泰地羅新注射液對(duì)靶動(dòng)物豬的安全性試驗(yàn)研究

瞿紅穎，劉 欣*，耿智霞，賈 興，宋婷婷，劉 靜，郭李珉，曹興元

（1.河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司，河北石家莊 050041；2.河北省獸藥技術(shù)創(chuàng)新中心，河北石家莊 050041；3.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 100083）

我國(guó)年均出欄肉豬約6.8億頭，約占世界總量的1/2。豬呼吸系統(tǒng)疾病在規(guī)?；B(yǎng)殖中群發(fā)是一種普遍存在的現(xiàn)象，發(fā)病率高達(dá)50%以上，病死率高，且呈地方流行性的發(fā)展趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[1-2]。豬呼吸系統(tǒng)疾病的病因復(fù)雜，病原眾多，目前的治療藥物仍然以大環(huán)內(nèi)酯類藥物為主，包括泰樂(lè)菌素、替米考星等。但隨著上述藥物的長(zhǎng)期使用，病原菌可對(duì)藥物產(chǎn)生不同程度的耐藥性，極大地影響了藥物的治療效果。因此，新型動(dòng)物專用藥物是獸藥研發(fā)的重要任務(wù)。

泰地羅新（tildipirosin）是一種新型十六元環(huán)動(dòng)物專用的大環(huán)內(nèi)酯類半合成抗生素，具有高效、廣譜的抗菌活性，對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌、支氣管敗血波氏桿菌和副豬嗜血桿菌引起的豬呼吸道疾病及溶血性曼氏桿菌、多殺性巴氏桿菌、睡眠嗜組織菌引起的牛呼吸道疾病具有很好的療效[3]。2011年，以泰地羅新為主要成分的無(wú)菌注射液（商品名為Zuprevo）通過(guò)了歐洲藥物管理局（EMA）的審批，相繼投放于歐盟國(guó)市場(chǎng)[4-5]。2012年，泰地羅新注射液被美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）批準(zhǔn)在美國(guó)上市銷售[6]。泰地羅新注射液吸收迅速、分布廣泛，臨床上治療豬和牛呼吸道疾病的效果較好，只需單次給藥即可完成全程治療[7-9]，廣泛應(yīng)用于國(guó)外臨床。為考察泰地羅新注射液臨床用藥的安全性，本試驗(yàn)對(duì)泰地羅新注射液在靶動(dòng)物豬體內(nèi)的安全性進(jìn)行了研究和評(píng)估，以期為國(guó)內(nèi)臨床安全用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器設(shè)備

BS-240VET全自動(dòng)生化分析儀（邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；ProCyte Dx?全自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀、VetLab UA動(dòng)物尿液分析儀（愛德士生物科技有限公司）；RM2235切片機(jī)、DM750顯微鏡（Leica）；D7i100相機(jī)（Nikon）等。

1.2 試驗(yàn)藥物

泰地羅新注射液由河北遠(yuǎn)征藥業(yè)有限公司生產(chǎn)（批號(hào)：TILDI4-1-03，規(guī)格：50 mL∶2 g）。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

健康三元雜交豬32頭，3～4月齡，雌、雄各半，由北京市畜牧總站試驗(yàn)動(dòng)物基地提供。

受試動(dòng)物的飼養(yǎng)和管理操作符合中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家獸藥安全評(píng)價(jià)中心動(dòng)物飼養(yǎng)的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的要求。日糧不含任何藥物添加劑，自由飲水。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)開始前，受試動(dòng)物至少在試驗(yàn)豬籠中經(jīng)歷7 d適應(yīng)期，獸醫(yī)對(duì)受試豬進(jìn)行臨床健康檢查。適應(yīng)期內(nèi)，將32頭豬隨機(jī)分為4組，每組8頭，雌、雄各半。

按照隨機(jī)單盲、平行試驗(yàn)設(shè)計(jì)給藥，因受試制劑泰地羅新注射液的推薦給藥劑量是4.0 mg/kg BW，故1倍推薦劑量組按照4.0 mg/kg BW給藥，3倍推薦劑量組按照12.0 mg/kg BW給藥，5倍推薦劑量組按照20.0 mg/kg BW給藥，對(duì)照組不給藥。每日8：00耳后肌內(nèi)注射給藥1次，連續(xù)給藥3 d。

1.5 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.5.1 采食量、日增重及飼料轉(zhuǎn)化率

分別于給藥前（0 d）和給藥后7、14 d日，試驗(yàn)豬空腹稱重，記錄每日進(jìn)食量，計(jì)算平均日采食量、平均日增重以及料重比。

結(jié)果顯示，不同時(shí)間點(diǎn)的各劑量組平均日增重差異均不顯著（P＞0.05）；但對(duì)照組與3倍劑量組、5倍劑量組的料重比差異顯著（P＜0.05），可能是因?yàn)椴煌M別動(dòng)物的個(gè)體差異所造成，與給藥關(guān)聯(lián)不大。

1.5.2 臨床癥狀

試驗(yàn)前觀察1 w，觀察試驗(yàn)豬的行為、活動(dòng)、飲水、攝食、毛發(fā)、精神、體重等，穩(wěn)定后進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)期間定期觀察并記錄各組豬的健康狀況和臨床表現(xiàn)（精神狀態(tài)、行為表現(xiàn)、體溫、呼吸頻率和脈搏等），記錄死亡數(shù)，計(jì)算各組的病死率和成活率，出現(xiàn)不良反應(yīng)的豬重點(diǎn)觀察。

1.5.3 血液生理指標(biāo)

分別于給藥前（0 d）和給藥后5、14 d日，各組豬前腔靜脈采血，測(cè)定白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（LYM）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（HGB）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均血紅蛋白含量（MCH）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）等血液生理指標(biāo)。

1.5.4 血液生化指標(biāo)

分別于給藥前（0 d）和給藥后5、14 d日，各組豬前腔靜脈采血，測(cè)定肌酐（CREA）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、尿素（UREA）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽紅素（TBIL）、葡萄糖（GLU）、甘油三酯（TG）、鈣（Ca）、磷（P）、總膽固醇（TC）等血液生化指標(biāo)。

1.5.5 臟器系數(shù)

剖檢試驗(yàn)過(guò)程中的死亡豬、出現(xiàn)明顯異常表現(xiàn)豬，并于試驗(yàn)結(jié)束后隨機(jī)選取對(duì)照組和5倍推薦劑量組各4頭豬剖檢。若5倍推薦劑量組出現(xiàn)明顯的剖檢病理變化，對(duì)3倍推薦劑量組動(dòng)物進(jìn)行剖檢。眼觀各重要臟器病變情況，對(duì)個(gè)體的主要臟器（心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟等）進(jìn)行稱重，計(jì)算臟器系數(shù)。1.5.6 組織病理學(xué)檢查

分別取所剖檢的試驗(yàn)動(dòng)物的心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟、小腸等組織，保存于10%中性緩沖福爾馬林固定液，制作病理切片，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行方差分析和獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)分析。結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各劑量組試驗(yàn)豬的臨床表現(xiàn)（精神狀態(tài)、行為表現(xiàn)、體溫、脈搏和呼吸頻率）

試驗(yàn)期間，各組豬行為未見異常、活動(dòng)自如，體溫、脈搏和呼吸頻率均正常，皮毛光亮、口眼鼻耳無(wú)分泌物，攝食飲水、大便、尿顏色正常，未見任何明顯毒副作用。

2.2 各劑量組試驗(yàn)豬的血液生理指標(biāo)結(jié)果（見表1）

由表1可知，給藥5、14 d后，與對(duì)照組相比，給藥劑量組的各項(xiàng)血液生理指標(biāo)組間差異和組內(nèi)差異均不顯著（P＞0.05）。白細(xì)胞數(shù)普遍輕度偏高，紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量普遍偏低，結(jié)合其他指標(biāo)，無(wú)明顯臨床意義，且給藥前（0 d）也存在，故與給藥關(guān)聯(lián)不大。

表1 各劑量組試驗(yàn)豬的血液生理指標(biāo)結(jié)果Tab.1 Result of blood physiological indexes of pigs in different administration time and dose groups

2.3 各劑量組試驗(yàn)豬的血清生化指標(biāo)結(jié)果（見表2）

由表2可知，對(duì)照組與各給藥劑量組的各項(xiàng)血清生化指標(biāo)組間差異和組內(nèi)差異均不顯著（P＞0.05）。其中，大多數(shù)試驗(yàn)動(dòng)物的TC在整個(gè)試驗(yàn)周期的血液生化檢測(cè)中均普遍偏高，給藥前和空白對(duì)照組均存在，結(jié)合其他指標(biāo)，與給藥關(guān)聯(lián)不大。

表2 各劑量組試驗(yàn)豬的血清生化指標(biāo)結(jié)果Tab.2 Result of serum biochemical indexes of pigs in different administration time and dose groups

2.4 各劑量組試驗(yàn)豬的大體剖檢結(jié)果（見圖1）

由圖1可知，各組心包膜和心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟被膜顏色正常，臟器表面無(wú)異常，邊緣整齊，無(wú)出血點(diǎn)或壞死病癥。

結(jié)果表明，5倍推薦劑量連續(xù)給藥3 d對(duì)豬主要臟器無(wú)肉眼可見的不良影響。

2.5 各劑量組試驗(yàn)豬的臟器重量及系數(shù)（見表3）

由表3可知，對(duì)照組和5倍推薦劑量組豬的各臟器系數(shù)差異均不顯著（P＞0.05）。

表3 各劑量組試驗(yàn)豬的臟器重量及系數(shù)Tab.3 Organ weights and coefficients of experimental pigs with different doses

2.6 各劑量組試驗(yàn)豬的組織病理學(xué)結(jié)果

由對(duì)照組豬和5倍推薦劑量組豬的組織病理學(xué)檢查結(jié)果可知，5倍推薦劑量組4頭豬肝組織顯微鏡下可見肝小葉及肝小葉間質(zhì)可見少量的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，其余臟器未見明顯病理變化；3倍推薦劑量組4頭豬和對(duì)照組4頭豬各組織均未見明顯的病理變化。因此，按5倍推薦劑量連續(xù)給藥3 d對(duì)受試動(dòng)物三元雜交豬的肝臟具有一定的毒性，對(duì)其余臟器無(wú)明顯毒性作用。若按推薦劑量用藥，對(duì)受試動(dòng)物的各組織無(wú)明顯毒性作用。

3 討論

泰地羅新注射液按1倍、3倍、5倍推薦劑量連續(xù)給藥3 d對(duì)受試動(dòng)物三元雜交豬平均采食量、平均日增重、飼料轉(zhuǎn)化率、臨床癥狀、血液生理指標(biāo)、血清生化指標(biāo)、大體剖檢結(jié)果及臟器系數(shù)均無(wú)顯著影響；組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示，5倍推薦劑量連續(xù)給藥3 d對(duì)受試動(dòng)物豬的肝臟具有一定毒性，但按照推薦劑量給藥對(duì)受試動(dòng)物豬是安全的。

目前，泰地羅新注射液已被國(guó)內(nèi)多家企業(yè)和機(jī)構(gòu)作為二類新獸藥進(jìn)行研究。靶動(dòng)物安全性試驗(yàn)為必要研究?jī)?nèi)容之一。泰地羅新注射液臨床上應(yīng)用于治療豬的由胸膜肺炎放線桿菌、多殺性巴氏桿菌、支氣管敗血波氏桿菌、副豬嗜血桿菌病、豬鏈球菌引起的呼吸系統(tǒng)疾病療效顯著，推薦給藥劑量為4 mg/kg BW（肌內(nèi)注射），每日僅用1次[10-12]。林紅等[13]評(píng)價(jià)了泰地羅新注射液對(duì)靶動(dòng)物豬的安全性，試驗(yàn)動(dòng)物分組與各組給藥劑量與本研究相同，但給藥時(shí)間為每隔4 d給藥1次，連續(xù)給藥3次。

本試驗(yàn)結(jié)果顯示，各組試驗(yàn)豬的體重以及血液生理、生化指標(biāo)等檢測(cè)結(jié)果差異均不顯著，解剖試驗(yàn)豬未見肉眼可見的病理變化，組織切片顯微鏡觀測(cè)未見病理變化。本研究采用的給藥方式為每日給藥，連續(xù)3 d；結(jié)果顯示，僅在5倍劑量組中發(fā)現(xiàn)泰地羅新具有一定的肝臟毒性，其原因可能為連續(xù)給藥使藥物在動(dòng)物體內(nèi)的累積達(dá)到了對(duì)肝臟具有毒性影響的濃度。但3倍劑量組未見此毒性影響，說(shuō)明泰地羅新注射液在受試動(dòng)物豬的體內(nèi)耐受性高，按臨床推薦劑量應(yīng)用是安全的。

閆超群等[14]、謝順[15]研究了泰地羅新注射液對(duì)靶動(dòng)物豬的安全性，結(jié)果顯示，高劑量組出現(xiàn)了心肌細(xì)胞變性的癥狀，也表現(xiàn)出對(duì)肝臟和腎臟的損傷。上述研究表明，在臨床推薦劑量范圍內(nèi)使用對(duì)靶動(dòng)物豬的生理生化無(wú)明顯的影響，與本研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

臨床上，泰地羅新注射液按推薦劑量給藥對(duì)靶動(dòng)物豬是安全的。