感冒靈顆粒水提和醇沉工藝研究

文 /景廷杰 李磊 張強(qiáng) 于淼

為研究感冒靈顆粒理想的水提、醇沉工藝——本文采用單因素實(shí)驗(yàn)，以蒙花苷提取率為評價指標(biāo)，水提條件設(shè)置為煎煮2次、每次2 h；以蒙花苷轉(zhuǎn)移率和干浸膏得率為評價指標(biāo)，醇沉條件設(shè)置為初始乙醇濃度95%、終點(diǎn)乙醇含量63%、醇沉?xí)r間48 h。由此篩選出理想的加水量和初膏密度，以及工藝條件。最終確定感冒靈顆粒水提工藝一煎、二煎的理想加水量分別為8倍、7倍；醇沉工藝優(yōu)選初膏密度為1.10。

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1 緒論

1.1 感冒靈顆粒及其處方

感冒靈顆粒具有解熱鎮(zhèn)痛的作用，臨床用于治療感冒引起的頭痛、發(fā)熱、鼻塞、流涕、咽痛等。其處方主要包括三叉苦491 g、金盞銀盤327 g、野菊花246 g、崗梅736 g、咖啡因0.4 g、對乙酰氨基酚20 g、馬來酸氯苯那敏0.4 g、薄荷素油0.2 ml[1]。

1.2 研究目的及方法

目前關(guān)于感冒靈顆粒水提和醇沉過程的研究已經(jīng)很全面，但大多僅限于理論研究。在實(shí)際生產(chǎn)中，藥廠需要嚴(yán)格遵守藥典和藥品標(biāo)準(zhǔn)，有些參數(shù)都有明確的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，本文基于此基礎(chǔ)，采用單因素實(shí)驗(yàn)對感冒靈顆粒生產(chǎn)的水提和醇沉工藝進(jìn)行了優(yōu)選。

實(shí)驗(yàn)通過固定煎煮次數(shù)和煎煮時間，從三種加水量組合中選出了理想的組合；通過固定初始乙醇濃度、終點(diǎn)乙醇含量和醇沉?xí)r間，從三種初膏密度中選出理想初膏密度，從而優(yōu)化了水提和醇沉工藝，為生產(chǎn)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

2 感冒靈水提工藝研究

2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料

儀 器：Waters e2695-2489UV高效液相色譜儀、色譜 柱 ZORBAX SB-C18（4.6 mm×250 mm 5 μm）、TDZ5-WS低速自動平衡離心機(jī)、FK224分析天平（d=0.0001 g）、0.45 μm 水系微孔濾膜等。

試劑：蒙花苷對照品溶液（由仲景宛西制藥有限公司質(zhì)控部提供）、乙腈、超純水。

藥材：三叉苦（產(chǎn)自安徽亳州）、金盞銀盤（產(chǎn)自安徽亳州）、野菊花（產(chǎn)自湖北孝感）、崗梅（產(chǎn)自廣東肇慶）。實(shí)驗(yàn)所需藥材均由仲景宛西制藥有限公司提供，經(jīng)公司質(zhì)控部鑒別，了解所用三叉苦為蕓香科植物三叉苦的根及莖，金盞銀盤為菊科植物金盞銀盤的干燥全草，野菊花為菊科植物野菊的干燥頭狀花序，崗梅為冬青科植物梅葉冬青的根及莖，藥材中的蒙花苷含量為13.79 mg/g。

2.2 蒙花苷含量測定方法及方法學(xué)考察[2]

2.2.1 感冒靈水提液的制備

按處方量的1/10（即180 g）分別稱取4種藥材，加水煎煮2次，分別加8倍、7倍量水，每次煎煮2 h，過濾，合并濾液，即得感冒靈水提液。

2.2.2 對照品及供試品溶液的制備

對照品溶液的制備: 精密稱取蒙花苷對照品3.5 mg置于25 ml容量瓶中，加入甲醇溶解并定容，搖勻，即得對照品溶液。

供試品溶液的制備: 取上述感冒靈水提液80 ml置于離心管內(nèi)，在5000 r下離心10 min后即得供試品溶液（本實(shí)驗(yàn)供試品溶液由仲景宛西制藥有限公司質(zhì)控部提供，已知濃度為0.1419 mg/ml）。

測定方法: 將蒙花苷對照品和供試品溶液按照順序置于高效液相色譜儀，記錄編號，設(shè)置進(jìn)樣量為10 μl，照高效液相色譜法進(jìn)行測定，按外標(biāo)法進(jìn)行計算，即得蒙花苷含量。

2.2.3 色譜條件

流動相為乙腈-水(21∶79)，檢測波長為334 nm，柱溫為30℃，流速為1.0 ml·min-1，進(jìn)樣量為10 μl[3]。蒙花苷對照品和供試品溶液的HPLC圖譜，如圖1和圖2所示。

圖1 蒙花苷對照品HPLC圖譜

圖2 供試品HPLC圖譜

2.2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液1 μl、5 μl、8 μl、10 μl、15 μl、20 μl，然后進(jìn)樣，測定峰面積。橫坐標(biāo)、縱坐標(biāo)分別為對照品進(jìn)樣量（X，μg）和峰面積（Y），可得回歸方程Y=899164X－9973.8，R2=0.9993，結(jié)果表明，線性關(guān)系良好。

圖3 線性關(guān)系圖

2.2.5 精密度試驗(yàn)

設(shè)置連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量為5 μl，記錄峰面積，如表1所示?？捎嬎愠雒苫ㄜ辗迕娣eRSD（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）值為0.73%。表明在該色譜條件下，該測定方法精密度良好。

表1 精密度試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別在制備后的0、2 h、4 h、6 h、8 h進(jìn)樣，進(jìn)樣量為10 μl，得蒙花苷峰面積，如表2所示，計算RSD值為1.51%。表明供試品溶液在室溫下放置8 h仍能保持穩(wěn)定。

表2 穩(wěn)定性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取感冒靈水提液，平行制備6份供試品溶液，進(jìn)樣量為10 μl，記錄峰面積，如表3所示，計算RSD值為0.61%。表明在該色譜條件下，該定量方法的重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)數(shù)據(jù)

2.3 水提工藝研究理論基礎(chǔ)

2.3.1 計算公式

2.3.2 單因素實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)單因素的變量為加水量，每次實(shí)驗(yàn)保持煎煮2次和煎煮2 h的條件固定不變，以蒙花苷提取率為指標(biāo)研究水提工藝。根據(jù)大生產(chǎn)數(shù)據(jù)，目前加水量共有3種組合：10倍水＋8倍水、8倍水＋7倍水、5倍水＋3倍水。 本實(shí)驗(yàn)會通過測定3種加水量的水提液樣品峰面積，計算出蒙花苷含量和提取率，從而優(yōu)選出理想加水量組合。

2.4 實(shí)驗(yàn)方法

2.4.1 感冒靈水提液供試品的制備

按處方量的1/10（共180 g）稱取3份感冒靈顆粒藥材，均加水煎煮2次，每次煎煮2 h。一份加10倍水＋8倍水、一份加8倍水＋7倍水、一份加5倍水＋3倍水。需要注意的是，由于藥材具有吸水性，因此每煎1 h 后需要補(bǔ)充水量至初始水平。煎煮2次后，合并煎液，過濾，得水提液，測量濾液體積并記錄。取80 ml水提液置于離心管內(nèi)（平衡放置，裝量差異小于0.5 g），將離心機(jī)程序設(shè)置為“5000 r，10 min”，進(jìn)行離心，取上清液，編號，即得供試品溶液。

2.4.2 蒙花苷含量的測定

分別吸取3種供試品溶液，經(jīng)0.45 μm水系微孔濾膜濾過，注入樣品瓶中，每瓶收集約1.5 ml濾液，加蓋，貼好標(biāo)簽，進(jìn)行測定。

2.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

測定結(jié)果如表4所示。已知蒙花苷對照品溶液濃度為0.1419 mg/ml， 由2.2.4中所得回歸方程，可知在進(jìn)樣量為10 μl時對照品的峰面積約為1 265 940，根據(jù)公式2-1，可求得各供試品溶液（亦即水提液）的濃度，由此可得到水提液中蒙花苷的含量；再根據(jù)公式2-2，計算可求得蒙花苷提取率，計算結(jié)果如圖4所示。

表4 水提液體積和峰面積

由圖4可知，在一定條件下以蒙花苷提取率為指標(biāo)，提取效果按加水量可排序?yàn)椋?8倍水＋7倍水> 10倍水＋8倍水> 5倍水＋3倍水。

圖4 蒙花苷提取率

3 感冒靈醇沉工藝研究

3.2 醇沉工藝?yán)碚摶A(chǔ)

3.2.1 單因素試驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)單因素變量為初膏密度，評價指標(biāo)為蒙花苷保留率和干浸膏得率，每次實(shí)驗(yàn)保持初始乙醇濃度為95%，終點(diǎn)乙醇含量為63%，醇沉?xí)r間為48 h的條件固定不變。根據(jù)大生產(chǎn)數(shù)據(jù)，目前常用的初膏相對密度有1.05、1.10、1.15這3種，測定各初膏密度下的峰面積，計算蒙花苷含量；再根據(jù)初膏質(zhì)量和醇沉上清液體積計算出干浸膏得率，綜合兩方面因素優(yōu)選出理想初膏密度，計算相關(guān)公式如3-1、3-2、3-3、3-4所示。

3.3 實(shí)驗(yàn)方法

3.3.1 感冒靈水提液的制備

按處方量稱取藥材1800 g，加水煎煮2次，分別加8倍、7倍量水，每次煎煮2 h，之后合并煎液，用200目濾網(wǎng)過濾，即得實(shí)驗(yàn)用感冒靈水提液。

3.3.2 濃縮液的制備和處理

將上述水提液分成3份，每份體積為7000 ml，在電磁爐上以相同功率600 W進(jìn)行濃縮，期間不斷取濃縮液置于100 ml量筒中，當(dāng)用溫度計測量濃縮液溫度為75℃時，用比重計測比重（即相對密度），至比重分別為1.05，1.10，1.15時，停止?jié)饪s，將得到的3種初膏置于燒杯中貼上標(biāo)簽，并記錄下體積。每份初膏精密稱取1 g，置具塞錐形瓶中，再精密加入甲醇25 ml，密塞，稱定重量；用恒溫水浴鍋對其進(jìn)行加熱，設(shè)置溫度為65℃；加熱回流2 h后，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足缺失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得初膏的供試液[3]。

3.3.3 醇沉上清液的制備

在上述得到的3種不同的初膏中分別均勻緩緩加入95%乙醇，使藥液終點(diǎn)乙醇含量為63%，邊加邊攪拌，至終點(diǎn)時繼續(xù)攪拌5 min，用保鮮膜蓋住燒杯口并密封，然后在2℃的冰箱里冷藏放置48 h后，倒出上清液，測量其體積，并記錄[3]。

3.3.4 蒙花苷含量的測定

用注射器分別吸取上述6種樣品溶液，按照2.4.2中的步驟進(jìn)行測量。

3.3.5 干浸膏的處理

精密量取上述得到的3種醇沉上清液各25 ml，倒入蒸發(fā)皿中，在水浴鍋上蒸干后，再于干燥箱中干燥，設(shè)置溫度為105℃；烘至恒重后，取出冷卻，稱重，得到的干浸膏質(zhì)量如表5所示。

3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

測定結(jié)果如表6所示。已知蒙花苷對照品溶液濃度為0.1419 mg/ml，對照品的峰面積為1 265 940，根據(jù)公式3-1與3-2，由此可得6種樣品溶液相應(yīng)的蒙花苷含量，再根據(jù)公式3-3可得蒙花苷保留率，計算結(jié)果如圖5所示。

由圖5可知，在一定條件范圍內(nèi)以蒙花苷保留率為指標(biāo)，提取效果按初膏密度可排序?yàn)椋?.10處>1.15處>1.05處。

由表5、表6的數(shù)據(jù)，根據(jù)公式3-4可得干浸膏得率，計算結(jié)果如圖6所示。

表5 干浸膏質(zhì)量

由圖6可知，在一定條件范圍內(nèi)的感冒靈醇沉過程中，以干浸膏得率為指標(biāo)時，提取效果按初膏密度可排序?yàn)椋?.15處>1.10處>1.05處。

4 討 論

4.1 水提工藝

溶劑對物料提取效果的影響是通過濃度差來實(shí)現(xiàn)的。一般來說，隨著溶劑用量的增加，溶劑中有效成分的濃度會變低，溶劑邊界層與物料中有效成分的濃度差會增大，擴(kuò)散驅(qū)動力會增強(qiáng)，最終導(dǎo)致提取率的增高；反之，則提取率下降。但是，因?yàn)檫€存在有效成分的溶解平衡問題，提取率不會隨著料液比的增加無限提高；另一方面，由于溶劑量的增加，回收成本也會增加[4]。

由圖4可知，在煎煮次數(shù)和時間不變的前提下，蒙花苷的提取效果按加水量可排序?yàn)椋?倍水＋7倍水>10倍水＋8倍水>5倍水＋3倍水。由此推斷出，當(dāng)加水量組合為10倍水＋8倍水時，蒙花苷在水中的溶解已達(dá)飽和。同時由于在醇沉過程中需要回收乙醇，水提過程中得到的溶液量多會造成回收困難，增加回收成本，因此也需要考慮溶液量對成本回收造成的影響。綜合表4和圖4，最終可優(yōu)選出在一定確定條件范圍內(nèi)，理想加水量組合為8倍水＋7倍水。

4.2 醇沉工藝

由圖5可知，在一定條件范圍內(nèi)，以蒙花苷保留率為指標(biāo)，蒙花苷的提取效果按初膏密度可排序?yàn)椋?.10處>1.15處>1.05處。由圖6可知，以干浸膏得率為指標(biāo)時，提取效果按初膏密度可排序 為：1.15處 >1.10處>1.05處，即干浸膏得率是隨著初膏密度的增大而不斷提升的。這是因?yàn)槌醺嘞鄬γ芏仍叫。囿w含水量就越多，達(dá)到同樣的終點(diǎn)乙醇含量時所消耗的乙醇體積也越多；而隨著乙醇含量的增多，雜質(zhì)去除的就越多，所以干浸膏的得率就越低。但是醇沉效果并不是越高越好，除雜應(yīng)適宜，適當(dāng)?shù)乇Ａ粢恍┏煞钟欣谥兴幆熜У陌l(fā)揮，因此需要控制適量的干浸膏得率。另外也需要從醇沉上清液的體積方面進(jìn)行考慮，由表6可看出，隨著初膏密度的增大，醇沉上清液的體積逐漸減小。

表6 初膏及上清液體積和峰面積

圖5 蒙花苷保留率

圖6 干浸膏得率

結(jié)合蒙花苷保留率、醇沉上清液體積及干浸膏得率進(jìn)行綜合考慮，可得出在一定條件范圍內(nèi)，醇沉工藝?yán)硐氲某醺嘞鄬γ芏葹?.10。

5 結(jié) 論

根據(jù)本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和分析，可得出結(jié)論：感冒靈顆粒水提工藝在煎煮2次、每次煎煮2 h的條件下，理想加水量是一煎加8倍水，二煎加7倍水；醇沉工藝在初始乙醇濃度為95%、終點(diǎn)乙醇含量為63%、醇沉48小時的條件下，理想的初膏密度為1.10。本實(shí)驗(yàn)為感冒靈顆粒的水提和醇沉工藝提供了實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)，對工業(yè)生產(chǎn)具有指導(dǎo)意義。