜0.05）及斷點(diǎn)值（R=0.567，P＜0.05）與體質(zhì)量增長(zhǎng)均呈顯著正相關(guān)。

圖4 8周高脂飲食后各組大鼠行為學(xué)測(cè)試結(jié)果Figure 4.Behavioral Test Results in Each Group after 8 Weeks of Diet

8周高脂飲食后，大鼠進(jìn)行8天適口性食物誘導(dǎo)CPP訓(xùn)練，OP大鼠與OR大鼠適口性食物誘導(dǎo)CPP偏愛(ài)度顯著高于C組大鼠（P＜0.05）。OP大鼠體質(zhì)量增加與適口性食物誘導(dǎo)CPP偏愛(ài)度呈顯著正相關(guān)（R=0.284，P＜0.05）。

2.3 運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠體質(zhì)量與熱量攝入變化

結(jié)果顯示，6周有氧運(yùn)動(dòng)后，大鼠體質(zhì)量與熱量攝入均存在組間差異（圖5A～C）。“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”不存在交互效應(yīng)（P＞0.05）。ORE組大鼠與OPE組大鼠體質(zhì)量從運(yùn)動(dòng)干預(yù)第6天開(kāi)始顯著下降（P＜0.01）。此外，ORE組大鼠在運(yùn)動(dòng)干預(yù)第12天后每日熱量攝入均顯著低于ORC組大鼠（P＜0.05，P＜0.01），OPE組大鼠在運(yùn)動(dòng)干預(yù)第6天后每日熱量攝入顯著低于OPC組大鼠（P＜0.01）。此外，運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率存在組間差異。與ORC大鼠比較，OPC大鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)率顯著升高，ORE大鼠顯著降低（P＜0.05），而OPE大鼠體質(zhì)量較OPC大鼠顯著降低（P＜0.01）。

圖5 大鼠體質(zhì)量與熱量攝入變化Figure 5.Changes of Weight Gain and Caloric Intake in Rats

2.4 運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠進(jìn)食行為學(xué)變化

結(jié)果顯示，運(yùn)動(dòng)干預(yù)后FR1測(cè)試期、FR3測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值均存在組間差異（圖6A～E）?！斑\(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05）。OPC大鼠FR1測(cè)試期、FR3測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值均顯著高于ORC大鼠（P＜0.05）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠FR1測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值均顯著降低（P＜0.05）。

圖6 運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠進(jìn)食行為測(cè)試結(jié)果Figure 6.Comparison of Feeding Behavior after Exercise Intervention

6周有氧運(yùn)動(dòng)后，大鼠適口性食物誘導(dǎo)的CPP偏愛(ài)度顯著改變。“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05），OPE大鼠適口性食物誘導(dǎo)的CPP偏愛(ài)度顯著低于OPC大鼠（P＜0.05，圖6F）。

2.5 伏隔核NASPM注射對(duì)大鼠進(jìn)食行為學(xué)的影響

伏隔核注射CP-AMPARs拮抗劑NASPM后，F(xiàn)R1測(cè)試期、FR3測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值均顯著改變（圖7A～E）?！斑\(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05）。OPC大鼠的FR3測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值均顯著高于ORC大鼠（P＜0.01或P＜0.05）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠的FR1測(cè)試期與FR5測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)顯著降低（P＜0.05）。以8周高脂飲食后結(jié)果為基礎(chǔ)，計(jì)算伏隔核NASPM注射后FR1測(cè)試期、FR3測(cè)試期、FR5測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)及斷點(diǎn)值的變化比值（圖7F～J）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05），OPC大鼠的FR1測(cè)試期與PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)下降比顯著低于ORC大鼠（P＜0.05）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠的FR1測(cè)試期、FR3測(cè)試期、PR測(cè)試期獎(jiǎng)賞壓桿次數(shù)與斷點(diǎn)值的下降比均顯著上升（P＜0.05）。

注射CP-AMPARs拮抗劑NASPM后，大鼠適口性食物誘導(dǎo)CPP偏愛(ài)度顯著改變?！斑\(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05），OPC大鼠的偏愛(ài)度顯著高于ORC大鼠（P＜0.05），OPE大鼠的偏愛(ài)度顯著低于OPC大鼠（P＜0.01，圖7K）。以8周高脂飲食后結(jié)果為基礎(chǔ)，計(jì)算伏隔核NASPM注射后偏愛(ài)度的變化比值。結(jié)果顯示“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05），OPC大鼠偏愛(ài)度的下降比顯著低于ORC大鼠（P＜0.05），而OPE大鼠的下降比顯著高于OPC大鼠（P＜0.05，圖7L）。

圖7 伏隔核NASPM注射后大鼠進(jìn)食行為變化Figure 7.Changes in Feeding Behavior after NASPM Injection in Nucleus Accumbens

2.6 腹側(cè)紋狀體及伏隔核GluA1與GluA2蛋白表達(dá)變化

2.6.1 腹側(cè)紋狀體GluA1與GluA2蛋白表達(dá)

Western blotting結(jié)果顯示，“運(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”對(duì)腹側(cè)紋狀體GluA1與GluA2蛋白表達(dá)影響無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05），OPC大鼠GluA1表達(dá)顯著高于ORC大鼠（圖8A、8B），GluA2表達(dá)則低于ORC大鼠（圖8C），而GluA1∶GluA2表達(dá)比值顯著高于ORC大鼠（P＜0.05，圖8D）。此外，與ORC大鼠比較，ORE大鼠的GluA2表達(dá)升高，GluA1∶GluA2比值則顯著降低（P＜0.05）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠的GluA1表達(dá)降低，GluA2表達(dá)增加，GluA1∶GluA2比值降低，差異顯著（P＜0.05）。

2.6.2 伏隔核核部GluA1與GluA2蛋白表達(dá)及共表達(dá)情況

免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠伏隔核核部膜表面GluA1、GluA2及其共表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量存在組間差異?！斑\(yùn)動(dòng)”與“肥胖程度”間無(wú)交互效應(yīng)（P＞0.05）。OPC大鼠伏隔核核部GluA1、GluA2及其共表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量均顯著高于ORC大鼠（P＜0.05）。此外，與OPC大鼠比較，OPE大鼠GluA1、GluA2、共表達(dá)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量及GluA1與GluA2膜表面細(xì)胞比值均顯著降低（P＜0.05，圖8F～J）。

圖8 腹側(cè)紋狀體及伏隔核核部GluA1與GluA2蛋白表達(dá)Figure 8.Expression of GluA1 and GluA2 in Ventral Striatum and Nucleus Accumbens Core

2.7 伏隔核神經(jīng)元Spike類(lèi)型分析

本研究記錄了12只大鼠伏隔核神經(jīng)元活動(dòng)，共篩選出41個(gè)MSNs，其在3個(gè)主要成分中呈不同分布（圖9A、9B），放電較規(guī)則，頻率為1.58±1.46 Hz，且基線放電率低于5 Hz（圖9C），結(jié)合峰峰間期（interspike interval，ISI）直方圖及自相關(guān)圖直方圖（圖9F、9G），根據(jù)神經(jīng)元波形特征（圖9E、9H）篩選出谷峰持續(xù)時(shí)間、峰峰持續(xù)時(shí)間、波形對(duì)稱(chēng)指數(shù)和平均發(fā)放頻率的變異系數(shù)（CV）可區(qū)分MSNs（圖 9I～M）（Bakhurin et al.，2016；Bouabid et al.，2018；Sjul?son et al.，2018；Soares-Cunha et al.，2018）。

與ORC大鼠比較，OPC大鼠的MSNs平均發(fā)放頻率顯著增高（P＜0.01），ORE大鼠顯著降低（P＜0.01）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠MSNs的平均發(fā)放頻率顯著降低（P＜0.01，圖9D）。

圖9 伏隔核神經(jīng)元分類(lèi)Figure 9.Classification of Neurons in Nucleus Accumbens

2.8 伏隔核LFPs及Spike-Field相干性分析

大鼠伏隔核LFPs功率譜密度值對(duì)比中各組大鼠θ頻段（4～8 Hz）功率譜密度出現(xiàn)顯著差異（圖10A、10B）。與ORC大鼠比較，OPC大鼠伏隔核LFPs在θ頻段（4～8 Hz）功率譜密度顯著增高（P＜0.01），ORE大鼠則顯著降低（P＜0.05）。與OPC大鼠比較，OPE大鼠功率譜密度呈現(xiàn)降低，差異顯著（P＜0.01，圖10C）。此外，LFPs功率頻譜分析中，與ORC大鼠比較，OPC大鼠（4～8 Hz）振蕩能量帶增強(qiáng)，ORE大鼠對(duì)比ORC大鼠，OPE大鼠比OPC大鼠減弱（圖10D、10E）。在各組大鼠MSNs的Spike-LFPs相干性對(duì)比中，θ頻段出現(xiàn)差異（圖10F、10G）。與ORC大鼠比較，OPC大鼠MSNs的Spike-LFPs相干性在θ頻段顯著升高（P＜0.001），OPE大鼠則顯著降低（P＜0.01，圖10H）。

圖10 伏隔核功率譜密度及Spike-LFPs相干值比較Figure 10.Comparison of Nucleus Accumbens Power Spectral Density and Coherence Values of Spike-LFPs

3 分析與討論

與高適口食物相關(guān)的線索即使在能量?jī)?chǔ)備充足時(shí)，仍可引發(fā)進(jìn)食行為，肥胖易感個(gè)體對(duì)食物線索誘導(dǎo)的進(jìn)食動(dòng)機(jī)更為明顯，同時(shí)伴隨中腦邊緣環(huán)路更強(qiáng)的激活（Yo?kum et al.，2014）。表明肥胖易感個(gè)體中腦邊緣系統(tǒng)對(duì)食物線索的動(dòng)機(jī)反應(yīng)存在異常，這與過(guò)度進(jìn)食及體質(zhì)量增加有關(guān)（魏龍威 等，2020；Ferrario et al.，2016）。觸發(fā)進(jìn)食動(dòng)機(jī)的關(guān)鍵是食物獎(jiǎng)賞，后者是指通過(guò)多種神經(jīng)心理學(xué)成分賦予食物積極價(jià)值。改善食物獎(jiǎng)賞對(duì)矯正異常進(jìn)食行為及防治肥胖具有重要意義。前期研究已證實(shí)，有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)緩解肥胖及其相關(guān)進(jìn)食行為異常具有積極作用（曹姍姍 等，2020；陳巍 等，2018；Chen et al.，2019）。然而，其中的具體調(diào)控機(jī)制尚未明確。

3.1 有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)肥胖易感大鼠進(jìn)食行為的調(diào)節(jié)作用

通過(guò)數(shù)周的高脂飲食，部分嚙齒類(lèi)動(dòng)物的體質(zhì)量會(huì)迅速增加，而部分動(dòng)物的體質(zhì)量增長(zhǎng)并不明顯，甚至略低于普通飼料喂養(yǎng)的動(dòng)物。利用這種特性，根據(jù)體質(zhì)量的三分位或四分位法可成功篩選出OP與OR表型動(dòng)物，這與人群肥胖發(fā)生的異質(zhì)性相似（Barry et al.，1997；Brown et al.，2017；Giles et al.，2016；Lu et al.，2021；Rada et al.，2010）。本研究采用8周高脂飲食方案，以三分位法成功篩選出OP與OR大鼠。采用操作式條件反射及條件位置偏愛(ài)實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)大鼠的進(jìn)食動(dòng)機(jī)及食物獎(jiǎng)賞。研究發(fā)現(xiàn)，OP大鼠進(jìn)食適口性食物的動(dòng)機(jī)較OR大鼠明顯增強(qiáng)，且與體質(zhì)量增長(zhǎng)呈顯著正相關(guān)，即OP大鼠需攝入更多適口

性食物才可達(dá)到預(yù)期的食物獎(jiǎng)賞。長(zhǎng)期高脂飲食可改變伏隔核突觸可塑性（Ankney et al.，2018），因?yàn)楦哌m口性食物與具有強(qiáng)化效應(yīng)的藥物一樣可增加中腦邊緣環(huán)路和伏隔核內(nèi)的Glu能傳遞（許本柯 等，2018；Brown et al.，2011），引起伏隔核神經(jīng)元樹(shù)突棘、突觸聯(lián)系及Glu受體表達(dá)改變（Dingess et al.，2017）。在藥物成癮模型中，皮層-伏隔核Glu能突觸可塑性在強(qiáng)迫性覓藥行為中同樣發(fā)揮了重要作用（Ankney et al.，2018）。因此，伏隔核MSNs的Glu能突觸傳遞異常是藥物成癮的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)（Bag?etta et al.，2012；Shen et al.，2011）。OP大鼠伏隔核核部突觸存在類(lèi)似功能障礙（Brown et al.，2017），提示本研究中OP大鼠食物獎(jiǎng)賞不足及進(jìn)食動(dòng)機(jī)增強(qiáng)可能與伏隔核Glu能信號(hào)改變有關(guān)。經(jīng)過(guò)6周有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)，不僅OP大鼠的體質(zhì)量及熱量攝入增長(zhǎng)得到了緩解，同時(shí)還改善了食物獎(jiǎng)賞并降低了進(jìn)食動(dòng)機(jī)。采用藥理學(xué)手段逆轉(zhuǎn)飲食誘導(dǎo)的伏隔核Glu能突觸功能變化可改善進(jìn)食行為異常（Alonso-Caraballo et al.，2021；Moussawi et al.，2009），提示有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)OP大鼠進(jìn)食行為的影響可能也與伏隔核Glu能的突觸功能變化有關(guān)。

3.2 有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)肥胖易感大鼠伏隔核CP-AMPARs表達(dá)與功能的影響

伏隔核信息傳遞在很大程度上依賴(lài)AMPARs的激活（Benke et al.，2019）。生理狀態(tài)下，伏隔核內(nèi)存在少量缺乏GluA2亞基（GluA1/1或GluA1/3）的AMPARs（CP-AMPARs），其對(duì)Ca具有高通透性及內(nèi)向整流作用，在Glu突觸可塑性中發(fā)揮關(guān)鍵作用。有研究表明，CP-AMPARs激活對(duì)食物和藥物誘導(dǎo)的動(dòng)機(jī)反應(yīng)是必要的（Derman et al.，2018；Ferrario.2017；Oginsky et al.，2016a）。本研究發(fā)現(xiàn)，OP大鼠伏隔核核部膜表面AMPARs及CP-AMPARs陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量顯著高于OR大鼠。這與Derman等（2018）的結(jié)果一致。AMPARs及其亞基只有嵌合插入質(zhì)膜表面才具有生物活性，膜表面AMPARs水平變化與突觸傳遞的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)密切相關(guān)（Choquet，2010）。由此推測(cè)，OP大鼠伏隔核核部CP-AMPARs突觸插入增加。另有研究顯示，OP大鼠伏隔核核部膜表面GluA1亞基的增加伴隨著胞內(nèi)GluA1表 達(dá) 上 調(diào)（Alonso-Caraballo et al.，2021；Derman et al.，2018）。入膜后的AMPARs及CP-AMPARs內(nèi)化速度更快，這會(huì)影響到突觸傳遞。由此可見(jiàn)，伏隔核核部具有更多的CP-AMPARs突觸插入，這可能是OP大鼠進(jìn)食動(dòng)機(jī)及體質(zhì)量增加的重要原因之一。本研究還發(fā)現(xiàn)，6周有氧運(yùn)動(dòng)可降低OP大鼠伏隔核核部膜表面AMPARs與CP-AMPARs陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)數(shù)量，提示有氧運(yùn)動(dòng)對(duì)肥胖相關(guān)進(jìn)食行為的影響可能與此有關(guān)。長(zhǎng)期高脂飲食會(huì)在很大程度上選擇性降低適口性食物的獎(jiǎng)賞成分及轉(zhuǎn)換效價(jià)，引發(fā)食物獎(jiǎng)賞不足，進(jìn)而攝取更多的適口性食物才可獲得預(yù)期獎(jiǎng)賞。在獎(jiǎng)賞尋求效價(jià)編碼模型中，伏隔核MSNs中的CPAMPARs突觸插入通過(guò)改變不同類(lèi)型神經(jīng)元之間的興奮性調(diào)節(jié)獎(jiǎng)賞閾值，進(jìn)而外化為進(jìn)食動(dòng)機(jī)（Carr，2020）?？梢?jiàn)，有氧運(yùn)動(dòng)可通過(guò)改變伏隔核核部GluA1與GluA2的表達(dá)水平及CP-AMPARs功能，調(diào)節(jié)食物獎(jiǎng)賞，緩解OP大鼠過(guò)高的進(jìn)食動(dòng)機(jī)。

目前，關(guān)于高脂飲食如何誘發(fā)并維持CP-AMPARs的突觸插入及膜轉(zhuǎn)運(yùn)，尚未完全闡明。有研究認(rèn)為，CP-AMPARs的突觸插入及膜轉(zhuǎn)運(yùn)的生理變化可能是一種維持獎(jiǎng)賞穩(wěn)態(tài)的細(xì)胞反應(yīng)（Alonso-Caraballo et al.，2021；Carr，2020）。有氧運(yùn)動(dòng)提高OP大鼠伏隔核AMPARs中GluA2磷酸化水平及突觸占有率，可引起Ca通道內(nèi)產(chǎn)生正電荷，阻斷陽(yáng)離子流動(dòng)，降低Ca電導(dǎo)，減少Glu突觸強(qiáng)度（Lee，2012；Teichert et al.，2017）。此外，DA不足可能是促進(jìn)CP-AMPARs突觸轉(zhuǎn)運(yùn)的另一個(gè)相關(guān)事件，諸如DA缺失的PD小鼠模型中紋狀體GluA1和GluA1-Ser845磷酸化水平明顯上升（Koutsokera et al.，2014）。DA缺失可引起背側(cè)紋狀體突觸CP-AMPARs轉(zhuǎn)運(yùn)增加（Bagetta et al.，2012）。長(zhǎng)期高脂飲食可降低紋狀體DA基礎(chǔ)水平，提示OP大鼠伏隔核CPAMPARs上調(diào)可能與DA傳遞改變有關(guān)。而運(yùn)動(dòng)干預(yù)可改變PD動(dòng)物紋狀體AMPARs特異性亞基表達(dá)及胞外Glu水平（陳巍 等，2015；時(shí)凱旋 等，2020；Fisher et al.，2004），同時(shí)在肥胖動(dòng)物模型研究中，運(yùn)動(dòng)干預(yù)可通過(guò)提高中腦-紋狀體酪氨酸羥化酶的表達(dá)，提高紋狀體DA水平，改善肥胖動(dòng)物高脂飲食偏愛(ài)（陳巍等，2018）。這些研究均表明，伏隔核AMPARs具有較強(qiáng)的運(yùn)動(dòng)依賴(lài)可塑性。

AMPARs的Ca通透性取決于四聚體內(nèi)是否存在GluA2亞基（雷蕾 等，2015；Twomey et al.，2018；Wright et al.，2012；）。CP-AMPARs的選擇性拮抗劑 NASPM 可阻斷陽(yáng)離子流動(dòng)，在短時(shí)間內(nèi)調(diào)節(jié)Glu突觸強(qiáng)度（Lalanne et al.，2018；Twomey et al.，2017，2018）。本研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)6周有氧運(yùn)動(dòng)，OP大鼠進(jìn)食行為指標(biāo)在伏隔核NASPM注射后測(cè)試中變化更明顯。提示伏隔核CP-AMPARs在有氧運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)OP大鼠食物獎(jiǎng)賞與進(jìn)食動(dòng)機(jī)中具有關(guān)鍵作用。

3.3 有氧運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)肥胖易感大鼠伏隔核神經(jīng)元活動(dòng)

MSNs可接受并整合來(lái)自前額葉皮層、海馬和杏仁核等的Glu信號(hào)，以及來(lái)自中腦的DA信號(hào)，進(jìn)而驅(qū)動(dòng)動(dòng)機(jī)性行為。OP和OR群體的DA系統(tǒng)存在潛在的基礎(chǔ)差異已有報(bào)道（Cosgrove et al.，2015；Volkow et al.，2008，2011）。此外，OP與OR大鼠伏隔核核部的MSNs興奮性也存在差異（Alonso-Caraballo et al.，2021；Oginsky et al.，2019），其原因可能與Glu傳遞有關(guān)（Kasanetz et al.，2009）。OP大鼠MSNs的AMPARs介導(dǎo)的內(nèi)向整流性K電流（IKir）和A型K電流（IA）提高可引起其興奮性增強(qiáng)，進(jìn)而改變核團(tuán)神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)（Alonso-Caraballo et al.，2019；Oginsky et al.，2016b，2019）。例如，探索新異環(huán)境時(shí)，ClockΔ19 KO小鼠由于DA信號(hào)增強(qiáng)，而表現(xiàn)出伏隔核神經(jīng)振蕩的跨頻相位偶聯(lián)與中腦邊緣系統(tǒng)相一致的現(xiàn)象（Dzirasa et al.，2010）。而伏隔核相位偶聯(lián)依賴(lài)于Glu信號(hào)，其受體功能變化可引起MSNs突觸重塑（Wolf et al.，2005）。高脂飲食動(dòng)物表現(xiàn)為DA系統(tǒng)及獎(jiǎng)賞環(huán)路障礙時(shí)，可能已改變了伏隔核神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)，但是運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)伏隔核AMPARs功能是否改變其神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)活動(dòng)，鮮見(jiàn)報(bào)道。

Spike-LFPs相干性代表了局部神經(jīng)核團(tuán)單個(gè)神經(jīng)元活動(dòng)與神經(jīng)系統(tǒng)集合LFPs之間的同步性，可描述神經(jīng)元的通訊與編碼機(jī)制（Buzsaki，2010；Buzsaki et al.，2014）。在感知、注意、記憶和運(yùn)動(dòng)控制等研究中廣泛使用。例如，在PD模型中被用于皮層-基底神經(jīng)節(jié)通路變化的機(jī)制分析（Buzsaki et al.，2012，2014；Geng et al.，2019），發(fā)現(xiàn)PD動(dòng)物模型腳橋核（pedunculopontine nucleus，PPN）和運(yùn)動(dòng)皮層之間發(fā)生Spike-LFPs相干性改變是其行為障礙的重要原因。獎(jiǎng)賞任務(wù)的研究也顯示，腹側(cè)紋狀體及伏隔核Spike-LFPs相干性與動(dòng)機(jī)性行為有關(guān)（An et al.，2019；Berke.2009；Tanaka et al.，2018）。本研究中，OP大鼠伏隔核MSNs的Spike-LFPs相干性θ頻段節(jié)律性振蕩功率顯著上升，而θ頻段節(jié)律性振蕩變化是獎(jiǎng)賞回路對(duì)反饋性刺激響應(yīng)的重要組成部分（Amarante et al.，2017；Knudsen et al.，2020；McCane et al.，2018）。因此推測(cè)，OP大鼠伏隔核AMPARs改變導(dǎo)致MSNs過(guò)度興奮，從而引起伏隔核LFPs特定獎(jiǎng)賞相關(guān)頻段改變。LFPs可反映記錄電極附近神經(jīng)元的突觸活動(dòng)總和（Buzsaki et al.，2012；Denker et al.，2011；Nauhaus et al.，2009）。與本研究結(jié)果類(lèi)似，非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物研究中，與獎(jiǎng)賞相關(guān)信息的編碼在低頻信號(hào)（＜32 Hz）中同步，而高頻信號(hào)（＞33 Hz）與預(yù)測(cè)獎(jiǎng)賞值呈負(fù)相關(guān)。高頻信號(hào)可能反映了獎(jiǎng)賞抑制過(guò)程，這為解釋獎(jiǎng)賞信息多維處理提供了新的見(jiàn)解（Pasquereau et al.，2019）。有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，OP大鼠伏隔核LFPs的θ頻段節(jié)律性振蕩功率顯著下降，提示有氧運(yùn)動(dòng)通過(guò)調(diào)節(jié)伏隔核神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)連接在一定程度上恢復(fù)了該核團(tuán)的功能完整性，從而改善了食物獎(jiǎng)賞及進(jìn)食行為，為降低肥胖易感風(fēng)險(xiǎn)發(fā)揮了積極作用。

4 結(jié)論

6周有氧運(yùn)動(dòng)干預(yù)可改善肥胖易感大鼠的食物獎(jiǎng)賞功能，降低進(jìn)食動(dòng)機(jī)，并延緩體質(zhì)量增長(zhǎng)，相關(guān)機(jī)制可能與有氧運(yùn)動(dòng)降低了肥胖易感大鼠伏隔核核部膜表面GluA1：GluA2表達(dá)比值，減少CP-AMPARs突觸插入，降低伏隔核MSNs的Spike-LFPs異常同步活動(dòng)有關(guān)。