茶類提取物抗氧化損傷的研究進(jìn)展

李慕 粟雯

人體細(xì)胞正常代謝的過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生活性氧自由基（ROS）和活性氮自由基，當(dāng)ROS和活性氮自由基在體內(nèi)的生成速率高于清除速率，則容易引起機(jī)體氧化應(yīng)激損傷，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能異常，誘發(fā)細(xì)胞凋亡壞死，同時(shí)反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的大量中間產(chǎn)物也易間接導(dǎo)致人類患多種疾病，氧化損傷的積累也是導(dǎo)致人體衰老的重要原因之一。目前，主流的觀點(diǎn)認(rèn)為，利用抗氧化劑減輕氧化應(yīng)激損傷，可以保護(hù)機(jī)體組織、延緩衰老。研究表明，許多植物提取物中的活性成分有較好的抗氧化損傷作用，如覆盆子、葡萄籽及蔓越莓里提取到的原花青素，桑葉提取物中的黃酮類化合物槲皮素，花生、虎杖及桑葚里提取到的白藜蘆醇，大豆提取物中的異黃酮類化合物大豆苷元等。茶類作為人們?nèi)粘ｏ嬈分唬脖徽J(rèn)為具有較好的抗氧化損傷效果，能夠延緩機(jī)體衰老。本文結(jié)合近些年國(guó)內(nèi)外已經(jīng)發(fā)表的茶類提取物抗氧化損傷的實(shí)驗(yàn)研究，從茶類提取物的主要化學(xué)成分、抗氧化能力評(píng)價(jià)方式、效果和機(jī)制方面進(jìn)行綜述，為茶類的養(yǎng)生保健功能提供更多的理論依據(jù)。

一、茶類提取物的主要化學(xué)成分

茶葉根據(jù)制作工藝可分為六類：綠茶、白茶、黃茶、青茶、紅茶、黑茶。雖然多項(xiàng)研究表明，該六類茶類提取物的主要活性物質(zhì)為兒茶素、生物堿、游離氨基酸、可溶性糖及茶多酚等，但不同茶葉原產(chǎn)地的地理環(huán)境、茶樹品種上的差異會(huì)造成茶葉原葉品質(zhì)的不同，再結(jié)合茶葉制作工藝和提取方法的差別，可能會(huì)造成不同茶類提取物功能性成分比例上存在差異。

李榮林等利用祁門櫧葉種制作了綠茶、卷型紅茶和安茶（黑茶），對(duì)其提取物分析得到了游離氨基酸的含量：綠茶≥紅茶≈黑茶，兒茶素總量：綠茶≥黑茶≈紅茶，芳香物總量：紅茶≥黑茶≥綠茶。李丹等以信陽(yáng)毛尖、紅碎茶和普洱熟茶為研究對(duì)象比較了不同工藝茶類的水提取物和醇提取物的功能性成分差異，結(jié)果顯示信陽(yáng)毛尖醇提取物得率高于水提取物，而紅碎茶和普洱熟茶水提取物得率高于醇提取物得率，其中醇提物中主要成分為茶多酚（信陽(yáng)毛尖>普洱熟茶>紅碎茶）、咖啡因及蛋白質(zhì)，水提物則以茶多酚、茶多糖（普洱熟茶>紅碎茶>信陽(yáng)毛尖）及茶氨酸為主。李小飛等選取了云南大葉種茶、福鼎大白茶等6種茶為代表測(cè)定了六大茶類水提取物的功能性成分。結(jié)果顯示，六大茶類水提取物的主要理化成分（兒茶素和EGCG）存在較大差異，發(fā)酵類茶（黑茶和紅茶）的含量顯著低于其他茶類。其中含量最高的茶多酚含量約在19.65%-35.03%，可溶性氨基酸、可溶性糖及總生物堿含量約在2.15%-13.52%、5.97%-7.42%及6.39%-11.36%。王振等也分析了六大茶類及茉莉花茶的水提取物的主要化學(xué)成分，因選取的茶類具體品種的不同，結(jié)果與李小飛等人的結(jié)果存在較大差異。雖然不同的研究檢測(cè)出不同茶類的活性成分的具體比例存在著較大差距，但是一般未發(fā)酵茶類中茶多酚和兒茶素的含量明顯高于半發(fā)酵類或全發(fā)酵茶類，而后發(fā)酵茶類（黑茶）的游離氨基酸含量較低，多糖類、總生物堿含量較高。這些成分上的差異可能會(huì)影響其抗氧化損傷的試驗(yàn)效果。

二、抗氧化能力評(píng)價(jià)方法

目前，一種物質(zhì)（測(cè)試樣品）抗氧化損傷效果的評(píng)價(jià)方式一般可分為體外和體內(nèi)兩類。體外試驗(yàn)包括化學(xué)法和細(xì)胞法，體內(nèi)試驗(yàn)是建立動(dòng)物模型或者人體試驗(yàn)進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。體外試驗(yàn)操作起來(lái)簡(jiǎn)單、快速，但生物相關(guān)性較差，難以進(jìn)行抗氧化損傷分子機(jī)制研究，而體內(nèi)抗氧化實(shí)驗(yàn)則能彌補(bǔ)這一缺陷。

1.體外抗氧化能力評(píng)價(jià)方法（化學(xué)法和細(xì)胞法）?；瘜W(xué)方法主要是在體外檢測(cè)物質(zhì)對(duì)脂類氧化的抑制能力或者對(duì)自由基的清除能力，用以評(píng)價(jià)其抗氧化損傷能力，像DPPH、FRAP、ABTS（基于電子轉(zhuǎn)移方法）及ORAC（基于氫原子轉(zhuǎn)移方法）是茶類提取物化學(xué)氧化能力測(cè)定的常用方式。

細(xì)胞法是以細(xì)胞為載體，通過(guò)不同的檢測(cè)手段來(lái)評(píng)價(jià)物質(zhì)對(duì)細(xì)胞的抗氧化活性，可以適度解決化學(xué)分析法生物相關(guān)性不高的問(wèn)題。目前報(bào)道的方法有CAP-e法、紅細(xì)胞氧化溶血法、細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型法和CAA法。其中細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷模型法應(yīng)用最為廣泛，一般選用內(nèi)皮、肝癌、成纖維等細(xì)胞暴露在H2O2或者過(guò)氧化脂質(zhì)中，構(gòu)建氧化損傷細(xì)胞模型，再加入待測(cè)物質(zhì)，檢測(cè)其抑制細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的效果。

2.體內(nèi)抗氧化能力評(píng)價(jià)方法（動(dòng)物模型法）。就目前來(lái)看，體內(nèi)抗氧化損傷研究中，使用動(dòng)物模型法的頻率往往高于人體試驗(yàn)法，常用動(dòng)物模型一般為模式生物，如小鼠、大鼠、果蠅及秀麗隱桿線蟲。

（1）果蠅抗氧化損傷活性評(píng)價(jià)。果蠅作為生命科學(xué)研究的模式生物，常被用于抗氧化實(shí)驗(yàn)研究。一般通過(guò)紫外線照射或者鄰苯二甲酸二辛酯（DEHP）處理來(lái)構(gòu)建果蠅氧化損傷模型，給果蠅飼喂不同劑量的天然產(chǎn)物提取物，再通過(guò)相關(guān)指標(biāo)如果蠅的壽命、體內(nèi)CAT、SOD等抗氧化酶類、ROS及丙二醛（MAD）等的含量來(lái)進(jìn)行抗氧化活性評(píng)價(jià)。同時(shí)，可以挑選部分基因突變的果蠅構(gòu)建模型進(jìn)行氧化應(yīng)激能力測(cè)定，進(jìn)行體內(nèi)抗氧化損傷分子機(jī)制的研究。

（2）秀麗隱桿線蟲抗氧化損傷活性評(píng)價(jià)。秀麗隱桿線蟲是研究衰老和壽命的首推模式動(dòng)物，氧化損傷的積累一般會(huì)導(dǎo)致衰老從而影響壽命，因此其也成為體內(nèi)抗氧化能力評(píng)價(jià)的重要?jiǎng)游锬Ｐ汀Ｒ话悴扇‰p氧水、百草枯、紫外線或者高溫處理構(gòu)建線蟲的氧化損傷模型，給藥處理后進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。表型指標(biāo)一般為壽命、生殖能力、脂褐素含量、頭部擺動(dòng)頻率和身體彎曲頻率等;生化方面一般檢測(cè)體內(nèi)抗氧化性酶T-SOD和SOD的活性;分子水平方面可以檢測(cè)與線蟲壽命分子機(jī)制相關(guān)的Insulin/IGF-1信號(hào)途徑關(guān)鍵基因daf-2、daf-16、tub-1、skn-1、sod-3的表達(dá)活性。

（3）大鼠、小鼠抗氧化損傷活性評(píng)價(jià)。目前常用的大鼠或者小鼠抗氧化損傷模型有自然衰老模型、D-半乳糖模型、輻射模型、溴代苯模型等。常測(cè)定的指標(biāo)為SOD、GSH-PX和CAT等抗氧化酶類的活性以及MDA等誘導(dǎo)過(guò)氧化物質(zhì)的含量，通過(guò)實(shí)驗(yàn)組和空白組的對(duì)照，從而評(píng)價(jià)受試物在生物體內(nèi)的抗氧化效果。該動(dòng)物模型的實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，檢測(cè)指標(biāo)多且復(fù)雜，一般建議適用于經(jīng)體外篩選后的活性化合物的氧化性活性評(píng)價(jià)。

三、茶類提取物抗氧化

損傷效果和機(jī)制研究進(jìn)展

在對(duì)六大茶類提取物進(jìn)行抗氧化損傷效果的研究過(guò)程中，不同團(tuán)隊(duì)選取的研究對(duì)象常為一種或者多種有地域代表特色的具體品種的茶類提取物（綠茶、紅茶類研究較多，黃茶類研究相對(duì)較少）。早期的實(shí)驗(yàn)一般采用體外化學(xué)法進(jìn)行評(píng)價(jià)，生物相關(guān)性較差。近些年，體外細(xì)胞法、體內(nèi)動(dòng)物模型或者體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)結(jié)合的研究方法逐漸增多，這有利于茶類提取物抗氧化損傷效果的全面真實(shí)評(píng)價(jià)及分子機(jī)制的探究。

大量研究都表明，六大茶類提取物均具有不同程度的抗氧化能力，但不同品種的茶類提取物活性成分存在差異，且由于采用的評(píng)價(jià)方式不同，結(jié)果在細(xì)節(jié)上也會(huì)存在差異。但是一般認(rèn)為，茶多酚的含量與體外抗氧化能力成正相關(guān)，而未發(fā)酵茶中綠茶的茶多酚含量較高，總還原能力往往最優(yōu)。在以大鼠和小鼠為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷难芯恐?，綠茶和紅茶能預(yù)防出血性腦卒中誘導(dǎo)的大鼠運(yùn)動(dòng)缺陷和紋狀體氧化損傷;綠茶對(duì)馬拉硫磷誘導(dǎo)的大鼠睪丸氧化損傷有保護(hù)作用，證實(shí)了雷公藤多苷片對(duì)馬拉硫磷所致不育患者氧化應(yīng)激和睪丸組織損傷的改善作用;白茶多酚里面含有隱綠原酸等6種活性物質(zhì)，能夠有效改善由D-半乳糖誘導(dǎo)的小鼠腎損傷;生普洱茶中的多酚能夠通過(guò)抗氧化效果、抗炎及增強(qiáng)胃黏膜保護(hù)因子，對(duì)小鼠酒精性胃損傷有一定抑制作用;Wang Pu等人利用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞和糖尿病小鼠探究霍山大葉黃茶提取物正丁醇部位（ HLYTBE ）對(duì)血管內(nèi)皮損傷的影響，結(jié)果表明HLYTBE通過(guò)AMPK/mTOR通路上調(diào)自噬和抑制氧化應(yīng)激保護(hù)血管內(nèi)皮。

另外，童杰文等人研究表明紅茶和綠茶能夠改善紫外線輻射應(yīng)激后的秀麗隱桿線蟲的身體狀況，并且認(rèn)為紅茶能夠上調(diào)與生殖和應(yīng)激通路相關(guān)的基因來(lái)發(fā)揮抗氧化損傷作用;張少維等研究表明，烏龍茶提取物能提高線蟲抵抗慢性氧化應(yīng)激能力，并通過(guò)DAF-16信號(hào)通路顯著提高線蟲的存活率，延長(zhǎng)壽命。馮雪等以果蠅為模型研究了黃芩葉茶的抗氧化損傷能力，發(fā)現(xiàn)其能延長(zhǎng)果蠅壽命，通過(guò)調(diào)控氨基酸代謝和能量代謝等不同代謝途徑，可改善機(jī)體代謝紊亂從而延緩機(jī)體衰老。人體實(shí)驗(yàn)法的研究相對(duì)較少，但也有團(tuán)隊(duì)近期報(bào)道紅茶和綠茶對(duì)吸煙女性的DNA氧化損傷和脂質(zhì)損傷有一定緩解，但是對(duì)男性吸煙群體作用并不明顯，具體的機(jī)制還未闡明。

綜上，大量的體外化學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)了不同品種的茶類提取物都具有較好的抗氧化能力，在不同的動(dòng)物模型及人體實(shí)驗(yàn)中也得到了證實(shí)，這充分說(shuō)明適當(dāng)飲茶能夠起到抗氧化損傷、延緩衰老的保健功能。

目前，綠茶及紅茶提取物在動(dòng)物模型里的抗氧化損傷分子機(jī)制研究較為成熟，其他茶類研究相對(duì)較少。在評(píng)估抗氧化損傷能力時(shí)，常采用茶類提取物混合液作為檢測(cè)對(duì)象，難以評(píng)估具體每種物質(zhì)的作用度;或者針對(duì)茶多酚類物質(zhì)進(jìn)行單獨(dú)評(píng)估，而忽略了其他微量成分的協(xié)同能力。這些不足都應(yīng)該是后續(xù)研究中亟待解決的問(wèn)題。

基金項(xiàng)目：湖南省教育廳一般項(xiàng)目——三種白茶的體內(nèi)抗氧化損傷效果與機(jī)制研究（18C0812）。