小鼠乳腺炎模型的建立及中草藥防治研究進(jìn)展

李 婷，范秋雨,2，李秀梅，劉魏魏，謝 飛，王秀敏*，戴小楓

（1.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，北京 100081；2.北京農(nóng)學(xué)院動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206）

奶牛乳房炎即乳腺炎，是奶牛乳腺受到微生物感染、物理及化學(xué)等因素的刺激所誘發(fā)的一種炎癥性反應(yīng)。奶牛乳房炎一方面會造成產(chǎn)奶量急劇下降，另一方面會導(dǎo)致乳產(chǎn)品質(zhì)量下降，不僅對奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，甚至?xí)：Φ饺祟惤】怠Ｄ壳?，對奶牛乳房炎的發(fā)病機(jī)制及其復(fù)雜的臨床發(fā)展過程尚不清楚，致使相關(guān)研究工作進(jìn)展較為緩慢?？蒲腥藛T需要通過構(gòu)建乳房炎模型來對其進(jìn)行相關(guān)研究，但直接在奶牛上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究費(fèi)用較高，且無法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化管理，這在一定程度上影響了對乳房炎的研究。目前，國內(nèi)外科研人員通過建立小鼠乳腺炎疾病模型，對奶牛乳腺炎模型進(jìn)行模擬以及研究其相關(guān)機(jī)理，小鼠乳腺炎模型具有耗時少、效率高及性價比高等優(yōu)點(diǎn)，已被廣大科研人員接受及采用。本文對小鼠乳腺炎模型的構(gòu)建、中草藥的防治機(jī)理及存在的問題等進(jìn)行綜述，以期為開發(fā)中草藥防治奶牛乳腺炎提供理論參考。

1 小鼠乳腺炎疾病模型的建立

小鼠與奶牛的乳腺結(jié)構(gòu)相類似，因此利用小鼠可以全面地模擬奶牛乳房炎的病因?qū)W、病理學(xué)和治療學(xué)。研究表明，通過病原菌、脂多糖LPS、腸道菌群移植等方法成功建立了小鼠乳腺炎模型。

1.1 致病菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎模型 據(jù)報(bào)道，導(dǎo)致奶牛發(fā)生乳腺炎的病原微生物達(dá)150 多種，包括接觸傳染性病原菌（如葡萄球菌、鏈球菌等）和環(huán)境性病原菌（如大腸桿菌、牛棒狀桿菌等），其中，金黃色葡萄球菌、鏈球菌及大腸桿菌占80% 以上，已被成功地用于小鼠乳腺炎疾病模型的構(gòu)建。

站永波在母鼠產(chǎn)后60 h 后與仔鼠分離，72 h 時在第4 對乳腺內(nèi)灌注金黃色葡萄球菌和大腸桿菌混合菌懸液，結(jié)果顯示，感染24 h 后小鼠腺泡結(jié)構(gòu)被破壞，乳腺泡上皮細(xì)胞脫落、溶解壞死，出現(xiàn)中性粒細(xì)胞浸潤和水腫，可見混合菌誘導(dǎo)了急性小鼠乳腺炎的發(fā)生。謝菲等在BALB/c 母鼠第4 對乳腺分別注入50 μL 細(xì)菌懸液（奶牛乳腺炎源金黃色葡萄球菌量為10～10CFU），結(jié)果顯示，10CFU 攻菌組的小鼠乳腺炎發(fā)病率為100%，乳腺內(nèi)細(xì)菌數(shù)量較多，乳腺組織出現(xiàn)病變，且未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。由此可知，金黃色葡萄球菌量為10CFU適于建立乳腺炎疾病模型。王瑩對小鼠進(jìn)行麻醉后，對第4 對乳房消毒，充分暴露乳頭，剪去乳頭最尖端0.5 mm，于乳房基部灌注金黃色葡萄球菌懸液，攻菌后，乳腺腺泡和小葉正常結(jié)構(gòu)消失，乳腺組織細(xì)胞變性和壞死，大量乳腺上皮細(xì)胞脫落及存有炎性細(xì)胞浸潤等；血清/組織中的炎性因子如白細(xì)胞介素6（IL-6）和腫瘤壞死因子（TNF-）、Toll 樣受體2（TLR2）蛋白、核因子B（NF-B）/ 絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平顯著上調(diào)。可見金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)了小鼠乳腺炎的發(fā)生。甘露等使用奶牛源地衣芽胞桿菌對小鼠乳腺組織進(jìn)行感染，發(fā)現(xiàn)小鼠乳腺組織出現(xiàn)了明顯的炎癥癥狀，在腺泡腔內(nèi)有大量的嗜中性粒細(xì)胞浸潤；實(shí)驗(yàn)組中的熱休克蛋白70（HSP70）和NF-B 表達(dá)量高于生理鹽水組和空白組，這表明芽孢桿菌能夠誘導(dǎo)小鼠乳腺炎的發(fā)生。徐進(jìn)等將金黃色葡萄球菌注射到小鼠第4 對乳腺，結(jié)果顯示，在模型組中，小鼠血清中的炎性因子如IL-6、TNF-和白細(xì)胞介素8（IL-8）顯著上調(diào)，說明病原菌能夠引起小鼠乳腺發(fā)生炎癥反應(yīng)，成功建立了小鼠乳腺炎模型。

無乳鏈球菌是導(dǎo)致奶牛患乳腺炎的主要致病菌之一，主要引起隱性乳腺炎或部分臨床型乳腺炎。張進(jìn)紅等在母鼠第4 對乳房的乳池內(nèi)分別注入50 μL 的10CFU無乳鏈球菌，12 h 后乳腺組織出現(xiàn)明顯的脂肪變性、乳腺充血、間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤和腺泡間隔增寬等現(xiàn)象；48 h 后腺泡上皮大多壞死、脫落及消失，部分嗜中性粒細(xì)胞壞死崩解，白細(xì)胞介素4（IL-4）水平達(dá)到峰值；72 h 后腺體嚴(yán)重充血、出血，腺泡組織結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞。劉雪松對小鼠腹腔注射1% 戊巴比妥鈉（0.01 mL/g）進(jìn)行麻醉后，對第4 對乳房消毒，并剪下一塊乳房組織（長度<1 mm），將100 μL 濃度為5×10CFU/mL 無乳鏈球菌注射到小鼠第4 對乳腺內(nèi)，攻菌72 h 后，小鼠乳腺腺泡中出現(xiàn)中性粒細(xì)胞浸潤與腺泡壁水腫等病理變化。綜上，無乳鏈球菌可誘導(dǎo)小鼠乳腺急性炎癥的發(fā)生。

此外，大腸桿菌也是導(dǎo)致奶牛乳腺炎的主要環(huán)境性致病菌，是奶牛業(yè)生產(chǎn)中最難防治的疾病之一。安泓霏等在小鼠乳腺內(nèi)灌注大腸桿菌O1128:K99:F41，發(fā)現(xiàn)在攻菌后第6 h，炎性因子TNF-表達(dá)水平達(dá)到峰值，隨后開始減弱，直至第42 h 其表達(dá)又出現(xiàn)增強(qiáng)的現(xiàn)象。這說明環(huán)境致病菌-大腸桿菌也能夠誘發(fā)小鼠乳腺炎的發(fā)生。綜上所述，以上幾大主要病原菌通過損傷的小鼠乳頭或乳腺黏膜侵入乳腺組織并蔓延，導(dǎo)致小鼠乳腺感染，局部發(fā)生腫脹，最終表現(xiàn)出炎性癥狀。

1.2 LPS 誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎模型 LPS 是革蘭氏陰性菌如大腸桿菌外膜最主要的組成部分，為主要的致病毒力因子，進(jìn)入動物機(jī)體后，能夠引起強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)。王瑩在小鼠腹腔中注射0.5 mL/100 g 體重的10%烏拉坦麻醉劑對其進(jìn)行麻醉，隨后對小鼠第4 對乳房進(jìn)行消毒，充分暴露乳頭，剪去乳頭最尖端0.5 mm，用微量進(jìn)樣器于乳房基部灌注50 μL 濃度為0.2 mg/mL LPS溶液，結(jié)果顯示，乳腺組織細(xì)胞變形、壞死，腺泡和小葉的正常結(jié)構(gòu)消失，大量的乳腺上皮細(xì)胞脫落及存在炎性細(xì)胞浸潤等現(xiàn)象。由此可見，LPS 能夠誘導(dǎo)小鼠乳腺炎的發(fā)生。李德朋在BALB/c 母鼠第4 對乳腺分別灌注50 μL 濃度為0.2 mg/mL 的LPS 溶液，成功建立了小鼠乳腺炎性損傷模型。牟瑞營等使用LPS 乳導(dǎo)管灌注對小鼠進(jìn)行攻毒，攻毒24 h 后，小鼠腺泡中含有大量嗜中性粒細(xì)胞，乳腺組織出現(xiàn)明顯的充血和淤血現(xiàn)象，乳腺腺泡壁呈現(xiàn)出明顯的水腫和增厚現(xiàn)象，表明LPS 能夠誘發(fā)小鼠乳腺炎。賴金倫將50 μL 0.2 mg/mL LPS 溶液沿乳導(dǎo)管緩慢地灌注到小鼠乳腺內(nèi)，結(jié)果顯示LPS 能夠引起小鼠乳腺組織的腫脹、充血和大面積出血斑甚至壞死灶的現(xiàn)象，并蓄積了大量凝乳塊，腺泡壁也出現(xiàn)明顯增厚的現(xiàn)象，腺泡腔內(nèi)充斥大量的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等一系列的炎性癥狀。趙慧朵等對BALB/c 小鼠第4 對乳頭消毒后，在其前端剪開一小口，將50 μL 2 mg/mL LPS 注射乳頭內(nèi)，攻毒24 h 后，小鼠的乳腺呈現(xiàn)乳泡壁增厚、乳泡結(jié)構(gòu)被破壞及乳泡內(nèi)伴有炎癥細(xì)胞浸潤現(xiàn)象，表明乳腺炎小鼠建模成功。綜上，LPS 能夠刺激小鼠乳腺組織，其脂質(zhì)A 可與Toll 樣受體4（TLR4）相互作用，進(jìn)一步激活巨噬細(xì)胞，釋放炎癥因子，從而造成乳腺組織水腫、充血、損傷等炎癥性反應(yīng)。

1.3 腸道菌群移植模型 傳統(tǒng)獸醫(yī)學(xué)認(rèn)為動物乳腺炎主要是由于病原菌感染乳頭導(dǎo)致，而近幾年研究表明腸道菌群失衡也可引發(fā)乳腺炎。馬晨等首次將乳腺炎奶牛的糞便加入生理鹽水，混合均勻后對無菌小鼠進(jìn)行灌胃（0.3 μL/ 只），移植后可引起小鼠乳腺炎的病理癥狀，同時引發(fā)血清、脾臟和結(jié)腸中的炎癥，而在移植健康奶牛的糞菌組并未出現(xiàn)以上病理癥狀，表明通過移植乳房炎奶牛糞便能夠成功建立小鼠乳腺炎疾病模型。另外，通過宏基因組學(xué)分析小鼠腸道菌群，發(fā)現(xiàn)腸道菌群的功能基因在移植乳房炎奶牛糞便的小鼠組腸道菌群與移植健康奶牛糞便的小鼠組中的腸道菌群呈現(xiàn)出差異顯著的現(xiàn)象。以糖酵解、酮體和丙酮酸代謝通路等為代表的能量代謝系統(tǒng)在移植健康奶牛糞便小鼠組中更為活躍，通路中的關(guān)鍵蛋白編碼基因出現(xiàn)頻次在移植健康奶牛糞便的小鼠組中的數(shù)量顯著高于移植乳房炎奶牛糞便的小鼠組。推測其致病機(jī)制，一方面，這可能與腸道菌群的改變能夠增加腸道通透性，導(dǎo)致慢性炎癥發(fā)生有關(guān)；另一方面，可能與小鼠樹突狀細(xì)胞攝取腸道細(xì)菌，通過誘導(dǎo)與乳汁白細(xì)胞遷移相關(guān)的細(xì)胞回路，參與腸道特定菌向乳房運(yùn)輸有關(guān)，致使腸道菌群中特定細(xì)菌通過腸道-乳腺通路進(jìn)入乳腺，從而誘發(fā)炎癥，可進(jìn)一步探究。綜上，動物健康的腸道菌群有助于預(yù)防其乳房炎發(fā)生，可為未來防治乳腺炎提供新視角。

1.4 乳汁中分離致病菌建立模型 金黃色葡萄球菌是奶牛乳腺炎感染的主要致病菌之一，鑒于其在乳腺炎病原學(xué)中的重要地位，科研人員對乳腺炎的病牛乳汁樣品病原菌進(jìn)行分離、接種于小鼠乳腺組織，其目的是更接近臨床奶牛自然發(fā)病的情況，有利于指導(dǎo)特定病原菌造成的具體病例的治療。張靜將從乳腺炎病牛乳汁樣品中分離的金黃色葡萄球菌接種小鼠第4 對乳腺，結(jié)果顯示小鼠感染后，乳腺充血、水腫及有炎性細(xì)胞浸潤，腺上皮細(xì)胞壞死、脫落；TNF-含量發(fā)生急劇變化，攻菌6 h 后，TNF-含量增加3 倍，達(dá)到最高值。表明小鼠乳腺發(fā)生了急性炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量的炎性細(xì)胞因子。譚炳海等、呂琛等從患病奶牛的乳汁中分離、篩選致病性金黃色葡萄球菌，并用此病原菌對小鼠進(jìn)行攻毒，發(fā)現(xiàn)隨著金黃色葡萄球菌濃度增加，乳腺組織的病理學(xué)變化逐漸加重，乳腺上皮細(xì)胞（肌上皮細(xì)胞和腺上皮細(xì)胞）發(fā)生溶解，并伴隨著大量脂肪細(xì)胞浸潤現(xiàn)象，表明小鼠乳腺炎造模成功。王娜娜等從患有乳腺炎的病牛乳樣中分離金黃色葡萄球菌，并進(jìn)行誘導(dǎo)感染BALB/c 小鼠第4 對乳腺，發(fā)現(xiàn)攻菌后24 h可觀察到大量的中性粒細(xì)胞充血、浸潤及腺上皮細(xì)胞壞死等病理變化現(xiàn)象；TNF-含量增加了2 倍；誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和3-硝基酪氨酸（3-NT）在乳腺組織中大量表達(dá)，提示參與了攻菌后乳腺炎的病理過程。綜上，從乳腺炎病牛乳汁中分離的金黃色葡萄球菌感染小鼠后，嚴(yán)重?fù)p害乳腺組織，乳腺上皮細(xì)胞受到損傷，并含有大量的炎性細(xì)胞等，這為以奶牛作為直接實(shí)驗(yàn)對象的相關(guān)發(fā)病機(jī)制及其防控問題提供了有效解決途徑。

2 中草藥防治小鼠乳腺炎的機(jī)理研究

2.1 抑制或殺滅病原微生物 中草藥對小鼠乳腺炎具有較理想的效果，其防控機(jī)理主要包括：①直接作用于病原菌，即直接抑制或殺滅病原微生物；已有報(bào)道表明，黃芩苷、大黃酚、胡黃連苷、姜黃素、鹽酸小檗堿、沒食子酸等中草藥的關(guān)鍵活性物質(zhì)能夠直接抑制、殺滅乳腺炎源的病原菌如金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和大腸桿菌等。②通過增強(qiáng)動物機(jī)體的免疫力的方式間接抑制或殺滅病原菌。中草藥活性物質(zhì)如多糖、甙類、有機(jī)酸、揮發(fā)性成分、生物堿等均具有免疫調(diào)節(jié)功能，它們能夠刺激動物免疫系統(tǒng)，調(diào)節(jié)體內(nèi)非特異性抗菌因子，促進(jìn)細(xì)胞活性因子的生成，增加動物抗體的生成，增強(qiáng)非特異性免疫，提高巨噬細(xì)胞的吞噬能力等。

2.2 抑制乳腺炎癥反應(yīng)及調(diào)控乳腺細(xì)胞炎癥信號通路 據(jù)報(bào)道，中草藥抗炎治療是治療動物乳腺炎的有效方法。Xu 等調(diào)查了五味子提取物SchA 對LPS 誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎的影響，發(fā)現(xiàn)32 mg/kg SchA 減輕了炎癥反應(yīng)，降低了LPS 誘導(dǎo)的乳腺組織損傷程度、髓過氧化物酶（MPO）活性和促炎因子TNF-、IL-6 表達(dá)水平；SchA 通過抑制雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信號通路、單磷酸腺苷激活的蛋白激酶-Unc 樣激酶1（AMPKULK1）信號通路，誘導(dǎo)細(xì)胞的自我吞噬能力及激活核因子E2 相關(guān)因子2（Nfr2）信號通路對患病小鼠發(fā)揮保護(hù)作用。由此可見，五味子提取物SchA 可以防治小鼠乳腺炎。Ge 等、王瑩、于逸凡等檢測了蒲公英提取物對金黃色葡萄球菌、LPS 誘導(dǎo)乳腺炎的防治效果，發(fā)現(xiàn)蒲公英提取物能夠降低小鼠血清中炎性因子TNF-、IL-6 和白細(xì)胞介素1（IL-1）含量和MPO活性，抑制TLR2 表達(dá)，降低細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2（ERK1/2）、MAPK p38、NF-B p65 和NF-B 抑制蛋白（IB）的表達(dá)水平，緩解了乳腺組織病理損傷和壞死、炎性細(xì)胞浸潤、水腫和脫落的程度。這表明蒲公英主要通過調(diào)控關(guān)鍵蛋白及磷酸化蛋白表達(dá)、活化NF-B 和MAPK 信號通路，調(diào)節(jié)TLR2 涉及的金黃色葡萄球菌/LPS 誘導(dǎo)的乳腺炎反應(yīng)，最終達(dá)到防控乳腺炎的目的。賴金倫評價了靛玉紅對LPS 誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎的防治效果，發(fā)現(xiàn)靛玉紅顯著改善了小鼠乳腺組織的炎癥狀況，抑制MPO 的活性和促炎因子TNF-、IL-1和IL-6 表達(dá)，且具有劑量依賴性。此外，研究發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑制小鼠乳腺上皮細(xì)胞（MMECs）NF-B 通路中p-p65 和p-IB水平、MAPK 信號通路中的p38、ERK 和c-Jun 氨基末端激酶（JNK）的磷酸化及B 淋巴細(xì)胞瘤-2/xL（Bcl-2/Bcl-xL）抗凋亡基因蛋白、促凋亡Bcl-2 家族蛋白成員Bax/Bak、半胱天冬酶-3/8（Cspase-3/8）等促凋亡基因/蛋白水平的表達(dá)。由此可知，靛玉紅對LPS 誘發(fā)的小鼠乳腺炎具有很好的治療效果，在治療乳腺炎方面具有潛在的臨床應(yīng)用價值。

Ran 等研究發(fā)現(xiàn)薯皂苷素能夠減輕LPS 誘導(dǎo)的小鼠乳腺組織的壞死，促進(jìn)抗炎因子IL-1表達(dá)及抑制核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）炎癥小體的激活。此外，薯皂苷素能夠激活A(yù)MPK/Nrf2 信號通路，抑制NLRP3/消皮素D（GSDMD）通路蛋白誘導(dǎo)的小鼠乳腺表皮（mMEC）細(xì)胞焦亡。表明薯皂苷素對小鼠乳腺炎具有良好的保護(hù)效果，但其抗細(xì)胞凋亡的功能與機(jī)制仍不清晰。Akhtar 等調(diào)查了常春藤苷C（HDC）對金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎的影響，發(fā)現(xiàn)HDC 減輕了小鼠乳腺組織的損傷程度，抑制了促炎因子IL-6、IL-1和TNF-的表達(dá)，提高了抗炎因子白細(xì)胞介素10（IL-10）的表達(dá)水平。此外，HDC 通過調(diào)控MAPKs（p38、ERK 和JNK）和NF-B（p65和IB）信號通路抑制了TLR2 和TLR4 的表達(dá)和炎癥反應(yīng)的發(fā)生。張進(jìn)紅等研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷能夠降低無乳鏈球菌對小鼠乳腺的感染程度，降低炎癥因子-干擾素（IFN-）和IL-4 水平。這說明黃芩苷對小鼠乳腺炎具有較好的治療效果；黃芩苷通過調(diào)節(jié)Th1/Th2 平衡來減輕小鼠乳腺的炎癥反應(yīng)?？锖W(xué)等研究結(jié)果顯示商陸皂苷對LPS 誘導(dǎo)的小鼠乳腺組織的損傷具有很好的保護(hù)作用，可能與商陸皂苷抑制TLR4/NF-B 信號通路蛋白的表達(dá)有關(guān)。

張彩云等研究了連翹、金銀花對金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎的防治效果，發(fā)現(xiàn)金銀花能夠降低小鼠乳腺中細(xì)菌感染的數(shù)量，效果優(yōu)于連翹和金銀花的復(fù)合藥；預(yù)防組和治療組均改善了小鼠乳腺組織的病理變化，降低了小鼠血清中TNF-含量。牟瑞營等研究發(fā)現(xiàn)10～30 μg/kg 木犀草素能夠顯著抑制LPS 誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子TNF-、IL-1和IL-6 的表達(dá)及p65、IB的磷酸化，并呈劑量依賴性。Liu 等調(diào)查了魚腥草素鈉（SH）對LPS 誘導(dǎo)BALB/c 小鼠乳腺炎的防控作用，發(fā)現(xiàn)SH 能夠減輕小鼠乳腺病理組織的損傷程度，降低MPO 活性，下調(diào)炎性因子IL-1、IL-1、IL-6和TNF-的表達(dá)，抑制LPS 誘導(dǎo)的p65 蛋白的磷酸化和IB的降解。由此可見，SH 通過抑制NF-B 信號通路對小鼠乳腺炎發(fā)揮抗炎作用。

此外，其他中草藥提取物如穿心蓮內(nèi)酯、咖啡酸、百里香酚、蒲公英甾醇、千金藤堿、白藜蘆醇等對LPS誘導(dǎo)小鼠乳腺炎均具有良好的治療功效，能夠顯著改善乳腺組織損傷，通過抑制乳腺組織中炎性細(xì)胞因子如TNF-、IL-6 和IL-1表達(dá)和抑制NF-B 和MAPKs信號通路的激活而發(fā)揮對小鼠乳腺炎的治療作用。

2.3 增強(qiáng)機(jī)體免疫力 中草藥對動物免疫功能具有多方面的影響，可激活單核巨噬細(xì)胞和自然殺傷（NK）細(xì)胞，促進(jìn)B 細(xì)胞和T 淋巴細(xì)胞的增殖與分化，促進(jìn)免疫器官的發(fā)育和提高機(jī)體的免疫力，從而提高機(jī)體的防病抗病能力。站永波研究蒙藥復(fù)方制劑對混合菌感染的小鼠乳腺炎的抗炎與免疫機(jī)理方面的影響，發(fā)現(xiàn)蒙藥復(fù)方制劑能夠抵抗致病菌的入侵，減輕小鼠腺泡結(jié)構(gòu)的破壞，促進(jìn)病理乳腺恢復(fù)，顯著提高巨噬細(xì)胞的吞噬力和淋巴臟器指數(shù)；同時，蒙藥提高了紅細(xì)胞C受體花環(huán)率（CbRR），降低了紅細(xì)胞免疫復(fù)合物花環(huán)率（ICR），提高了小鼠T 淋巴細(xì)胞分化簇 3（CD3）、T 淋巴細(xì)胞分化簇4（CD4）、B 淋巴細(xì)胞分化簇19（CD19）細(xì)胞百分率和CD4/分化簇8（CD8）的比值。由此可見，蒙藥復(fù)方制劑通過提高免疫力對小鼠乳腺炎起到了一定的防治效果。一方面，蒙藥增強(qiáng)了小鼠的免疫應(yīng)答速度與強(qiáng)度；另一方面，蒙藥有效控制了炎癥反應(yīng)，降低對小鼠乳腺組織的損傷，在免疫系統(tǒng)內(nèi)部有效調(diào)控免疫應(yīng)答，從而有效清除病原菌，達(dá)到抗菌消炎的目的。包金榮分析了由柯子、黃柏等7 味藥組成的2 種蒙藥復(fù)方的4 種萃取物對小鼠乳腺炎抗菌消炎的影響，結(jié)果顯示，2 種蒙藥復(fù)方的乙酸乙酯和正丁醇萃取液在體外對葡萄球菌具有更強(qiáng)的抑菌效果；水母液和石油醚萃取液在乳腺炎模型小鼠體內(nèi)表現(xiàn)出更強(qiáng)的免疫功能，顯著提高了小鼠B/T 細(xì)胞百分率和CD4/CD8比值、單核巨噬細(xì)胞的吞噬能力、脾臟NK 細(xì)胞活性、脾臟免疫應(yīng)答與調(diào)節(jié)能力、紅細(xì)胞免疫黏附力和紅細(xì)胞膜CRI 活性，降低了TNF-、IL-6 等炎性因子的表達(dá)，其防效優(yōu)于左旋咪唑。綜上，蒙藥復(fù)方制劑能夠提高乳腺炎模型小鼠的特異性免疫和非特異性免疫功能，降低炎癥性反應(yīng)，可作為預(yù)防動物乳腺炎的一種前景藥物。

2.4 調(diào)控腸道菌群平衡 動物腸道菌群是一個龐大的微生態(tài)系統(tǒng)，與許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)。研究表明，動物患乳腺炎以后其腸道菌群在物種結(jié)構(gòu)和功能特征上都會發(fā)生一定的變化。因此，后腸道中的菌群被視為診斷奶牛乳腺炎的潛在指標(biāo)。劉凡銘等分析乳腺炎小鼠腸道菌群改變及與炎性因子的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)高劑量（10CFU/25 μL）攻菌組（金黃色葡萄球菌）的乳腺組織呈現(xiàn)出明顯的炎性病理變化；TNF-表達(dá)量顯著升高，小窩蛋白（Cav-1）表達(dá)量顯著降低；厚壁菌門豐度增高，擬桿菌門、疣微菌門豐度降低，變形菌門無顯著變化，這說明乳腺炎小鼠的腸道菌群與炎癥具有一定的相關(guān)性。Hu 等研究腸道菌群在金黃色葡萄球菌誘導(dǎo)的小鼠乳腺炎疾病模型中的功能，發(fā)現(xiàn)當(dāng)腸道菌群失調(diào)時，小鼠的血乳屏障通透性會增加，進(jìn)一步加重乳腺炎癥狀；同時，致病菌腸桿菌的豐度得到提高，產(chǎn)生短鏈脂肪酸的菌種如厚壁菌與擬桿菌的數(shù)量明顯降低，短鏈脂肪酸含量下降；糞便移植小鼠后或者口服丙酸鈉、丁酸鈉和益生菌能夠緩解以上狀況的發(fā)生。由此可知，腸道微生物群在對動物乳腺炎的防御中起著一定的保護(hù)作用。

Guo 等調(diào)查了穿心蓮丁素（Deh）對乳腺炎小鼠的影響，發(fā)現(xiàn)Deh 顯著降低了TNF-、IL6、IL-1、MPO、環(huán)氧合酶2（COX2）和iNOS 蛋白的表達(dá)水平，降低了炎癥反應(yīng)，但是Deh 對腸道菌群并未產(chǎn)生影響。截止目前，“中草藥-乳腺炎-腸道菌群”三者之間的關(guān)聯(lián)性、如何互作及作用機(jī)制等尚不明確，但以“腸道-乳腺軸”作為靶點(diǎn)是今后治療乳腺炎的一種全新的治療思路，值得進(jìn)一步探索。

3 中草藥防治小鼠乳腺炎存在的問題及展望

中草藥防治小鼠乳腺炎已取得了一定的初步效果，但仍然存在一些問題亟待解決，主要包括：①中草藥防治小鼠乳腺炎的物質(zhì)基礎(chǔ)尚不十分明確；②中草藥防治小鼠乳腺炎的作用途徑、靶位點(diǎn)及其機(jī)制不完全清晰；③中草藥防治小鼠乳腺炎的制劑水平落伍，質(zhì)量不穩(wěn)定，缺乏國家標(biāo)準(zhǔn)。針對以上問題，在今后的開發(fā)應(yīng)用中，一方面，有針對性地利用中草藥的有效成分進(jìn)行研究，開展定性與定量分析及標(biāo)準(zhǔn)化研究，做到科學(xué)、合理、有度；拓寬中草藥來源，充分開發(fā)利用中草藥資源；進(jìn)一步闡明中草藥有效成分及其構(gòu)效、量效關(guān)系。另一方面，關(guān)注腸道菌群在宿主防御乳腺炎的過程中的功能研究，失調(diào)的腸道菌群可能是引發(fā)乳腺炎的原因之一。因此，恢復(fù)腸道菌群功能的中草藥可能是今后潛在的治療策略，可以圍繞“腸道-乳腺軸”開發(fā)新型、高效、安全與穩(wěn)定的中草藥制劑，重塑腸道菌群平衡，為奶牛乳腺炎的防控提供全新視角，也是一種具有前景的新思路。

4 小結(jié)

中草藥具有低毒、無殘留、不易產(chǎn)生細(xì)菌耐藥性等特點(diǎn)，在防治動物乳腺炎具有巨大的潛力。一方面，中草藥可有效抑制病原微生物的增殖，從根本上去除病因；另一方面，中草藥能夠減輕炎癥反應(yīng)的發(fā)生，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，達(dá)到標(biāo)本兼治的效果，從而實(shí)現(xiàn)預(yù)期的治療目標(biāo)。因此，在今后的研究中充分利用現(xiàn)代醫(yī)學(xué)技術(shù)手段，闡明中草藥的藥效、作用機(jī)制，開發(fā)出更多優(yōu)質(zhì)、高效、安全和穩(wěn)定的防治動物乳腺炎的中草藥制劑。