雞心包積液綜合征診斷與防控

朱慶賀 苗艷 蘭世捷 張蕾 田秋豐 張紅 孟維珊 金振華 劉秋瑾 薛沾枚 劉雪松

雞心包積液綜合征（hydropericardium Syndrome，

HPS），又稱雞安卡拉病，是由禽腺病毒4型（Fowl adenovirus serotype-4，F(xiàn)AdV-4）引起的一種以心包積液、肝炎和腎炎為主要臨床特征的雞的新發(fā)傳染病。2015年該病開(kāi)始在我國(guó)暴發(fā)并在全國(guó)多個(gè)省市地區(qū)蔓延，發(fā)病率和致死率均較高，嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，給養(yǎng)雞業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 臨床癥狀

病雞表現(xiàn)出不同的癥狀，包括嗜睡、蜷縮在一起、羽毛豎起、食欲不振、排黃色粘液狀糞便、雞只體重下降等。

2 病理剖檢變化

心包積液是最明顯的肉眼病變。肝臟腫脹、易碎，呈黃色，伴有壞死和斑片狀出血。心包囊呈氣球狀，在其內(nèi)可觀察到透明的稻草色液體。腎臟蒼白、腫脹、易碎，腎小管中有尿酸鹽。此外，在大多數(shù)病死雞中可以觀察到脾腫大和胸腺萎縮。臨床病理學(xué)參數(shù)顯示，病雞出現(xiàn)嚴(yán)重的貧血，且所有血液指標(biāo)都顯著降低。

3 診斷

根據(jù)該病的臨床癥狀和流行特點(diǎn)可作出初步診斷，通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)進(jìn)行確診。

3.1 電鏡檢查

透射電子顯微鏡（Transmission Electron Microscopy，

TEM）可以對(duì)病毒、細(xì)菌、原生動(dòng)物和真菌進(jìn)行超微結(jié)構(gòu)檢查，在微生物診斷中發(fā)揮著重要作用。透射電鏡觀察到，從感染病例中純化的、陰性染色的肝勻漿、肝細(xì)胞或病毒顆粒中存在離散的二十面體腺病毒樣顆粒，這表明FAdV-4是HPS的致病因子。在被感染的肝細(xì)胞細(xì)胞核中發(fā)現(xiàn)的腺病毒顆粒具有典型的腺病毒外觀，無(wú)包膜、六邊形、二十面體，直徑約75 nm，這有助于確診該病。

3.2 病毒的分離培養(yǎng)

從血液、體液或被感染有機(jī)體的組織中分離病毒是診斷FAdV-4感染的金標(biāo)準(zhǔn)。雞胚、雞胚原代腎細(xì)胞、雞胚腎細(xì)胞、雞胚肝細(xì)胞、雞胚成纖維細(xì)胞、雞肝癌細(xì)胞系（LMH）和QT-35細(xì)胞均可用于分離FAdV-4。

3.3 分子生物學(xué)檢測(cè)方法

目前，已建立了多種用于檢測(cè)FAdV-4的分子生物學(xué)檢測(cè)方法，包括PCR、熒光定量PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）等。PCR是用于檢測(cè)FAdV-4的最主要分子生物學(xué)方法，禽腺病毒六鄰體（Hexon）基因包括2個(gè)保守區(qū)（P1和P2）、4個(gè)可變區(qū)（L1～L4），是用于研究檢查禽腺病毒PCR診斷技術(shù)的主要基因。

3.4 血清學(xué)檢測(cè)方法

用于檢測(cè)FAdV-4的血清學(xué)方法包括瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、病毒中和試驗(yàn)（VN）、間接免疫熒光試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等。基于制備的超免血清，通過(guò)瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散、瓊脂凝膠沉淀試驗(yàn)和間接免疫熒光分析可在肝臟勻漿提取物或不同組織中檢測(cè)到FAdV-4?？梢酝ㄟ^(guò)間接血凝法檢測(cè)疫苗接種后的抗體效價(jià)和血清陽(yáng)性率和被感染雞的HPS試劑抗體。VN試驗(yàn)是一種更為靈敏、準(zhǔn)確的方法，最早被用于區(qū)分FAdV-4血清型、評(píng)估疫苗誘導(dǎo)的抗體反應(yīng)以及診斷FAdV-4感染情況，但因VN試驗(yàn)較為昂貴且耗時(shí)，限制了該方法的使用。ELISA法是實(shí)驗(yàn)室通常用于早期診斷的一種良好技術(shù)，因靈敏度較高，適用于批量抗體標(biāo)本檢測(cè)，因此被廣泛應(yīng)用，也是目前生產(chǎn)上檢測(cè)FAdV-4的主要技術(shù)。

4 防控

雞心包積液綜合征自2015年在我國(guó)暴發(fā)以來(lái)，已嚴(yán)重危害我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展，給養(yǎng)雞業(yè)帶來(lái)了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。研究人員采用了各種策略來(lái)預(yù)防和控制HPS。良好的飼養(yǎng)方式、對(duì)場(chǎng)所和設(shè)備進(jìn)行嚴(yán)格的消毒、充分的通風(fēng)、限制養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員或訪客的活動(dòng)等，均可顯著降低該病感染的機(jī)會(huì)。在飲用水中添加濃度為0.07%～0.10%的碘伏溶液可有效降低肉雞HPS的病程和死亡率。目前，尚無(wú)治療該病的特效藥物和具體治療方法。臨床上用抗生素預(yù)防繼發(fā)性細(xì)菌感染，疫苗接種仍是預(yù)防FAdV-4的最主要方式?？蒲腥藛T已研發(fā)了多種疫苗用于該病的預(yù)防，包括弱毒疫苗、滅活疫苗和基因工程疫苗等。

在HPS暴發(fā)的早期階段，用受感染的肝臟勻漿制備的滅活疫苗是控制該病的主要手段，該方法被證明能夠有效控制FAdV-4的傳播，但由于強(qiáng)毒株滅活不當(dāng)、疫苗生產(chǎn)期間衛(wèi)生條件差、缺乏適當(dāng)?shù)淖魟┑纫蛩乜赡軙?huì)導(dǎo)致該病傳播擴(kuò)散。因此，為將傳播風(fēng)險(xiǎn)降到最低，建議該病毒應(yīng)在特異性無(wú)病原體的雞胚蛋和細(xì)胞培養(yǎng)物上繁殖，SPF雞胚蛋和細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)具有嚴(yán)格的生物安全性和較高的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)滅活疫苗、減毒活疫苗的更好選擇。