微柱凝膠法交叉配血技術(shù)中供血者意外抗體篩查的臨床應(yīng)用效果

張璐璐

（沈陽(yáng)市骨科醫(yī)院承基醫(yī)院，遼寧 沈陽(yáng) 110000）

目前，在對(duì)輸血患者和手術(shù)患者備血效果十分關(guān)注的情況下，不規(guī)則抗體引起了廣泛關(guān)注。不規(guī)則抗體是不屬于抗-A、抗-B的血型，多歸結(jié)于IgG抗體。意外抗體的發(fā)生會(huì)造成交叉配血難度增大，同時(shí)還可能發(fā)生遲發(fā)性溶血性輸血反應(yīng)，進(jìn)一步引發(fā)彌散性血管內(nèi)凝血（disseminated intravascular coagulation，DIC）[1]、少尿、無(wú)尿及腎衰竭等，甚至危害患者的生命安全。據(jù)不完全數(shù)據(jù)證實(shí)，我國(guó)因血型抗原抗體免疫要素導(dǎo)致的輸血反應(yīng)比例高達(dá)12.00%，其中溶血反應(yīng)比例在2.50%以上，與國(guó)外相比占比更高[2]。目前，微柱凝膠技術(shù)（microbubes gel technology，MGT）[3]在國(guó)外發(fā)展較為普遍，而在我國(guó)的應(yīng)用仍存在局限性?；诖耍狙芯恳曰仡櫺苑治鲂问剑u(píng)定微柱凝膠法交叉配血技術(shù)中供血者意外抗體篩查的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取醫(yī)院在2017年1月至2020年2月行治療性輸血和手術(shù)備血的患者596例。596例患者中男性450例，女性146例，最小年齡19歲，最大年齡68歲。

1.2 方法

1.2.1 微柱凝膠測(cè)定 選取專(zhuān)用孵育設(shè)備和離心機(jī)。試劑選取抗人球蛋白微柱凝膠卡、低離子介質(zhì)溶液。微柱凝膠卡A孔、B孔和D孔分別加50 μmol/L濃度0.80%的紅細(xì)胞懸液，離心300 s，在A孔和B孔共加入100 μmol/L的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，每孔50 μmol/L，再分別加入50 μmol/L血漿，離心300 s。主側(cè)加進(jìn)50 μL濃度0.80%獻(xiàn)血者紅細(xì)胞懸液和50 μL受者血漿，次側(cè)加進(jìn)50 μL獻(xiàn)血者血漿和50 μL濃度0.80%受者紅細(xì)胞懸液，37 ℃下孵育1 min，專(zhuān)用離心機(jī)離心5 min。不規(guī)則抗體篩查Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 3孔分別加進(jìn)50 μL 0.80%篩檢紅細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ再分別加進(jìn)50 μL患者血漿，37 ℃孵育15 min，專(zhuān)用離心機(jī)離心5 min。-表示100.00%紅細(xì)胞沉淀在微管底部；+/-表示100.00%紅細(xì)胞沉積在微管下端1/3內(nèi)；+表示80.00%紅細(xì)胞沉積在微管下端2/3內(nèi)；+++表示80.00%紅細(xì)胞沉積在微管上端1/3內(nèi)；++++：在微管頂部聚集所有細(xì)胞；d.p表示雙群；Hemo表示溶血。選出的陽(yáng)性標(biāo)本采用1～10號(hào)譜細(xì)胞進(jìn)行微柱凝膠法處理，并采用抗體特異性檢測(cè)。

1.2.2 抗球蛋白檢測(cè) 測(cè)定出的陽(yáng)性標(biāo)本采用抗球蛋白間接法檢測(cè)，擇取12支有標(biāo)記的1-X、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照的試管，在12支試管中分別加進(jìn)5.00%篩檢紅細(xì)胞懸液1滴，加進(jìn)測(cè)定血清2滴，將5.00%Rh（D）陽(yáng)性紅細(xì)胞懸液1滴和IgG抗D血清2滴加進(jìn)陽(yáng)性對(duì)照管中，5.00%Rh（D）陽(yáng)性紅細(xì)胞懸液1滴和AB血清2滴加進(jìn)陰性對(duì)照管中，將每個(gè)管分別放置于37 ℃溫度下，溫育60 min離心處理，記錄溶血和聚集狀態(tài)，并對(duì)結(jié)果記錄。對(duì)紅細(xì)胞懸浮，洗滌生理鹽水＞3次，最后1次洗滌后，將生理鹽水去掉，并將生理鹽水全部吸干，管中加進(jìn)稀釋度抗人球蛋白血清2滴，離心混合處理后，紅細(xì)胞懸浮。

1.2.3 抗體篩查與交叉配血 對(duì)596例受血人員使用全自動(dòng)血型鑒定及交叉配血分析儀進(jìn)行抗體篩查，針對(duì)陰性的患者，在審核完成后，錄入輸血管理系統(tǒng)；針對(duì)陽(yáng)性的患者，在審核完成后，使用普細(xì)胞進(jìn)行抗體特異性篩查檢定?？贵w檢測(cè)呈陰性符合交叉配血規(guī)則的受血者由輸血管理系統(tǒng)根據(jù)所需的血液成分、數(shù)量、血量等，自動(dòng)顯示捐血者名單，以完成交叉配血程序。同時(shí)進(jìn)行傳統(tǒng)的血清交叉配型試驗(yàn)，并進(jìn)行平行操作。在血清學(xué)交叉配型時(shí)，將主要一面的不相容分開(kāi)處理，采用光譜細(xì)胞鑒定抗體特異性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]表示，組間比較行χ2檢驗(yàn)；P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不規(guī)則抗體篩查 596例受血人員共測(cè)定出抗體陽(yáng)性240例（40.27%）。

2.2 抗體特異型測(cè)定 應(yīng)用微柱凝膠法和試管間接抗人球法對(duì)240例抗體篩選陽(yáng)性標(biāo)本鑒定，具體見(jiàn)表1。

表1 240例抗體篩選陽(yáng)性標(biāo)本不規(guī)則抗體記錄

3 討論

意外抗體是指血清中除抗-A和抗-B以外的其他血型的抗體，是引起輸血不良反應(yīng)和影響血液鑒定結(jié)果的重要因素。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展，紅細(xì)胞血型鑒定水平逐步提高，以溶血性輸血反應(yīng)為代表的輸血不良反應(yīng)的發(fā)生率明顯降低，但意外抗體引起的遲發(fā)性溶血反應(yīng)在臨床輸血反應(yīng)中的占比越來(lái)越大。不規(guī)則抗體引起的溶血性輸血反應(yīng)可引起發(fā)冷、發(fā)熱，影響治療效果，嚴(yán)重者甚至危及生命。因此，抗體篩查是必不可少的?；诖?，為了確保臨床輸血的安全性與有效性，應(yīng)在輸血前對(duì)患者進(jìn)行意外抗體篩查。

不規(guī)則抗體會(huì)造成交叉配血的難度提升，因此即便是敏感度高的紅細(xì)胞抗體陽(yáng)性患者，在進(jìn)行了不符合標(biāo)準(zhǔn)的血液灌注時(shí)也會(huì)導(dǎo)致免疫溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生，從而危害患者的生命安全[4]。因此，在對(duì)患者輸血前均篩選意外抗體，如果抗體篩查中證實(shí)為陽(yáng)性狀態(tài)，則進(jìn)行抗原陰性處理，同時(shí)交叉配血滿(mǎn)足標(biāo)準(zhǔn)的紅細(xì)胞輸注，這也是確?？茖W(xué)數(shù)學(xué)的前提，特別是對(duì)于手術(shù)備血患者來(lái)說(shuō)，可提前1 d做抗體篩查測(cè)定。對(duì)于進(jìn)行抗體篩查的陽(yáng)性患者來(lái)說(shuō)，在更為充足的階段行抗體特異性監(jiān)測(cè)，并聯(lián)合血液制品，從而保證手術(shù)的安全進(jìn)行[5]。

通過(guò)本次數(shù)據(jù)證實(shí)，測(cè)定出240例抗體篩查陽(yáng)性患者，稍微高于我國(guó)報(bào)道的需要輸血住院患者的比例，這一因素的發(fā)生主要和受檢人員的性別、輸血情況、妊娠情況有關(guān)，通過(guò)本次研究分析存在輸血史/妊娠史患者中，測(cè)定出特異性抗體86例（35.83%），未測(cè)定出特異性抗體患者104例（43.33%）。因此，對(duì)存在妊娠史患者和輸血史患者做抗體篩查具有更大價(jià)值。在以上分析中，進(jìn)行測(cè)定的106例抗體中，多數(shù)均屬于Rh系統(tǒng)的特異性抗體。檢查出的抗體多屬于抗-E，這是由于當(dāng)前Rh（D）已經(jīng)作為輸血、備血患者的最常規(guī)檢查形式，Rh（D）血型同型輸注推廣較為常見(jiàn)，降低了因輸入Rh（D）陽(yáng)性血液，而出現(xiàn)抗-D機(jī)會(huì)，以此抗-D抗體檢出率較低。除D以外的Rh血型系統(tǒng)的其他血型抗原，沒(méi)能在血型鑒定中測(cè)定，同時(shí)在人群中的比例相當(dāng)于50.00%，所以一旦Rh（E）陰性患者因輸血或者妊娠進(jìn)行Rh（E）抗原刺激就會(huì)出現(xiàn)抗-E抗體，以此因免疫要素出現(xiàn)不規(guī)則抗體。從本質(zhì)上來(lái)看，其Rh（E）血型不配合的比例應(yīng)為Rh（D）2.5倍。Rh系統(tǒng)抗原性的強(qiáng)度中，e最小，而后為C、c、E和D，Rh（E）抗原是除了Rh（D）抗原外抗原性最強(qiáng)的一種抗原，卻未將其作為基礎(chǔ)測(cè)定，造成近年有抗Rh（E）抗體導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)的數(shù)據(jù)。根據(jù)當(dāng)前得出的數(shù)據(jù)證實(shí)，除ABO系統(tǒng)外的一些血型抗原的關(guān)鍵性。所以研究判定如果有條件滿(mǎn)足，則給受血人員作為Rh血型分型，輸入相符合血液，能夠降低不規(guī)則抗體發(fā)生率。

另外MNSs系統(tǒng)抗體比例更高，其次為抗-M抗體，抗-M抗體僅僅能夠在37 ℃環(huán)境下貯存，當(dāng)抗球蛋白測(cè)定為陽(yáng)性時(shí)才具有合理性[6]。在一般情況下，人體內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)溶血狀態(tài)，但如果患者處于低溫下則應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注。此類(lèi)抗體會(huì)對(duì)補(bǔ)體激活，當(dāng)機(jī)體體溫在冷抗體最適合反應(yīng)溫度范圍區(qū)域內(nèi)時(shí)，也會(huì)出現(xiàn)溶血反應(yīng)[7]，所以應(yīng)選取抗-M相符合的血液，以降低意外情況發(fā)生[8-10]。通過(guò)本文數(shù)據(jù)分析，596例受血人員共測(cè)定出抗體陽(yáng)性40.27%。選取血型系統(tǒng)Rh-hr、MNSs、Kidd、Duffy、Kell、Lewis，其中記錄比例為3.33%、14.17%、0.83%、1.67%、0.83%、14.17%、1.67%、0.83%、0.83%、0.83%、2.50%、0.83%、1.67%。測(cè)定出特異性抗體44.17%，未測(cè)定出抗體共55.83%，總計(jì)100.00%。

綜合以上結(jié)論，對(duì)輸血前患者予以不規(guī)則抗體測(cè)定十分關(guān)鍵，能夠確保臨床輸血的安全性，降低溶血性輸血。同時(shí)，微柱凝膠法測(cè)定抗體篩查能夠克服常規(guī)的抗人球蛋白測(cè)定的復(fù)雜性，不需要進(jìn)行洗滌，簡(jiǎn)單方便。