• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    杜梨砧木組培擴(kuò)繁技術(shù)研究*

    2022-06-09 02:18:40楊冠宇張艷杰李佳純歐春青姜淑苓
    中國(guó)果樹 2022年6期
    關(guān)鍵詞:杜梨培苗株系

    楊冠宇,王 斐,張艷杰,馬 力,李佳純,歐春青,姜淑苓

    (中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部園藝作物種質(zhì)資源利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,遼寧興城 125100)

    梨是一種世界性的水果,在我國(guó)水果產(chǎn)業(yè)中有著舉足輕重的地位,栽培面積和產(chǎn)量?jī)H次于柑橘和蘋果,位居第三[1]。隨著我國(guó)梨產(chǎn)業(yè)的快速發(fā)展以及環(huán)境和氣候條件的日益變化,砧木作為梨樹的重要組成部分,對(duì)梨樹生長(zhǎng)的影響越來(lái)越大。我國(guó)梨生產(chǎn)上常用的梨砧木主要有杜梨(Pyrus betulifoliaBunge)、豆梨(Pyrus calleryanaDecne)、山梨(Pyrus ussuriensisMaxim)、川梨(Pyrus pashiaBuch.-Ham.ex D.Don)和木梨(Pyrus xerophilaT.T.Yu)等[2],其中杜梨具有抗干旱、耐寒、分布廣、適應(yīng)性強(qiáng)、結(jié)果期早、壽命長(zhǎng)等特點(diǎn)[3],是應(yīng)用最廣泛的梨砧木之一。目前,生產(chǎn)中使用的杜梨砧木多為實(shí)生種子繁殖,種子來(lái)源各不相同,生產(chǎn)的苗木參差不齊,不利于現(xiàn)代化標(biāo)準(zhǔn)化梨園的建設(shè)。梨組織培養(yǎng)具有用材少、不受季節(jié)影響、繁殖系數(shù)高等優(yōu)點(diǎn),生產(chǎn)的苗木整齊一致,能滿足短期大規(guī)模生產(chǎn)需要[4],并且可以加快育種進(jìn)程[5],在梨無(wú)性系砧木生產(chǎn)和現(xiàn)代生物育種中具有重要作用。

    目前,已有關(guān)于梨組培擴(kuò)繁研究的報(bào)道,李本波[6]探究了NAA 與6-BA 等植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合對(duì)杜梨繼代組培苗的影響,發(fā)現(xiàn)NAA 濃度在0.1~0.5 mg/L、6-BA 濃度在0.5~2.0 mg/L 時(shí)組培苗生長(zhǎng)狀況較好。盧明艷等[7]在對(duì)梨砧木優(yōu)系1-127 的研究中發(fā)現(xiàn),組培苗適宜的增殖培養(yǎng)基為WPM+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA。苗冉冉等[8]研究發(fā)現(xiàn),津香蜜梨適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,增殖系數(shù)為5.73,巴梨適宜的繼代增殖培養(yǎng)基為MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA,增殖系數(shù)為3.83。劉春等[9]在對(duì)京白梨的研究中發(fā)現(xiàn),采用MS+3 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+1.5 mg/L GA3作為增殖培養(yǎng)基,可有效提高京白梨優(yōu)良單株組培快繁育苗效率。李昌珠等[10]用12個(gè)基因型的歐洲梨作為試材,研究表明梨的不同基因型間離體繁殖和形態(tài)分化顯著不同。在梨組織培養(yǎng)方面,還需加大對(duì)不同品種的研究范圍,建立多品種適宜的組織培養(yǎng)快繁體系。

    由于杜梨為野生類型,不同株系的組培特性、抗性和適應(yīng)性等性狀各不相同,為進(jìn)一步豐富杜梨組培資源,篩選適宜的株系進(jìn)行砧木苗繁育和生物育種研究,本試驗(yàn)以不同來(lái)源的杜梨實(shí)生種子和新梢為外植體,開展不同消毒劑和消毒時(shí)間的消毒效果以及最佳繼代增殖和生根培養(yǎng)基的篩選研究,以期為我國(guó)梨砧木規(guī)模化生產(chǎn)提供技術(shù)支持,為梨遺傳轉(zhuǎn)化體系構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因研究奠定基礎(chǔ)。

    不同杜梨砧木的組培擴(kuò)繁與生根移栽情況Tissue culture propagation,rooting and transplanting of different Pyrus betulifolia rootstocks

    1 材料和方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    試驗(yàn)材料采集于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹研究所梨育種試驗(yàn)園保存的來(lái)自山西、河北、遼寧等不同地區(qū)收集的實(shí)生杜梨株系,樹齡均在10 年以上。其中,選取樹體健壯、新梢發(fā)育良好的株系11 個(gè),于春季新梢剛剛長(zhǎng)至5~8 cm 時(shí)取田間幼嫩的新梢為外植體,于秋季采集21 個(gè)株系上健康成熟果實(shí)的種子為外植體,分別開展組培試驗(yàn)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 外植體消毒與初代培養(yǎng)

    將采回來(lái)的枝條剪成2~3 cm 的單芽莖段,種子經(jīng)層積處理,然后依次用洗衣粉上清液浸泡30 min,用清水清理干凈洗衣粉殘留,移至無(wú)菌環(huán)境,無(wú)菌水沖洗3 遍,75%酒精浸泡30 s,再分別用0.1%HgCl2溶液處理5、8、10、12 min 或5%NaClO 溶液處理5、8、10、15 min,無(wú)菌水沖洗3~5 遍,最后將清洗干凈的外植體用無(wú)菌濾紙吸干水分,接種到MS+6.5 g/L 瓊脂+30 g/L 蔗糖+0.2 mg/L ZT+0.15 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IAA+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L GA 的初代培養(yǎng)基上,置于25 ℃、光照16 h 黑暗8 h 光周期下培養(yǎng)。分別在上述試驗(yàn)材料中各選取4個(gè)株系的種子和莖段開展上述試驗(yàn),每處理每個(gè)株系接種種子和莖段各5 粒(個(gè)),3 次重復(fù)。每隔3~5 d 觀察1 次,及時(shí)為有污染外植體瓶中的未被污染的外植體更換培養(yǎng)基,40 d 后統(tǒng)計(jì)污染率以及成活率,篩選出最佳的消毒方法和生長(zhǎng)良好的株系。其余株系的種子和莖段以篩選出來(lái)的最佳方案處理。

    1.2.2 繼代培養(yǎng)

    以初代培養(yǎng)獲得的2 個(gè)生長(zhǎng)較良好的株系為試材,分別在初代培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,設(shè)置0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/L的6-BA 梯度處理。每個(gè)處理接種3 瓶,每瓶接種5 個(gè)外植體,3 次重復(fù)。40 d 后調(diào)查外植體擴(kuò)繁梢數(shù)和幼苗高度,并計(jì)算增殖倍數(shù)。

    1.2.3 生根培養(yǎng)和移栽

    生根試驗(yàn)采用一步生根法和兩步生根法[11]2 種方法。

    (1)一步生根法。取長(zhǎng)勢(shì)良好的培養(yǎng)苗,切取長(zhǎng)度3~4 cm 的無(wú)根新莖,接種到分別添加0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 mg/L IBA 的1/2MS 生根培養(yǎng)基上。每個(gè)處理接種2 瓶,每瓶接種5 個(gè)外植體,3 次重復(fù)。30 d 后統(tǒng)計(jì)生根率和生根條數(shù)。

    (2)兩步生根法。取長(zhǎng)勢(shì)良好的培養(yǎng)苗,切取長(zhǎng)度3~4 cm 的無(wú)根新莖,接種到分別添加2.0、3.0、4.0 mg/L IBA 的MS 生根培養(yǎng)基上,分別暗處理2、3、4、5 d,然后轉(zhuǎn)移至不添加任何生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的1/2MS 培養(yǎng)基中。每處理接種3 瓶,每瓶接種3 個(gè)外植體,3 次重復(fù)。30 d 后統(tǒng)計(jì)生根率和生根條數(shù)。

    當(dāng)試管苗根長(zhǎng)3~4 cm 時(shí),打開瓶口進(jìn)行5 d的煉苗。然后清洗試管苗根部培養(yǎng)基,移栽至營(yíng)養(yǎng)缽中,覆膜保濕,培養(yǎng)基質(zhì)為草炭土∶黏土=1∶1。15 d 后,逐漸打開薄膜繼續(xù)培養(yǎng),待緩苗后帶土移栽至田間。

    1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel 軟件進(jìn)行處理和統(tǒng)計(jì),用SPSS 軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 不同消毒劑和消毒時(shí)間對(duì)杜梨不同外植體消毒效果的影響

    2.1.1 不同消毒劑和消毒時(shí)間對(duì)杜梨種子消毒效果的影響

    杜梨砧木種子經(jīng)過滅菌后接種到初代培養(yǎng)基上,5 d 后出現(xiàn)不同程度的污染。如表1 所示,在2種不同的消毒劑處理下,隨著消毒時(shí)間的延長(zhǎng),外植體的污染率均呈逐漸下降的趨勢(shì),存活率均呈先上升后下降的趨勢(shì)。0.1%HgCl2處理10 min,雖然污染率(13.33%)略高于12 min 處理(10.00%),但外植體存活率最高(66.67%),消毒效果最好。5%NaClO 處理10 min 也具有較好的消毒效果,但存活率只有53.33%,低于0.1%HgCl2處理。綜合污染率和存活率,最適合杜梨種子外植體的消毒方式為0.1%HgCl2處理10 min。上述處理共獲得了14 份杜梨組培株系(圖版2-A),其中,株系7-4 長(zhǎng)勢(shì)良好,用于下一步的繼代增殖研究。

    表1 不同消毒劑及消毒時(shí)間對(duì)杜梨種子消毒效果的影響

    2.1.2 不同消毒劑和消毒時(shí)間對(duì)杜梨砧木莖段消毒效果的影響

    杜梨莖段經(jīng)過滅菌后接種到初代培養(yǎng)基上,3 d后出現(xiàn)污染,不同消毒時(shí)間和消毒劑處理下其污染率、存活率均有差異。如表2 所示,在2 種不同的消毒劑處理下,外植體的污染率和存活率也隨著消毒時(shí)間延長(zhǎng)分別呈逐漸下降和先上升后下降的趨勢(shì),2 種消毒劑分別在處理12 min 和15 min 時(shí),污染率均降到了0,但存活率均較低。綜合考慮污染率和存活率,以5%NaClO 處理10 min 效果最好,外植體存活率可達(dá)77.78%。上述處理共獲得了7 份杜梨組培株系(圖版2-B),其中,株系11-2 長(zhǎng)勢(shì)較好,用于下一步的繼代增殖研究。

    表2 不同消毒劑及消毒時(shí)間對(duì)杜梨莖段消毒效果的影響

    2.2 不同濃度6-BA 對(duì)杜梨株系生長(zhǎng)和增殖的影響

    2.2.1 不同濃度6-BA 對(duì)杜梨株系7-4 生長(zhǎng)和增殖的影響

    由圖版2-C 和表3 可以看出,杜梨株系7-4 組培苗在6-BA 濃度較低時(shí),增殖系數(shù)較低,但株高較高,其中,6-BA 濃度為0.15 mg/L 時(shí),株高最高,且葉片較大,枝條更為粗壯,適合進(jìn)一步進(jìn)行移栽、生根、再生等試驗(yàn)。隨著6-BA 濃度的升高,7-4組培苗的增殖系數(shù)呈上升趨勢(shì),但濃度過高,會(huì)產(chǎn)生玻璃化現(xiàn)象且株高降低。其中,在6-BA 濃度為2.5 mg/L 時(shí),增殖系數(shù)最高,達(dá)到6.33,但是組培苗有玻璃化現(xiàn)象。因此,綜合考慮組培苗的生長(zhǎng)狀態(tài),0.3~1.5 mg/L 的6-BA 濃度均可取得較好的增殖效果。

    表3 不同濃度6-BA 對(duì)7-4 生長(zhǎng)和增殖的影響

    2.2.2 不同濃度6-BA 對(duì)杜梨株系11-2 生長(zhǎng)和增殖的影響

    如圖版2-D、表4 所示,杜梨株系11-2 組培苗在不同6-BA 濃度處理下,整體株高和增殖系數(shù)均低于株系7-4,說(shuō)明基因型對(duì)其組培苗的生長(zhǎng)影響較大。當(dāng)6-BA 濃度為0.1 mg/L 時(shí),11-2 的株高最高,為2.32 cm,適合進(jìn)一步進(jìn)行移栽、生根、再生等試驗(yàn)。在各6-BA 濃度處理下,11-2 的增殖系數(shù)均較低,甚至不增殖,在濃度為2.0 mg/L 時(shí),增殖系數(shù)最高,為1.88,此時(shí)的株高也較高,可作為株系11-2 增殖培養(yǎng)適宜的6-BA 濃度。

    表4 不同濃度6-BA 對(duì)11-2 生長(zhǎng)和增殖的影響

    2.3 不同方法和不同濃度IBA 處理對(duì)杜梨株系7-4 生根的影響

    前期試驗(yàn)得出11-2 苗矮,生長(zhǎng)緩慢,不適宜進(jìn)行生根試驗(yàn);杜梨株系7-4 組培苗生長(zhǎng)健壯,株高和繁殖系數(shù)均較高,對(duì)其進(jìn)行了生根培養(yǎng)試驗(yàn)。如表5 所示,不同方法和不同濃度的IBA 處理對(duì)杜梨株系7-4 的生根影響較大,其中,一步生根法中不同濃度IBA 處理均能誘導(dǎo)其生根,但低濃度下生根率較低,濃度在0.3 mg/L 以下時(shí),生根率在5.00%以下,當(dāng)IBA 濃度增加到2.0 mg/L 時(shí),其生根率達(dá)到最高,為85.00%,且顯著高于其他處理,此時(shí)的平均生根數(shù)為3.82 條,也是所有處理中最高的。兩步生根法中,前期IBA 處理天數(shù)對(duì)7-4 的生根影響較大,其中以4.0 mg/L IBA 處理3 d 效果最好,生根率(55.56%)和平均生根數(shù)(2.67 條)均較高,但低于一步生根法中的最佳濃度。因此,IBA 濃度為2.0 mg/L 的一步生根法最有利于杜梨株系7-4 的生根,將以此方法生根的7-4 組培苗進(jìn)行了移栽,移栽成活率在90%以上(圖版2-E)。

    表5 不同生根方法對(duì)7-4 生根的影響

    3 討論與結(jié)論

    氯化汞是一種劇毒的重金屬消毒劑,次氯酸鈉是一種氧化還原消毒劑,常用于植物組織培養(yǎng)的外植體消毒,殺菌時(shí)間過長(zhǎng),植物組織會(huì)中毒,生長(zhǎng)點(diǎn)會(huì)被殺死,進(jìn)而影響成活率;殺菌時(shí)間太短,將導(dǎo)致外源菌不能被完全殺死,增加污染率,合理的滅菌時(shí)間對(duì)于外植體的接種非常重要[12]。本研究中杜梨種子和幼嫩莖段分別以0.1%HgCl2消毒10 min和5%NaClO 消毒10 min 效果最好,這是由于種子具有種皮,而種皮較厚,可以使用更加強(qiáng)力的消毒劑,而莖段組織較為幼嫩,毒性過強(qiáng)的消毒劑在滅殺外源菌的同時(shí),也提高了外植體的致死率,所以2 種外植體選用的最佳消毒劑有所不同。這與王瑩等[13]對(duì)耐鹽彩葉杜梨莖尖消毒試驗(yàn)的研究結(jié)果不同,其原因可能是選用的材料品種和試驗(yàn)部位不同。而本試驗(yàn)中種子材料采用5%NaClO 消毒10 min 也獲得了53.33%的外植體存活率,雖然低于HgCl2處理,從環(huán)保的角度來(lái)看,該消毒方法也是一個(gè)不錯(cuò)的選擇。

    細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素是影響試管苗器官形成的主要因素[14]。前人研究表明,同一品種在不同培養(yǎng)基上的表現(xiàn)不同,不同品種在同一培養(yǎng)條件下表現(xiàn)也有所不同[15]。本試驗(yàn)中杜梨砧木莖段的增殖分化與細(xì)胞分裂素6-BA 濃度有關(guān),在一定濃度范圍內(nèi),莖段的增殖系數(shù)隨著6-BA 濃度的升高而升高,但是當(dāng)6-BA 超過一定濃度后,組培苗的生長(zhǎng)狀態(tài)出現(xiàn)異常。對(duì)于杜梨株系7-4 而言,當(dāng)6-BA 濃度達(dá)到2.5 mg/L 時(shí),組培苗開始出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象,并且開始變矮,雖然增殖系數(shù)有所增高,但是苗的狀態(tài)已經(jīng)不利于進(jìn)一步的培養(yǎng),植株纖細(xì),有效莖少,多為簇狀的無(wú)效莖;當(dāng)6-BA 的濃度達(dá)到3.0 mg/L時(shí),莖的增殖開始被抑制,增殖系數(shù)降低并且生成的無(wú)效莖多,不適宜進(jìn)行增殖;當(dāng)6-BA 的濃度為0.3、0.5、1.0、1.5 mg/L 時(shí),其植株生長(zhǎng)正常,其增殖系數(shù)均在3.9 以上。因此,本試驗(yàn)中確定7-4 株系增殖培養(yǎng)的最佳6-BA 濃度為0.3~1.5 mg/L。由此可知,想要進(jìn)行有效的增殖,需要適當(dāng)?shù)?-BA濃度,過高或過低的6-BA 濃度都不利于增殖,6-BA的用量?jī)H能在一定的范圍內(nèi)提高增殖率,這與王蘇珂等[4]、湯紹虎等[16]和金青等[17]在6-BA 對(duì)梨組織培養(yǎng)影響的研究結(jié)果相一致。對(duì)于株系11-2 來(lái)說(shuō),在不同6-BA 濃度處理下,莖的增殖系數(shù)均較低,這可能與品種本身的基因型有關(guān),然而除了6-BA,生長(zhǎng)素和其他類型細(xì)胞分裂素組合也可能對(duì)其生長(zhǎng)產(chǎn)生重要影響。如在邱玉賓等[18]和方明等[19]的研究中,生長(zhǎng)素就分別對(duì)北美豆梨和杜梨的增殖產(chǎn)生了重要影響。本研究中僅對(duì)單一水平的生長(zhǎng)素與不同濃度的6-BA 組合進(jìn)行了試驗(yàn),其他生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑組合能否提高11-2 株系的增殖系數(shù),還需要做進(jìn)一步研究。

    不定根誘導(dǎo)是組培過程中關(guān)鍵的一步[20],不定根的生長(zhǎng)對(duì)組培苗在生產(chǎn)中大規(guī)模應(yīng)用有著重要的意義,為組培苗的移栽和生長(zhǎng)提供了良好的基礎(chǔ)。生長(zhǎng)素是誘導(dǎo)組培苗生根的重要因素,但生長(zhǎng)素的種類和濃度都會(huì)對(duì)生根率和平均生根數(shù)有影響,濃度過高或過低都不利于組培苗的生根。目前,應(yīng)用最多的生根誘導(dǎo)劑主要是IBA。前人研究表明,低糖低鹽培養(yǎng)基有利于多數(shù)植物試管苗生根[21-22],而IBA 可以刺激嫩葉和嫩芽形成的IAA 的運(yùn)輸,從而促進(jìn)生根,也可以在輔酶的作用下轉(zhuǎn)化成IAA 發(fā)揮作用[23-24]。本研究以2.0 mg/L IBA 的一步生根法,在杜梨株系7-4 的生根研究中取得了良好效果,這與羅嘉亮等[25]研究的杜梨不定芽生根最理想的IBA 濃度為0.5 mg/L 的結(jié)果不同,可能是選用的杜梨株系和生長(zhǎng)狀態(tài)不同導(dǎo)致,但生根率與其比較有明顯的提高,該結(jié)果可為7-4 株系的大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用提供有效的技術(shù)支撐。

    猜你喜歡
    杜梨培苗株系
    過表達(dá)NtMYB4a基因增強(qiáng)煙草抗旱能力
    釀酒酵母對(duì)制取杜梨種子的影響
    北方果樹(2020年6期)2020-11-14 01:35:42
    嫦娥5號(hào)返回式試驗(yàn)衛(wèi)星小麥育種材料研究進(jìn)展情況
    “增城蜜菊”組培苗有機(jī)栽培管理技術(shù)
    梨子變形記
    瞎想什么呢
    不同組培方法對(duì)香蕉組培苗假植階段生理特征的影響
    衢州椪柑變異株系—黃皮椪柑相關(guān)特性研究
    浙江柑橘(2016年1期)2016-03-11 20:12:31
    小杜梨大變身
    兒童繪本(2015年4期)2015-05-25 17:59:48
    馬鈴薯組培苗薊馬污染防治試驗(yàn)
    村上凉子中文字幕在线| 黄片小视频在线播放| 国产精华一区二区三区| 国产视频内射| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲av免费高清在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 亚洲 国产 在线| 可以在线观看毛片的网站| 国产69精品久久久久777片| 色综合站精品国产| 91久久精品电影网| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久午夜亚洲精品久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产精品永久免费网站| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲av电影不卡..在线观看| 我要搜黄色片| 日韩欧美精品v在线| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 性欧美人与动物交配| 一级毛片女人18水好多| 日韩免费av在线播放| 中文字幕高清在线视频| 亚洲欧美激情综合另类| 男女之事视频高清在线观看| 国产不卡一卡二| 日韩国内少妇激情av| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美成狂野欧美在线观看| 天堂√8在线中文| 久久久久亚洲av毛片大全| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产精品久久电影中文字幕| 免费看十八禁软件| 久久久成人免费电影| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本在线视频免费播放| 日韩高清综合在线| 欧美在线黄色| 精品福利观看| 免费人成在线观看视频色| 中出人妻视频一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 国产91精品成人一区二区三区| 此物有八面人人有两片| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 午夜精品一区二区三区免费看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| av在线天堂中文字幕| 啦啦啦免费观看视频1| 白带黄色成豆腐渣| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲av熟女| 99在线人妻在线中文字幕| www日本黄色视频网| 日本成人三级电影网站| 午夜日韩欧美国产| 国产亚洲欧美98| 中亚洲国语对白在线视频| 十八禁网站免费在线| 国产一区在线观看成人免费| 精品国产超薄肉色丝袜足j| netflix在线观看网站| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 91久久精品国产一区二区成人 | 亚洲激情在线av| 一进一出抽搐gif免费好疼| 搞女人的毛片| 天堂网av新在线| 国产亚洲欧美98| 天天躁日日操中文字幕| 国产精品日韩av在线免费观看| 丁香欧美五月| av在线蜜桃| 岛国在线观看网站| 国产av麻豆久久久久久久| 久久伊人香网站| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美日韩综合久久久久久 | 动漫黄色视频在线观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲天堂国产精品一区在线| 性欧美人与动物交配| 欧美色视频一区免费| 91久久精品国产一区二区成人 | 九九热线精品视视频播放| 国产精品av视频在线免费观看| av天堂在线播放| 久久久久久九九精品二区国产| 欧美日韩精品网址| 色综合婷婷激情| 亚洲天堂国产精品一区在线| 在线看三级毛片| 十八禁人妻一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 久久久久久国产a免费观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 午夜免费成人在线视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 精品欧美国产一区二区三| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 黄片大片在线免费观看| 51午夜福利影视在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 国产91精品成人一区二区三区| av国产免费在线观看| 亚洲 国产 在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 91麻豆av在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲最大成人手机在线| 免费搜索国产男女视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 免费av毛片视频| 久久人人精品亚洲av| 精品一区二区三区人妻视频| 婷婷精品国产亚洲av| 窝窝影院91人妻| 日韩欧美国产在线观看| e午夜精品久久久久久久| 嫁个100分男人电影在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 久久精品国产自在天天线| 亚洲成人久久性| 成年版毛片免费区| 99久久精品一区二区三区| 国产精品久久久久久久久免 | 日本五十路高清| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲色图av天堂| 国产亚洲精品一区二区www| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产精品久久电影中文字幕| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一本一本综合久久| 天美传媒精品一区二区| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品一及| 国产成人系列免费观看| 好男人电影高清在线观看| 欧美区成人在线视频| 色老头精品视频在线观看| 99久久99久久久精品蜜桃| 男女那种视频在线观看| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 一进一出抽搐动态| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲精华国产精华精| av视频在线观看入口| 18禁在线播放成人免费| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产成年人精品一区二区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 中文亚洲av片在线观看爽| 网址你懂的国产日韩在线| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美乱码精品一区二区三区| 色综合婷婷激情| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 一级毛片女人18水好多| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产精品永久免费网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 免费看光身美女| 亚洲午夜理论影院| 中文字幕高清在线视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲第一电影网av| 色综合欧美亚洲国产小说| 人妻久久中文字幕网| 很黄的视频免费| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av五月六月丁香网| 国产精品乱码一区二三区的特点| 丁香六月欧美| 亚洲人成网站高清观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 99久久成人亚洲精品观看| 99久国产av精品| 女人被狂操c到高潮| 热99re8久久精品国产| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 变态另类成人亚洲欧美熟女| 精品福利观看| av福利片在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲av五月六月丁香网| 色老头精品视频在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| 一个人看视频在线观看www免费 | 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 老鸭窝网址在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日韩亚洲欧美综合| 黄色片一级片一级黄色片| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产成人a区在线观看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产午夜精品论理片| 手机成人av网站| 九九在线视频观看精品| 老汉色∧v一级毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 国产成人系列免费观看| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产成年人精品一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 精品免费久久久久久久清纯| 一区二区三区免费毛片| 国产欧美日韩一区二区精品| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美极品一区二区三区四区| 精品人妻一区二区三区麻豆 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品 国内视频| 亚洲国产色片| 女人被狂操c到高潮| 高清在线国产一区| 国产av麻豆久久久久久久| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 免费无遮挡裸体视频| 不卡一级毛片| 午夜福利在线在线| 黄色女人牲交| 国产黄a三级三级三级人| 观看美女的网站| 美女cb高潮喷水在线观看| av女优亚洲男人天堂| 欧美黄色淫秽网站| 国产久久久一区二区三区| 欧美一级a爱片免费观看看| 看黄色毛片网站| 欧美激情久久久久久爽电影| 成人特级黄色片久久久久久久| 1000部很黄的大片| 村上凉子中文字幕在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 十八禁网站免费在线| 听说在线观看完整版免费高清| 最近最新中文字幕大全免费视频| 最近最新免费中文字幕在线| 高清毛片免费观看视频网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲成a人片在线一区二区| 人妻久久中文字幕网| 亚洲天堂国产精品一区在线| 成人欧美大片| 欧美日韩精品网址| 大型黄色视频在线免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看 | 日韩亚洲欧美综合| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲天堂国产精品一区在线| 亚洲在线自拍视频| 91九色精品人成在线观看| 波野结衣二区三区在线 | 午夜福利欧美成人| 亚洲18禁久久av| 深爱激情五月婷婷| 一边摸一边抽搐一进一小说| bbb黄色大片| 亚洲avbb在线观看| 久久久精品大字幕| 国产亚洲精品av在线| 日本成人三级电影网站| 在线观看av片永久免费下载| eeuss影院久久| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 免费大片18禁| 亚洲五月婷婷丁香| av片东京热男人的天堂| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| av专区在线播放| 757午夜福利合集在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 免费av毛片视频| а√天堂www在线а√下载| 美女大奶头视频| 高清日韩中文字幕在线| 国产精品爽爽va在线观看网站| 免费搜索国产男女视频| 欧美日韩福利视频一区二区| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 我的老师免费观看完整版| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产三级黄色录像| 天天躁日日操中文字幕| 三级毛片av免费| 99久久成人亚洲精品观看| 看片在线看免费视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品一及| 男女之事视频高清在线观看| 国产真实乱freesex| 成人18禁在线播放| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产免费一级a男人的天堂| 久久这里只有精品中国| 舔av片在线| 国产真实乱freesex| 国产在视频线在精品| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产爱豆传媒在线观看| 国产精品一及| 丝袜美腿在线中文| 成年免费大片在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲精品色激情综合| 久久亚洲真实| 又爽又黄无遮挡网站| 99久久精品一区二区三区| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产成人aa在线观看| 亚洲在线自拍视频| 亚洲国产精品合色在线| 午夜福利18| 九九热线精品视视频播放| 桃红色精品国产亚洲av| 国产v大片淫在线免费观看| 99久久精品一区二区三区| 在线观看免费视频日本深夜| 国产成人系列免费观看| 欧美一区二区国产精品久久精品| 最后的刺客免费高清国语| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲中文日韩欧美视频| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产一区在线观看成人免费| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 久久久色成人| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品免费一区二区三区在线| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲精品456在线播放app | 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美色视频一区免费| 午夜久久久久精精品| 成年版毛片免费区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 丰满乱子伦码专区| 99在线视频只有这里精品首页| 欧美大码av| 波野结衣二区三区在线 | 九九热线精品视视频播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 两个人看的免费小视频| 精品不卡国产一区二区三区| 久久这里只有精品中国| 欧美zozozo另类| 99久久综合精品五月天人人| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 有码 亚洲区| 熟女人妻精品中文字幕| 窝窝影院91人妻| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲欧美日韩高清专用| 真实男女啪啪啪动态图| 又紧又爽又黄一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 狠狠狠狠99中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| 午夜日韩欧美国产| 成人国产一区最新在线观看| 九色成人免费人妻av| 青草久久国产| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产老妇女一区| 亚洲精品成人久久久久久| 黄色视频,在线免费观看| 欧美3d第一页| 99国产精品一区二区三区| 色噜噜av男人的天堂激情| 久久6这里有精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 欧美不卡视频在线免费观看| 一a级毛片在线观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 一a级毛片在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 特大巨黑吊av在线直播| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲成人久久性| 国产精品三级大全| 一级黄片播放器| 内射极品少妇av片p| 一a级毛片在线观看| 日韩欧美精品免费久久 | 老司机午夜十八禁免费视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲美女黄片视频| 欧美成人性av电影在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 一区二区三区国产精品乱码| 一区二区三区激情视频| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 色播亚洲综合网| 欧美大码av| 国产高潮美女av| 精品久久久久久久毛片微露脸| 女人被狂操c到高潮| 在线天堂最新版资源| 黄色视频,在线免费观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产爱豆传媒在线观看| 俺也久久电影网| 又黄又爽又免费观看的视频| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲avbb在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 老鸭窝网址在线观看| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 国产精品久久久久久精品电影| 日韩欧美精品免费久久 | 国产成人啪精品午夜网站| 久久香蕉精品热| 国产成人福利小说| x7x7x7水蜜桃| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 久久99热这里只有精品18| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品野战在线观看| 日本五十路高清| 免费人成视频x8x8入口观看| 久久人妻av系列| 又粗又爽又猛毛片免费看| 观看美女的网站| svipshipincom国产片| 999久久久精品免费观看国产| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 亚洲国产精品合色在线| 香蕉av资源在线| 可以在线观看的亚洲视频| 无限看片的www在线观看| 热99在线观看视频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | av福利片在线观看| 亚洲av成人av| 国产97色在线日韩免费| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲av美国av| 老司机午夜十八禁免费视频| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| aaaaa片日本免费| 成年版毛片免费区| 亚洲av成人av| 性欧美人与动物交配| 小说图片视频综合网站| 国产三级黄色录像| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 又爽又黄无遮挡网站| 精品不卡国产一区二区三区| 国产一区二区在线av高清观看| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲成人免费电影在线观看| 色综合站精品国产| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 性色av乱码一区二区三区2| 久久人妻av系列| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 亚洲七黄色美女视频| 国产 一区 欧美 日韩| 欧美又色又爽又黄视频| 午夜福利在线观看吧| 午夜视频国产福利| 一区福利在线观看| 在线观看日韩欧美| 激情在线观看视频在线高清| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产午夜福利久久久久久| 我要搜黄色片| 国产成人a区在线观看| 美女大奶头视频| 99在线视频只有这里精品首页| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 十八禁网站免费在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲精品在线观看二区| 黄片大片在线免费观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| www.999成人在线观看| 欧美另类亚洲清纯唯美| 97碰自拍视频| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 国产精品,欧美在线| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产极品精品免费视频能看的| 搡老妇女老女人老熟妇| 免费观看精品视频网站| avwww免费| 精品无人区乱码1区二区| 99视频精品全部免费 在线| 免费看美女性在线毛片视频| 国产成人av激情在线播放| 国产一区在线观看成人免费| 久99久视频精品免费| av天堂中文字幕网| 18禁在线播放成人免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 男人舔女人下体高潮全视频| 三级毛片av免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 搡老妇女老女人老熟妇| 国产激情欧美一区二区| 9191精品国产免费久久| 久久99热这里只有精品18| 日本黄色片子视频| 悠悠久久av| 午夜福利在线观看吧| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产国拍精品亚洲av在线观看 | 脱女人内裤的视频| 免费av毛片视频| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久久亚洲av毛片大全| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 日韩精品青青久久久久久| 午夜免费激情av| 成人国产综合亚洲| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲av成人精品一区久久| 国产一区在线观看成人免费| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 三级国产精品欧美在线观看| 色精品久久人妻99蜜桃| 特级一级黄色大片| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 免费在线观看日本一区| 香蕉av资源在线| 午夜福利成人在线免费观看| av中文乱码字幕在线| 亚洲人成电影免费在线| 欧美三级亚洲精品| 国产精品 国内视频| 国内精品一区二区在线观看| 深爱激情五月婷婷| 看黄色毛片网站| 床上黄色一级片| 亚洲av成人精品一区久久| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 国产av麻豆久久久久久久| 99热只有精品国产| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产真人三级小视频在线观看| 成年免费大片在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 久9热在线精品视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产免费男女视频| 18禁在线播放成人免费| 亚洲国产欧美网| 国产三级黄色录像| 成人一区二区视频在线观看| 波多野结衣高清作品| 日本一本二区三区精品| 97超视频在线观看视频| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 中文字幕av成人在线电影| 午夜精品在线福利| 一区二区三区激情视频| 男人的好看免费观看在线视频| 国产黄片美女视频| 欧美激情在线99| 免费看光身美女| 国产黄色小视频在线观看| 内射极品少妇av片p| 黄色视频,在线免费观看| 看黄色毛片网站| 九九热线精品视视频播放| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美性感艳星| 最近最新中文字幕大全电影3| 黄色片一级片一级黄色片| 国产黄片美女视频| 日韩高清综合在线| 亚洲国产高清在线一区二区三|