HPLC 法測定對乙酰氨基酚雜質(zhì)含量

支永強(qiáng)，劉曉蓮，馬寧寧，韓 嘯，楊藏軍，王俊凱，代國愛，郝新庭

（河北冀衡藥業(yè)股份有限公司，河北 衡水 053400）

0 引言

對乙酰氨基酚（Paracetamol） 是由對氨基苯酚和冰醋酸通過酰化反應(yīng)生產(chǎn)而成，又名撲熱息痛，為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，無臭，味微苦，是一種臨床上常用的解熱鎮(zhèn)痛藥。

對乙酰氨基酚解熱鎮(zhèn)痛的作用與阿司匹林相似，但基本無抗炎作用，對血小板及凝血機(jī)制無影響，另外，對乙酰氨基酚還具有解熱作用緩慢而持久、刺激性較小、極少有過敏反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。此外，其還可用于藥物撲炎痛的合成、作為有機(jī)合成的中間體和過氧化氫的穩(wěn)定劑等。

企業(yè)對于科研項(xiàng)目成果轉(zhuǎn)化的意識較淡薄。主要體現(xiàn)在兩方面：科研課題大多集中于理論層面方面，與解決實(shí)際問題有關(guān)的科研項(xiàng)目仍然較少，許多項(xiàng)目缺乏市場分析，容易造成科研成果與市場需求不匹配，成果轉(zhuǎn)化難度加深；另一方面，科研項(xiàng)目管理大多局限于完成結(jié)項(xiàng)驗(yàn)收，缺乏對階段性成果和最終成果的凝結(jié)與轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致科研項(xiàng)目成果沒有得到及時的應(yīng)用和推廣。

目前，對乙酰氨基酚已成為世界上應(yīng)用最廣泛的藥物之一，是國際醫(yī)藥市場上頭號解熱鎮(zhèn)痛藥，同時也是我國原料藥中產(chǎn)量最大的品種之一。

1.1.3 儀器:日立7020型全自動生化分析儀;Beckman-Coulter MAXM血球分析儀;電子稱(常熟市雙杰測試儀器廠產(chǎn)品);萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司產(chǎn)品);Thermo BIOFUGE PRIMO R型離心機(jī)。

參照中國藥典2020 版要求，當(dāng)使用高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC） 檢測對乙酰氨基酚原料藥時，時常檢測到對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)峰，有時導(dǎo)致對乙酰氨基酚質(zhì)量不合格，需返工處理。所以我們采用HPLC法測定對乙酰氨基酚二聚體來達(dá)到提高產(chǎn)品質(zhì)量的目的。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

1.1 主要實(shí)驗(yàn)儀器

UltiMate 3000 型高效液相色譜，賽默飛世爾科技（中國） 有限公司。

KQ-250DB 型數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司。

Dsent=0.001918dcip(-1)+0.000884dcip(-2)-0.461604dsent(-1)-0.708382dsent(-2)+0.019000(M)

PURELAB flex 型超純水儀，威立雅水處理技術(shù)（上海） 有限公司。

BSA224S 型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器（北京） 有限公司。

(2)離散數(shù)據(jù)網(wǎng)格化→參數(shù)設(shè)置：搜索半徑為采樣點(diǎn)距的2～5倍。(RX=2000，RY=2000，冪指數(shù)加權(quán)，指數(shù)因子10)。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑

磷酸氫二鈉，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

2.范圍拓展。一方面，家庭作為穩(wěn)定的社會支持系統(tǒng)，對社區(qū)服刑人員心理矯治的效果有輔助促進(jìn)作用，因此心理干預(yù)不再僅限于社區(qū)服刑人員，也包括其家庭成員，通過家庭心理咨詢改善了社區(qū)服刑人員與家庭成員之間的不良關(guān)系，減少了因家庭所造成的不良應(yīng)激，避免了家庭成員對社區(qū)服刑人員過多的指責(zé)或過分的關(guān)心，尤其是對未成年的社區(qū)服刑人員和暫予監(jiān)外執(zhí)行的社區(qū)服刑人員，有利于他們的社會功能修復(fù)，促使他們順利回歸社會。另一方面，村居社區(qū)矯正協(xié)管員聘用制度已覆蓋全區(qū)，協(xié)管員掌握心理咨詢知識有助于在走訪社區(qū)服刑人員時，通過觀察其表情和肢體語言，了解社區(qū)服刑人員的真實(shí)狀態(tài)。

進(jìn)樣量：20 μL。

磷酸二氫鈉，天津市大茂化學(xué)試劑廠。

10%四丁基氫氧化銨水溶液，上海麥克林生化科技有限公司。

甲醇，美國迪馬科技有限公司。

其它各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液中對乙酰氨基酚峰面積的0.5 倍（0.5%）。

檢測波長：245 nm。

2 方法與結(jié)果

2.1 對乙酰氨基酚二聚體結(jié)構(gòu)式

對乙酰氨基酚二聚體結(jié)構(gòu)式如圖1 所示。

2.2 色譜條件

色譜柱：辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（AcclaimTM120 C8，250 mm×4.6 mm×5 μm）。

流動相：以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 mL） - 甲醇（90∶10）為流動相。

我躡手躡腳地走上陽臺，生怕驚破了這場難得的精神“艷遇”。遠(yuǎn)遠(yuǎn)看去，曇花那海帶狀的綠葉上，一朵朵嬌嫩的花蕾似乎正在微微顫動著。那白玉般的花苞徐徐綻開，鵝黃色的花蕊悄悄地探出花苞，有如初降生的嬰兒滿帶著好奇打量著眼前的世界。漸漸地，片片花瓣如電影中的慢鏡頭一般完全展開，展現(xiàn)給我的是一種驚世駭俗的美麗！我不敢用手，只能用一種滿含溫柔的目光輕輕地觸摸著它們。

流速：1.0 mL/min。

柱溫：40 ℃。

(3)預(yù)埋螺栓控制器的設(shè)置。利用布置好的控制點(diǎn)，在控制點(diǎn)兩側(cè)斜插鋼筋，架設(shè)鋼管支架，兩端裝緊線器，抽緊緊線器上的鋼絲繩，使鋼絲繩位于控制軸線上。

其中，甲醇為色譜純，磷酸氫二鈉，磷酸二氫鈉，10%四丁基氫氧化銨水溶液均為分析純試劑。

樣品稀釋劑：甲醇∶水（4∶6）。

測繪新技術(shù)在建筑工程測量中的地位越來越重要，尤其是隨著建筑工程行業(yè)的規(guī)模不斷壯大其重要性越來越突出。但與此同時，傳統(tǒng)的測繪技術(shù)因?yàn)樾?、?zhǔn)確性和可靠性的問題很難再滿足建筑工程發(fā)展的需要。在這種狀況下，越來越多的新的測繪技術(shù)不斷涌現(xiàn)對推動測繪事業(yè)的發(fā)展以及提高建筑工程測量的準(zhǔn)確度和可靠性起到了重要作用。

理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算≥2000，雜質(zhì)二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.3 溶液配制

供試品溶液：取本品0.2 g，精密稱定，加溶劑（甲醇∶水為4∶6） 溶解并稀釋至10 mL 制成每1 mL 中約含20 mg 的溶液，作為供試品溶液。

對照溶液：另取對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)對照品10 mg，精密稱定，加溶劑（甲醇∶水為4∶6）溶解，并稀釋至100 mL 的容量瓶中。制成每1 mL中約含對乙酰氨基酚二聚體0.1 mg 溶液，作為對照品溶液。

精密量取對照品溶液與供試品溶液各1 mL，置同一100 mL 量瓶中，加溶劑（甲醇∶水為4∶6） 稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液。

選擇我院內(nèi)科1-3月份住院病人有便秘癥狀患者隨機(jī)選取60名,隨機(jī)分為2組,年齡60-92歲,平均年齡78.9歲,其中男33例,女27例,隨機(jī)分為2組,每組30例,2組患者(性別、年齡、病程等)資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,具有可比性。

系統(tǒng)適用性要求理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算≥2000，雜質(zhì)二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度應(yīng)符合要求。

精密量取供試品溶液與對照品溶液各20 μL,分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的4 倍。

供試品溶液的色譜圖中如有與對照品溶液中對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)保留時間一致的的色譜峰，按外標(biāo)法以峰面積計算，對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)峰面積≤對照品溶液中對乙酰氨基酚的峰面積的0.1 倍（0.1%）。

對乙酰氨基酚二聚體標(biāo)準(zhǔn)品，含量＞99%，TRC 多倫多研究化學(xué)品公司。

2.4 HPLC 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察

取空白溶劑20 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀。檢測結(jié)果表明，無其它色譜雜峰，對對乙酰氨基酚及對乙酰氨基酚二聚體的含量測定無明顯干擾，證明該方法專屬性良好。

2.4.2 線性關(guān)系考察

精密稱取對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品適量，加樣品稀釋劑溶解并稀釋成濃度為50、100、200、300、400、500 μg/mL 的6 個不同對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并依次編號。

我國的軍糧供應(yīng)工作已經(jīng)走上了制度化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化道路，軍糧管理、供應(yīng)和服務(wù)工作得到很大的發(fā)展?，F(xiàn)在紙制軍用糧票已經(jīng)被更先進(jìn)、更快捷的電磁卡所取代，紙制軍用糧票完成了歷史任務(wù)，在我黨我軍的歷史上為中國人民的解放事業(yè)和國防建設(shè)事業(yè)做出了重大貢獻(xiàn)，將被載入史冊，彪炳千秋，為后人銘記。

取上述各濃度的溶液20 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖并計算峰面積。得出的數(shù)據(jù)以峰面積為縱坐標(biāo)，以乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)的濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)線性關(guān)系圖如圖2所示。

由圖2 可以看出，在50 ～500 μg/mL 的線性范圍內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998，線性方程為y=0.525 x+10.595。

2.4.3 重復(fù)性考察

精密稱定對乙酰氨基酚二聚體標(biāo)準(zhǔn)品適量，配制成對乙酰氨基酚二聚體標(biāo)準(zhǔn)品0.4 mg/mL 的溶液，取上述溶液20 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6 針。結(jié)果表明，檢測液相檢測重復(fù)性良好，各峰面積RSD＜2.0%，符合分析方法學(xué)要求。對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)液相色譜圖譜如圖3 所示。

圖3 對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)液相色譜圖譜Fig.3 A liquid chromatography map of the acetaminophen dimer impurities

2.4.4 穩(wěn)定性考察

精密稱定對乙酰氨基酚二聚體標(biāo)準(zhǔn)品適量，加樣品稀釋劑稀釋成適當(dāng)濃度的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、18、24 h 各取20 μL，按照“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，與0 小時相比，24 h 溶液穩(wěn)定，峰面積RSD＜2%，符合方法學(xué)要求。且系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)表明，理論板數(shù)按對乙酰氨基酚峰計算＞2000，雜質(zhì)二聚體與對乙酰氨基酚峰的分離度＞1.5，分離度應(yīng)符合要求。

針對性產(chǎn)品的研發(fā)離不開大數(shù)據(jù)的收集反饋，更離不開創(chuàng)新研發(fā)實(shí)力的支持。他表示，未來倍豐鹽湖農(nóng)業(yè)科技將繼續(xù)發(fā)揮自身優(yōu)勢，不斷整合各方資源，向產(chǎn)業(yè)鏈上下游持續(xù)延伸，與各科研院所不斷加強(qiáng)合作，在現(xiàn)有的產(chǎn)品基礎(chǔ)上加大創(chuàng)新研發(fā)力度，不斷推陳出新，為中國農(nóng)民提供越來越多的、具有針對性的優(yōu)質(zhì)肥料。

2.4.5 樣品的檢測

按“2.2”項(xiàng)下溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)，取六批樣品進(jìn)行有關(guān)對乙酰氨基酚二聚體雜質(zhì)的檢測，雜質(zhì)的量分別為0.05%、0.07%、0.08%、0.08%、0.06%、0.05%，均符合中國藥典2020 版要求。

3 結(jié)語

本文以辛烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（250 mm×4.6 mm，5μm） 為固定相；以磷酸鹽緩沖液（取磷酸氫二鈉8.95 g，磷酸二氫鈉3.9 g，加水溶解至1000 mL，加10%四丁基氫氧化銨溶液12 mL） - 甲醇（90 ∶10） 為流動相；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；檢測波長：245 nm。該方法對乙酰氨基酚雜質(zhì)線性關(guān)系良好，線性方程：y =0.525 x +10.595，R2=0.9998。實(shí)驗(yàn)操作簡單，簡便快速、準(zhǔn)確可靠的測定對乙酰氨基酚以及乙酰氨基酚雜質(zhì)的含量，為提高對乙酰氨基酚產(chǎn)品的質(zhì)量提供了保障。