三種不同免疫檢驗法在IV診斷中的可靠性分析

朱劉丹 趙夢月

鄭州市疾病控制中心檢驗科 (河南 鄭州 450000)

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)是致使人們感染艾滋病的主要原因，其傳播途徑包含血液傳播、性傳播、母嬰傳播等，一經(jīng)感染會破壞機體免疫功能，繼而造成機會性感染以及腫瘤等疾病，該病毒傳播速度較快，且治愈率較差，致死率較高。因此及早確診艾滋病患者，對防控艾滋病具有積極意義[1-3]。金標快速檢測法檢測速度較快，3～20min即可完成檢測，對于急診患者友好度較高，但檢測時需使用新鮮血液樣本；時間分辨免疫法屬非放射微量分析技術，具有標準曲線范圍較廣、自動化檢測、可重復高等優(yōu)勢，且其篩查效率較高，但在臨床實際應用時，常會檢出弱陽性標本；酶聯(lián)免疫吸附試驗操作較為簡便，所用試劑穩(wěn)定性更佳，且診斷限制較少，應用價值較高?；诖?，選取我院152例艾滋病患者，分析三種不同免疫檢驗法診斷的可靠性。具體分析如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料本研究選取2018年1月至2020年2月我院收治艾滋病患者152例。

納入標準：經(jīng)免疫印痕跡法被確診為艾滋??；無肢體功能障礙或內科疾病；意識清醒。排除標準：病情不穩(wěn)定；存在嚴重代謝異常疾??；存在嚴重精神疾病。男性83例，女性69例；年齡27～44歲，平均年齡(33.15±4.20)歲。

1.2 方法所有患者均行金標快速檢測法、時間分辨免疫法、酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷。

1.2.1 金標快速檢測法 選用購自上?？迫A生物工程股份有限公司的金免疫試紙，抽取血液樣本，置于金免疫試紙加樣區(qū)，10s后，其被樣本全部浸沒，仔細查看試紙顏色變化，若結果顯示1條紅線，表示受檢者陰性；若結果顯示2條紅線，表示受檢者陽性。

1.2.2 時間分辨免疫法 于清晨抽取3mL空腹靜脈血，以3000r/min的速度離心，置于低溫環(huán)境下冷藏待檢。選用購自上海新波公司的Easy Cuta時間分辨免疫熒光儀檢測，并予以其配套試劑。

1.2.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗 于清晨抽取3mL空腹靜脈血，以3000r/min的速度離心，置于低溫環(huán)境下冷藏待檢。予以酶復合物稀釋液將血清稀釋，然后進行孵育、洗板、加底物共60min，予以Bio Tek ELx800自動化酶免分析儀診斷。

1.3 觀察指標(1)診斷結果，以免疫印痕跡法確診為“金標準”，統(tǒng)計金標快速檢測法、時間分辨免疫法、酶聯(lián)免疫吸附試驗的診斷結果。(2)診斷檢出率，對比金標快速檢測法、時間分辨免疫法、酶聯(lián)免疫吸附試驗的診斷敏感度、特異度、準確度。

1.4 統(tǒng)計學方法采用SPSS 22.0分析，計數(shù)資料n(%)表示，χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結 果

2.1 診斷結果免疫印痕跡法診斷HIV真陽性99例，真陰性53例；金標快速檢測法診斷真陽性82例，真陰性38例；時間分辨免疫法診斷真陽性83例，真陰性39例；酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷真陽性92例，真陰性48例，見表1。

表1 診斷結果(例)

2.2 診斷檢出率酶聯(lián)免疫吸附試驗敏感度92.93%、特異度90.57%、準確度92.11%較金標快速檢測法82.83%、73.58%、78.95%，時間分辨免疫法83.84%、75.47%、80.26%高(P＜0.05)，見表2。

表2 診斷檢出率[n(%)]

3 討 論

雖我國醫(yī)療科技快速發(fā)展，但艾滋病仍為棘手病癥，而HIV則是導致機體產(chǎn)生免疫力功能障礙，引發(fā)艾滋病的主要因素[4-6]。目前，臨床對其并無有效治療方法，且因該疾病傳染性較高，故社會當前對其防治性重視度較高，只有及時將確診艾滋病的患者進行有效隔離，才可避免其大范圍傳染，而可對艾滋病進行準確判斷的診斷方式便顯得尤為重要[7-8]。

金標快速檢測法所用膠體金為紅色，在檢測期間安全性較高，且紅色標記線的穩(wěn)定性較佳，檢驗過程也相對簡單，檢測血清的反應時間＜30min，且其無須處理血液，可減少血液受濕度、溫度的影響，且在操作時無需儀器，但此方式的特異度較低，且血液樣本需維持新鮮狀態(tài)，具有局限性。時間分辨免疫法的自動化操作程度較高，對于高通量、快速檢測較為友好，適宜大批量標本篩查，可利用熒光強度，依據(jù)產(chǎn)物熒光強度以及相對應熒光強度的比值，對反應體系中所具有的分析物濃度進行判斷，進而可定量分析，且此種檢測方式并無放射性污染，操作流程較為簡便，但具有時間局限性[9]。酶聯(lián)免疫吸附試驗包含雙抗體夾心法、間接法，其中雙抗夾心法可用于大分子抗原檢測，而間接法可用于特定抗體檢測，但兩者的顯色反應均較為清晰，肉眼可見，且因抗體或抗原的選擇性，抗原抗體結合位置，在空間構型、化學結構上具有一定互補關系，故檢出率較高，且其具有快速、易于標準化、簡便、敏感等優(yōu)勢，故疾病判斷更為準確，防治效果更佳[10]。本研究選取152例艾滋病患者作為研究對象予以金標快速檢測法、時間分辨免疫法、酶聯(lián)免疫吸附試驗三種檢測方式檢測，結果顯示，酶聯(lián)免疫吸附試驗敏感度92.93%、特異度90.57%、準確度92.11%較金標快速檢測法82.83%、73.58%、78.95%，時間分辨免疫法83.84%、75.47%、80.26%高(P＜0.05)。當血清標本中具有HIV抗體時，應用金標快速檢測法，其會線與金標記結合，又因層析作用，反應復合物會沿硝酸纖維膜逐漸向前移動，而當其與包被抗原相遇時，會產(chǎn)生Ag-Ab-Ag-Au復合物，于包被線上聚集，呈現(xiàn)出1條紅色沉淀線，而包被膜上還具有1條質控線以作參照，故呈現(xiàn)出2條紅線時，即可判斷其為陽性，但會存在一定漏診概率。時間分辨免疫法的檢測原理是基于雙抗原夾心的非競爭免疫分析，可利用鑭系元素標記抗體或抗原，并依據(jù)鑭系元素稀土螯合物熒光發(fā)光時間較長的特點，延緩測量時間，使短壽命背景熒光衰變后，對螯合物熒光進行測量，即可將非特異熒光干擾排除，進行定量分析，但該方式檢測時間較長。酶聯(lián)免疫吸附試驗可予以抗體、酶二者結合，且并未對抗體免疫性反應的特異性造成較大改變，不影響酶活性，而補充相應底物，可使基質水解呈色，使還原型氫體的顏色發(fā)生變化，由無色向有色進行轉變，利用呈色反應可察覺酶，且該檢測方式還可于細胞水平上呈現(xiàn)出抗體所在部位，在具有較高敏感度、特異性的同時，還可利用微克水平或納米水平給予定量，防止假陽性，整體診斷結果較佳。

綜上所述，與金標快速檢測法、時間分辨免疫法相比，酶聯(lián)免疫吸附試驗診斷HIV的敏感度、特異度、準確度更高，臨床應用價值更高。