萬壽菊提取物對(duì)太行雞抗氧化能力及腸道形態(tài)的影響

李朋帥，喬夢(mèng)澤，張 雪，郭相麗，朱亞昊，周 澤，陳祥宇，劉新芳，陳 輝，陳一凡*

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河北保定 071000；2.晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司，河北邯鄲 057250）

隨著人們生活水平由溫飽型步入小康型，消費(fèi)者對(duì)蛋雞和肉雞的產(chǎn)品品質(zhì)越來越重視，對(duì)各種產(chǎn)品的銷售需求實(shí)現(xiàn)了由數(shù)量向質(zhì)量的轉(zhuǎn)變。有研究表明，萬壽菊中含有豐富的類胡蘿卜素，其鮮重含量可超過2 mg/g鮮重，其中葉黃素和葉黃素酯占大多數(shù)，因此萬壽菊是葉黃素優(yōu)質(zhì)的植物來源。葉黃素是存在于金盞菊、萬壽菊等植物中的一種天然物質(zhì)，家禽自身并不能合成葉黃素，可通過在日糧中添加葉黃素提高家禽的抗氧化能力。葉黃素是一種脂溶性功能活性成分，可延緩早期動(dòng)脈硬化、預(yù)防癌癥和年齡相關(guān)性黃斑變性等疾病并具有保護(hù)視網(wǎng)膜的生理作用，另外葉黃素具有優(yōu)良的清除超氧陰離子和過氧化物的能力，適合作為天然的抗氧化劑。有研究表明，高溫條件下（33℃）在日糧中添加葉黃素和高玉米黃質(zhì)能夠顯著提高黃羽肉雞的抗氧化能力，從而緩解機(jī)體的熱應(yīng)激。目前萬壽菊提取物在太行雞中的研究和應(yīng)用較少。太行雞是河北省當(dāng)?shù)貥O具特色的本土雞種，56 周齡太行雞各方面機(jī)能發(fā)育完善，機(jī)體指標(biāo)變化易受日糧影響，且適應(yīng)性強(qiáng)、抗病力強(qiáng)、耐粗飼，因此，本研究針對(duì)56 周齡太行雞展開試驗(yàn)。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)太行雞日糧中200 mg/kg 萬壽菊提取物可顯著提高產(chǎn)蛋率和平均蛋重；日糧中添加萬壽菊提取物對(duì)平均日采食量無顯著影響；添加200、300 mg/kg 萬壽菊提取物可改善肝臟中抗氧化指標(biāo)。在此基礎(chǔ)上，本試驗(yàn)在太行雞日糧中添加100、200、300 mg/kg 萬壽菊提取物，研究其對(duì)太行雞血清抗氧化指標(biāo)和腸道形態(tài)的影響，為萬壽菊提取物在太行雞中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 本試驗(yàn)所用萬壽菊提取物購自晨光生物科技有限公司，主要成分為天然葉黃素（源自萬壽菊），載體為石粉、二氧化硅、該產(chǎn)品成分分析保證值：葉黃素20 g/kg、水分8.0%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 本試驗(yàn)選取288 只體重相近、健康狀況良好的56 周齡太行雞，隨機(jī)分為4 組，分別是對(duì)照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、試驗(yàn)I 組（基礎(chǔ)日糧+100 mg/kg 萬壽菊提取物）、試驗(yàn)II 組（基礎(chǔ)日糧+200 mg/kg 萬壽菊提取物）、試驗(yàn)III 組（基礎(chǔ)日糧+300 mg/kg 萬壽菊提取物），每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18 只。試驗(yàn)期共35 d，包括7 d 預(yù)飼期和28 d 正試期?；A(chǔ)飼糧參照《蛋雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)》（NY/T 33-2004）和NRC（1994）《家禽營養(yǎng)需要》配制，基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)物質(zhì)含量見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 太行雞采用3 層階梯籠養(yǎng)，每日08:00、15:00 分別投喂1 次，自由采食，自由飲水。試驗(yàn)地點(diǎn)在河北桃木疙瘩農(nóng)業(yè)科技股份有限公司，光照時(shí)間為16 h，光照強(qiáng)度為15 lx，試驗(yàn)在冬季進(jìn)行，雞舍溫度在5℃左右。按正常情況接種疫苗，每天觀察蛋雞的采食、糞便和健康狀況。

1.4 樣品采集與檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 抗氧化能力 在試驗(yàn)第14 和第28 天，每組每個(gè)重復(fù)選取2 只太行雞進(jìn)行頸靜脈采血，收集于離心管中，3 000 r/min 離心15 min，在-20℃條件下保存離心后的上層清液。用酶聯(lián)免疫法測(cè)定太行雞血清的丙二醛（MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和總抗氧化活性（T-AOC），上述測(cè)定指標(biāo)所用試劑盒均購自上海江萊生物科技有限公司，按照說明書進(jìn)行操作。

1.4.2 腸道形態(tài) 試驗(yàn)第28 天，每組每重復(fù)選取2 只太行雞，禁食12 h，進(jìn)行屠宰?？漳c和十二指腸樣品采集和測(cè)定方法參照劉禹辰等。測(cè)定指標(biāo)包括腸絨毛高度（VH）、黏膜隱窩深度（CD）和腸道肌層厚度（MT），并計(jì)算絨毛高度/隱窩深度（V/C）。樣品由成都里來生物科技有限公司測(cè)定。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 采用Excel 對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理與初步計(jì)算處理，使用SPSS 19.0 進(jìn)行單因素方差分析(Oneway ANOVA)，用Duncan's 法進(jìn)行多重比較，<0.05為差異顯著，>0.05 為差異不顯著，結(jié)果表示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差。同時(shí)采用回歸（R）程序中曲線估計(jì)模型進(jìn)行效應(yīng)分析，0.05≤≤0.1 表示回歸關(guān)系趨于顯著，≤0.05 表示回歸關(guān)系顯著。

2 結(jié)果

2.1 萬壽菊提取物對(duì)太行雞抗氧化能力的影響 由表2可看出，試驗(yàn)第14 天，與對(duì)照組相比，200、300 mg/kg萬壽菊提取物組太行雞的血清MDA 含量顯著降低；試驗(yàn)組的血清GSH-Px 含量顯著升高，且300 mg/kg 萬壽菊提取物組血清GSH-Px 含量最高；與對(duì)照組和100 mg/kg萬壽菊提取物組相比，300 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的血清SOD 含量顯著升高；200、300 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的血清T-AOC 活性顯著升高。

表2 萬壽菊提取物對(duì)太行雞抗氧化能力的影響

試驗(yàn)第28 天，與對(duì)照組相比，200、300 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的血清MDA 含量顯著降低；試驗(yàn)組太行雞的血清GSH-Px 和SOD 含量顯著升高，且300 mg/kg 萬壽菊提取物組最高；200、300 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的血清T-AOC 活性顯著高于對(duì)照組和100 mg/kg 萬壽菊提取物組。

2.2 萬壽菊提取物對(duì)太行雞腸道形態(tài)的影響 由表3 可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組太行雞的空腸和十二指腸MT 均無顯著變化，300 mg/kg 萬壽菊提取物組的空腸VH 無顯著差異，100、200 mg/kg 萬壽菊提取物組的空腸VH 顯著降低；添加300 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的空腸V/C 值無顯著差異，100、200 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的空腸V/C 值顯著降低；200 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的空腸CD 顯著升高。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組太行雞的十二指腸VH 和V/C 顯著降低；添加100 和200 mg/kg 萬壽菊提取物組太行雞的十二指腸CD 顯著升高。

表3 萬壽菊提取物對(duì)太行雞腸道形態(tài)的影響

3 討 論

3.1 萬壽菊提取物對(duì)太行雞抗氧化能力的影響 研究表明，葉黃素可預(yù)防冠心病，并可用于治療腫瘤和心血管硬化等慢性疾病，具有抗氧化功能。超氧陰離子自由基、羥自由基以及單線態(tài)氧具有強(qiáng)氧化性，可損害機(jī)體組織和細(xì)胞，甚至攻擊DNA 線粒體，而葉黃素可使活性氧（ROS）淬滅來去除自由基對(duì)機(jī)體生物膜及炎細(xì)胞的損害，從而發(fā)揮其生物功能。葉黃素可維持體內(nèi)生理生化反應(yīng)的正常進(jìn)行，表現(xiàn)在其可以有效去除并中和氧自由基和脂質(zhì)過氧化物來實(shí)現(xiàn)自由基反應(yīng)和過氧化反應(yīng)的平衡。上述研究結(jié)果表明萬壽菊提取物在太行雞體內(nèi)可有效實(shí)現(xiàn)對(duì)活性氧自由基的抑制作用，阻止機(jī)體內(nèi)正常細(xì)胞被ROS 破壞，使太行雞體內(nèi)自由基的產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡。GSH-Px 和SOD 等抗氧化酶可將體內(nèi)形成的過氧化物清除，在抗氧化體系中起著重要作用，且MDA 含量是反映機(jī)體抗氧化潛在能力的重要參數(shù)。在肉雞或蛋雞日糧中添加萬壽菊提取物可改善機(jī)體肝臟及血清的抗氧化指標(biāo)，表現(xiàn)在可顯著降低MDA 在家禽體內(nèi)的富集，顯著提高體內(nèi)GSH-Px 和SOD 等抗氧化酶的活性，其機(jī)理為GSH-Px 和SOD 等抗氧化酶可利用其氧化還原作用將機(jī)體形成的過氧化物轉(zhuǎn)變?yōu)槎竞^低或者無毒物質(zhì)，因而可改善家禽的抗氧化性能。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在太行雞日糧中添加200、300 mg/kg 萬壽菊提取物能夠有效改善血清中MDA、GSH-Px、SOD 和T-AOC 含量，從而有效提高太行雞的抗氧化能力；此外，本課題組還研究發(fā)現(xiàn)添加200、300 mg/kg 萬壽菊提取物可改善太行雞肝臟中抗氧化指標(biāo)，進(jìn)而提高抗氧化能力，這與李麗平等和Rajput等研究葉黃素對(duì)家禽的抗氧化性能有積極效果的結(jié)果一致。主要機(jī)制還是歸結(jié)于葉黃素自身的抗氧化能力，即葉黃素作可通過自身的還原作用來中和ROS，這為萬壽菊提取物產(chǎn)品在太行雞中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

3.2 萬壽菊提取物對(duì)太行雞腸道形態(tài)的影響 目前，有關(guān)萬壽菊提取物對(duì)太行雞腸道形態(tài)的報(bào)道較少。小腸的腸道形態(tài)和黏膜結(jié)構(gòu)不僅影響消化液的分泌，而且對(duì)各類養(yǎng)分的消化吸收起著重要作用，是動(dòng)物攝入營養(yǎng)的最主要場(chǎng)所。腸絨毛使得小腸對(duì)養(yǎng)分消化吸收的面積增大，而隱窩深度與腸道上皮分泌細(xì)胞的成熟有關(guān)，故CD 和VH 可用來衡量家禽腸道消化、吸收和分泌功能。正常飼養(yǎng)狀態(tài)下，在適當(dāng)范圍內(nèi)，VH 越高，表明腸道對(duì)各類養(yǎng)分的消化吸收能力越強(qiáng)，而CD 越淺，表明腸上皮組織分泌消化液的能力越強(qiáng)；V/C 值與腸道的消化吸收功能呈正比例關(guān)系。蔣嬋等和陳祥宇等研究均表明，在肉雞或蛋雞日糧中添加植物提取物能夠加快家禽腸道發(fā)育及保障腸道形態(tài)和黏膜結(jié)構(gòu)的完整性。而在本試驗(yàn)中，在太行雞日糧中添加100、200 mg/kg 萬壽菊提取物可降低太行雞腸道VH 和V/C比值，增加CD。本試驗(yàn)結(jié)果與前人研究植物提取物對(duì)腸道形態(tài)的影響結(jié)果并不一致，其原因可能是不同植物中的主要成分作用不同所致。麻瘋樹葉提取物活性的主要成分為多酚，復(fù)合植物提取物主要成分為大蒜提取物和蒲公英，這些主要成分對(duì)家禽腸道形態(tài)及健康具有改善作用。而本試驗(yàn)中萬壽菊提取物的主要成分為葉黃素，葉黃素具有很強(qiáng)的抗氧化性，可能對(duì)家禽機(jī)體抗氧化方面的影響更為突出，但也不能完全表明對(duì)太行雞腸道形態(tài)和消化吸收沒有改善作用。Xu 等研究表明，較深的隱窩可以實(shí)現(xiàn)絨毛的快速更新，以應(yīng)對(duì)腸道炎癥及內(nèi)毒素侵害等，可減少外來攻擊對(duì)腸道的損傷作用，保證腸道消化吸收的正常進(jìn)行。本試驗(yàn)在冬天進(jìn)行，試驗(yàn)雞可能處于冷應(yīng)激狀態(tài)。因此，在本試驗(yàn)條件下，日糧中添加100 或200 mg/kg 的萬壽菊提取物組可顯著提高太行雞腸道CD，降低腸道VH 和V/C，從另一個(gè)角度來說，可能會(huì)通過絨毛快速更新，減少應(yīng)激對(duì)腸道的損傷作用，可能是有利于應(yīng)激狀態(tài)下太行雞的腸道消化吸收，但需要進(jìn)一步研究證明。

4 結(jié)論

在本試驗(yàn)條件下，在日糧中添加200 或300 mg/kg萬壽菊提取物可顯著提高太行雞的抗氧化能力；日糧中添加100 或200 mg/kg 萬壽菊提取物提高太行雞腸道CD，降低腸道VH 和V/C，但是否對(duì)太行雞消化吸收有利還需進(jìn)一步試驗(yàn)研究。綜上，推薦適宜添加量為200 mg/kg。