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    血液涂片制作教學(xué)改進(jìn)的探討

    2022-06-20 14:52:33祁根兄,紀(jì)麗麗,張慧
    中國(guó)動(dòng)物保健 2022年6期
    關(guān)鍵詞:識(shí)別制作

    祁根兄,紀(jì)麗麗,張慧

    摘要:準(zhǔn)確識(shí)別血液中各種血細(xì)胞的形態(tài)、構(gòu)造,并繪出各種血細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)圖,是動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè)大一學(xué)生在心血管系統(tǒng)這一章節(jié)中的實(shí)訓(xùn)技能課。針對(duì)此種情況,對(duì)血涂片的制作提出改進(jìn)方法,盡可能減少實(shí)驗(yàn)失敗的幾率,從而提高學(xué)生的實(shí)習(xí)熱情,把學(xué)生的注意力吸引到實(shí)驗(yàn)課上來(lái)。為圓滿完成實(shí)驗(yàn)教學(xué)任務(wù)創(chuàng)造了必要條件。

    關(guān)鍵詞:動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè);血涂片;制作;血細(xì)胞形態(tài);識(shí)別

    對(duì)于絕大多數(shù)動(dòng)物醫(yī)學(xué)專業(yè)的大一學(xué)生而言,血細(xì)胞形態(tài)學(xué)鏡檢的學(xué)習(xí)和實(shí)踐較為困難,能將其學(xué)好、學(xué)精者為數(shù)不多,具體表現(xiàn)為學(xué)生相關(guān)理論知識(shí)欠缺,多數(shù)學(xué)生僅停留在單個(gè)血細(xì)胞的形態(tài)識(shí)別上,而欠缺利用血細(xì)胞形態(tài)學(xué)理論課上的內(nèi)容對(duì)各種血細(xì)胞進(jìn)行觀察和總結(jié),實(shí)習(xí)熱情不高,因此為了激發(fā)興趣、調(diào)動(dòng)積極性并保證每個(gè)學(xué)生積極主動(dòng)地投入實(shí)驗(yàn),取得較滿意的教學(xué)效果。血細(xì)胞形態(tài)學(xué)鏡檢是血液檢驗(yàn)的重要內(nèi)容,也是眾多血液病的基礎(chǔ)診斷技術(shù),同時(shí)可為疾病療效判斷提供依據(jù)[1]。

    1 采血

    做血涂片所用血液可以提前采好,也可以現(xiàn)用現(xiàn)采,各有優(yōu)、缺點(diǎn),提前采好的優(yōu)點(diǎn)是可以節(jié)約上課時(shí)間,缺點(diǎn)在于保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或溫度不合適,會(huì)造成血細(xì)胞沉淀和凝集?,F(xiàn)場(chǎng)采集的優(yōu)點(diǎn)是血液比較新鮮,血細(xì)胞在血涂片上分布較均勻,不會(huì)造成血細(xì)胞的凝集現(xiàn)象。缺點(diǎn)是采血時(shí)出現(xiàn)學(xué)生之間推來(lái)推去或不敢采血的現(xiàn)象,有的同學(xué)還會(huì)導(dǎo)致采血失敗,耽擱時(shí)間,影響實(shí)驗(yàn)順利開(kāi)展,實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時(shí)間會(huì)延長(zhǎng),導(dǎo)致課堂秩序混亂和學(xué)生注意力會(huì)出現(xiàn)分散現(xiàn)象。

    2 血液取用

    將血液滴加在載玻片上,此方法可采用載玻片的四個(gè)邊角中的其中一個(gè)尖角蘸取血液[2],但是蘸取血液的量一定要少,不能太多,若太多會(huì)導(dǎo)致血細(xì)胞大量堆積和重疊,最后致使無(wú)法觀察而讓實(shí)驗(yàn)失敗。也不能太少,太少會(huì)導(dǎo)致圖片上可供觀察的血細(xì)胞太少。另外也可采用20μL微量移液管來(lái)移取血液,吸取5μL就夠了,此法優(yōu)點(diǎn)是血量的把控準(zhǔn)確,缺點(diǎn)是微量移液管使用要熟練,微量移液管使用不熟練者會(huì)導(dǎo)致血量把控不準(zhǔn)而影響血細(xì)胞的觀察。

    3 血液涂片

    將血液涂布在載玻片上,此方法可以采取用載玻片1的邊緣去推片或拉片的方法[3]。若用左手固定載玻片2,將血滴加在載玻片2右側(cè)中央時(shí),可以采用350傾斜使載玻片1先與血滴接觸,等血滴沿載玻片1的邊緣慢慢滲透并擴(kuò)散開(kāi)。然后將載玻片1勻速向載玻片2的左側(cè)勻速推動(dòng),直到將血滴推完為止。這樣血液就均勻涂布在載玻片2上了(如圖1所示)。反之,若將血滴滴加在載玻片2的左側(cè)中央時(shí),可以采用350度傾斜,同樣使載玻片1先與血滴接觸,等血滴沿載玻片1的邊緣慢慢滲透并擴(kuò)散開(kāi)。然后將載玻片1勻速向載玻片2的右側(cè)拉動(dòng)直到將血滴拉完為止,這樣血液就均勻涂布在載玻片2上了。此操作過(guò)程中等待血液沿載玻片1邊緣擴(kuò)散,這一現(xiàn)象非常重要(如圖2所示)。若不等血滴擴(kuò)散就推片或拉片,就會(huì)造成血細(xì)胞堆積和重疊現(xiàn)象。若速度控制不好,會(huì)導(dǎo)致血膜涂布不均勻,有的區(qū)域有,有的區(qū)域無(wú)的斑馬線現(xiàn)象,而致使顯微鏡下無(wú)法觀察血細(xì)胞。

    4 干燥

    將血液涂布在載玻片2上面后,涂片制成后,應(yīng)在空氣中快速搖動(dòng)或扇干,將血膜干燥并固定附著在載玻片上,防止細(xì)胞皺縮變形或因空氣潮濕而溶血。

    5 染色

    采用瑞氏-姬母薩染色法[4],瑞氏-姬姆薩染液由珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn),瑞氏-姬姆薩染液試劑由瑞氏-姬姆薩染液(A液),磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)(B液)組成,在pH值為6.8的緩沖液中,血液中的大多數(shù)蛋白質(zhì)均達(dá)到或接近自己的等電點(diǎn),因而能很好地吸附相應(yīng)的染料而著色。

    瑞氏-姬姆薩染色液是利用Romanowsky Stain技術(shù)原理改良而成的。細(xì)胞的著色過(guò)程是染料透入被染物并存留其內(nèi)部的一種過(guò)程,此過(guò)程既有物理吸附作用,又有化學(xué)親和作用。各種細(xì)胞及細(xì)胞的各種成分由于其化學(xué)性質(zhì)不同,對(duì)瑞氏-姬姆薩染色液中的酸性染料(曙紅)和堿性染料(亞甲藍(lán))的親和力也不一樣。因此,標(biāo)本涂片經(jīng)瑞氏-姬姆薩染色液染色后,相應(yīng)各類細(xì)胞呈現(xiàn)不同的著色,從而達(dá)到辨別其形態(tài)特征的目的。大一新生第一次接觸到,應(yīng)向他們說(shuō)明它包括嗜酸性染料和嗜堿性染料兩部分,因此染色后,細(xì)胞中嗜酸性物質(zhì)呈紅色,嗜堿性物質(zhì)呈藍(lán)色,嗜中性物質(zhì)呈紫紅色,這對(duì)正確理解血涂片上不同種類血細(xì)胞呈現(xiàn)不同顏色有較好的幫助。

    染色方法:滴加A液約0.5~0.8mL于涂片上,染色1min;再將B液滴加于A液上(滴加量為A液的2~3倍),以洗耳球吹出微風(fēng)使液面產(chǎn)生漣漪狀,使兩液充分混合,染色4~10min。切記不要使染液蒸發(fā)干,若染色時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或染液蒸發(fā)干,就會(huì)導(dǎo)致染料附著太嚴(yán)重,而無(wú)論怎么水洗都洗不干凈。

    另外,染色時(shí)間需視何種標(biāo)本、涂片厚薄、有核細(xì)胞多少、何種細(xì)胞及室溫等而定;氣溫較低時(shí),可適當(dāng)延長(zhǎng)染色時(shí)間。染色結(jié)果如出現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞變堿,則考慮是否染色時(shí)間太長(zhǎng)所致。染液量需充足,勿使染液蒸發(fā)干燥,以防染料沉著于涂片上。做血細(xì)胞染色時(shí),當(dāng)天氣寒冷或濕度較大時(shí),應(yīng)于37℃溫箱中保溫促干,以免細(xì)胞變形縮小或在染色時(shí)脫片。染液若被裝載于染色機(jī)上使用,B液的開(kāi)封使用時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以免因管路和空氣污染出現(xiàn)絮狀沉淀。染色的好壞固然與涂片的好壞有關(guān),但染料的質(zhì)量、緩沖液的pH值及染色時(shí)間等對(duì)其也有重要的影響,而緩沖液的pH值對(duì)血涂片染色的影響常被忽視。

    6 水洗

    水洗(沖洗時(shí)不能先倒掉染液,應(yīng)以流水沖去,以防有沉渣沉淀在標(biāo)本上),水洗時(shí)水流要細(xì)小,沿玻片2的邊緣緩慢沖洗,不能用大水流正對(duì)血膜直沖,這樣會(huì)導(dǎo)致血膜沖落。水洗1~2min后要在顯微鏡下觀察一下水洗的效果,若沒(méi)洗干凈,再繼續(xù)水洗,水洗過(guò)程中要勤觀察,直到洗干凈為止,不然有可能會(huì)導(dǎo)致洗不干凈或沖洗時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而導(dǎo)致顏色變淡。

    7 鏡檢

    等水洗完成后,用吸水紙吸掉玻片2上的水分,注意不要擦拭,以免擦掉血膜。將吸掉水分的玻片2置于顯微鏡載物臺(tái)上進(jìn)行鏡檢。紅細(xì)胞呈粉紅色,白細(xì)胞漿中顆粒清楚,并顯示出各種細(xì)胞特有的色彩,細(xì)胞核染紫紅色,核染色質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚。白細(xì)胞形態(tài)上與血細(xì)胞涂片的白細(xì)胞相同,一般白細(xì)胞的多寡,提示發(fā)炎程度的高低,對(duì)醫(yī)師的診斷具有一定的指標(biāo)作用[5]。血細(xì)胞的染色、白細(xì)胞中的特殊顆粒均顯示清晰,紅細(xì)胞內(nèi)的血紅蛋白染成桔紅色[6],中性粒細(xì)胞顆粒染成藍(lán)紫至紫紅色,嗜酸性粒細(xì)胞顆粒染成鮮紅色,嗜堿性粒細(xì)胞顆粒染成深紫藍(lán)色,淋巴細(xì)胞核染成深藍(lán)紫色,胞質(zhì)染成天藍(lán)色。單核細(xì)胞核染成淺紫色,胞質(zhì)染成灰藍(lán)色[7]。

    總之,采血、血液取用、涂片、干燥、染色、水洗等過(guò)程每一步都至關(guān)重要,稍有疏忽,就會(huì)全盤皆輸。因此每一步都要嚴(yán)格把握,不可粗心大意,更不能急于求成。以確保實(shí)驗(yàn)過(guò)程順利進(jìn)行,力求制作出清晰、好辨認(rèn)、標(biāo)準(zhǔn)的血液涂片。

    參考文獻(xiàn):

    [1] 方向,蔣婧.血液涂片細(xì)胞形態(tài)學(xué)聯(lián)合全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀在血常規(guī)檢驗(yàn)中的應(yīng)用價(jià)值分析[J].黑龍江醫(yī)學(xué),2021,45(23):2549-2551.

    [2] 南京農(nóng)學(xué)院.家畜生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,1982:62-63.

    [3] 周其虎.動(dòng)物解剖生理[M].第3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2019.

    [4] 董常生.家畜解剖學(xué)[M].第3版.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社,2001.

    [5] 丁靜,黃世霜,胡延生.骨髓涂片、印片與切片檢查在基層醫(yī)院診斷血液疾病中的應(yīng)用[J].福建醫(yī)藥雜志,2020,42(3):172-174.

    [6] 劉春亮.血涂片分析在血常規(guī)檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南,2021,19(18):89-90.

    [7] 鄭秀詩(shī).血涂片染色方法的研究進(jìn)展知多少[J].家庭生活指南,2019(5):159.

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