12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑液相色譜分析

白 亮，馬 超，趙宜君，徐 軍，2*，陳 昶，2*

（1.河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司，北京 100193；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193)

蟲螨腈又名溴蟲腈（Chlorfenapyr），作用于昆蟲細(xì)胞的線粒體，主要抑制二磷酸腺苷（ADP）向三磷酸腺苷（ATP）的轉(zhuǎn)化[1-2]，其具有胃毒、觸殺作用與內(nèi)吸活性，對(duì)鱗翅目、同翅目等多重害蟲的防治具有高效性[3-5]，因而被廣泛應(yīng)用于蔬菜、水果等作物[6-7]。多殺菌素（Spinosad）是一種作用于煙堿型乙酰膽堿受體的抗生素類藥劑[8]，其對(duì)鱗翅目[9-10]等靶標(biāo)害蟲同樣具有優(yōu)異的防效。關(guān)于蟲螨腈、多殺菌素單劑分析方法已有研究[11]，但二者混配制劑的高效液相色譜分析方法未見報(bào)道。本研究采用高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑中的蟲螨腈和多殺菌素。該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，是較為實(shí)用的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇（色譜純），默克（德國(guó)）股份有限公司；乙腈（色譜純），美國(guó)飛世爾科技公司；氨水（分析純），北京廣達(dá)恒益科技有限公司；蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.0%）和多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)品（純度≥92.0%），沈陽化工研究院；12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑（10%蟲螨腈＋2%多殺菌素），河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters e2695高效液相色譜儀、2489UV-Vis紫外檢測(cè)器，沃特世科技（上海）有限公司；C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），北京海誠(chéng)中儀科技有限公司；UV-6100紫外分光光度計(jì)，上海元析儀器有限公司；真空抽濾器（內(nèi)置孔徑為0.45 μm的水系濾膜），天津科億龍?jiān)囼?yàn)設(shè)備有限公司；0.45 μm有機(jī)濾膜，上海密粒膜分離技術(shù)有限公司；AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.3 液相色譜分析條件

流動(dòng)相：甲醇-乙腈-緩沖鹽（42∶42∶16，V/V/V），其中，緩沖鹽為水-氨水（300∶1，V/V），經(jīng)真空抽濾器抽濾除雜，并采用超聲排空液體中氣泡；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進(jìn)樣體積：5 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：245 nm。

1.4 溶液配制

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

稱取多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g（精確至0.000 2 g），加入適量甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，超聲震蕩20 min后，取出冷卻至室溫；準(zhǔn)確稱取蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)品0.05 g（精確至0.000 2 g），用甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，隨后準(zhǔn)確量取20 mL上述多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液加入至蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液中，用甲醇定容后上下顛倒混勻，制得多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為0.1 mg/mL，蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.5 mg/mL，過濾后存于4℃冰箱，待測(cè)。

1.4.2 試樣溶液的配制

精確稱取含多殺菌素和蟲螨腈的試樣0.5 g（精確至0.000 2 g），加入適量甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，超聲震蕩20 min后，取出冷卻至室溫，待樣品完全溶解后用甲醇定容，過濾后裝入進(jìn)樣瓶，存于4℃冰箱，待測(cè)。

1.5 有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)測(cè)定

在1.3中檢測(cè)樣品有效成分的分析條件下平衡儀器，使儀器達(dá)到最佳使用狀態(tài)（基線波動(dòng)范圍應(yīng)小于10-3），取1.4中配制好的標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液進(jìn)行測(cè)定。

1.6 計(jì)算

樣品中的有效成分多殺菌素和蟲螨腈的質(zhì)量分?jǐn)?shù)w按式（1）進(jìn)行計(jì)算。

式中：A1為標(biāo)樣溶液中蟲螨腈（多殺菌素）峰面積的平均值，mAU·min；A2為試樣溶液中蟲螨腈（多殺菌素）峰面積的平均值，mAU·min；m1、m2分別為蟲螨腈（多殺菌素）標(biāo)樣、試樣質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中蟲螨腈（多殺菌素）的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；f為稀釋倍數(shù)（f蟲螨腈=1，f多殺菌素=5）。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

使用紫外分光光度計(jì)分別對(duì)蟲螨腈和多殺菌素的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到在200～300 nm波長(zhǎng)范圍的紫外光譜圖（圖1）。在245 nm波長(zhǎng)條件下，蟲螨腈和多殺菌素均有較強(qiáng)的吸收蜂，且雜峰較少。因此，本方法選擇245 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 蟲螨腈和多殺菌素的紫外吸收光譜圖

2.2 流動(dòng)相的選擇

在12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測(cè)中，對(duì)流動(dòng)相各分相的比例進(jìn)行調(diào)整，觀察峰型的變化和出峰的先后順序，來確定流動(dòng)相的最佳配比。最終結(jié)果表明，當(dāng)V乙腈∶V甲醇∶V緩沖鹽為42∶42∶16時(shí)，色譜峰型較好（圖2、圖3），出峰較快，分離效果最佳，滿足分析檢測(cè)要求。

圖2 蟲螨腈和多殺菌素標(biāo)樣液相色譜圖

圖3 蟲螨腈和多殺菌素試樣液相色譜圖

2.3 分析方法的線性關(guān)系

依次吸取多殺菌素和蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL進(jìn)行濃度稀釋，制得0.2～2.0 mg/mL多殺菌素和0.05～0.5 mg/mL的蟲螨腈系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。之后，用1.3所述的色譜分析條件對(duì)各濃度的標(biāo)樣溶液進(jìn)行測(cè)定并記錄峰面積。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出多殺菌素和蟲螨腈的線性回歸方程。多殺菌素的回歸方程為y=1 028 812.278 9x-303 559.850 3，R2=0.999 8；蟲螨腈的回歸方程為y=424 359.738 1x＋55 725.761 9，R2=0.999 2，兩者的R2值均大于0.999。結(jié)果表明，多殺菌素和蟲螨腈均具有良好的線性關(guān)系。

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜檢測(cè)條件下，對(duì)12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑試樣進(jìn)行n（n≥5）次獨(dú)立分析檢測(cè)。由檢測(cè)結(jié)果可知，樣品中蟲螨腈的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%，多殺菌素的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.62%，分別小于Horwitz公式[12]21-0.5logC×0.67（其中C為樣品中有效成分含量的平均值）的計(jì)算值0.947 5和1.207。以上結(jié)果均符合分析標(biāo)準(zhǔn)要求[12]，說明該分析方法的精密度良好（表1）。

表1 分析方法的精密度檢測(cè)結(jié)果（n=5）

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

準(zhǔn)確稱取5份12%蟲螨腈·多殺菌素的試樣，再分別加入多殺菌素標(biāo)準(zhǔn)品（約0.05 g）和蟲螨腈標(biāo)準(zhǔn)品（約0.05 g），對(duì)其質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。多殺菌素和蟲螨腈的平均回收率分別為96.29%和98.29%，均較高，說明該分析方法的準(zhǔn)確度良好。

表2 分析方法的準(zhǔn)確度測(cè)定結(jié)果（n=5）

3 結(jié)論

本文建立了能夠同時(shí)對(duì)12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑中的有效成分蟲螨腈和多殺菌素進(jìn)行檢測(cè)的高效液相色譜分析方法，并對(duì)此方法進(jìn)行合理的方法驗(yàn)證。結(jié)果表明，蟲螨腈和多殺菌素有效成分的分離效果較好，精密度較高，檢測(cè)方法重現(xiàn)性良好，高效，易操作，因此該方法可用于12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑產(chǎn)品的有效成分的定量分析。