κ-阿片肽受體激活抑制內(nèi)皮素-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路有關(guān)

邢 玲,冀建偉,李桃英,趙繼玲,李志業(yè),楊育紅

(1.鄭州大學(xué)第二附屬醫(yī)院,河南 鄭州 450014；2.錦州醫(yī)科大學(xué) 心腦血管藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，藥理學(xué)教研室,遼寧 錦州 121001)

高血壓、心瓣膜病及心肌炎等多種原因所致的心血管疾病均可引起一種心臟功能的代償性改變，即心肌肥大,主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞體積的增大、細(xì)胞外基質(zhì)增多所致的心肌纖維化。這種心肌細(xì)胞增大而無(wú)細(xì)胞分裂的現(xiàn)象如果未進(jìn)行及時(shí)有效的干預(yù)會(huì)最終造成心肌肥厚,而這種長(zhǎng)期持續(xù)性未干預(yù)的心肌肥厚是引起不可逆轉(zhuǎn)的心臟衰竭甚至猝死的一個(gè)重要原因[1]。

心肌細(xì)胞本身可以合成、釋放阿片肽,其對(duì)心臟活動(dòng)的調(diào)節(jié)方式為自分泌或旁分泌。許多研究顯示,心臟上存在κ阿片肽受體(kappa-opioid receptor,κ-OR)及δ-OR亞型。研究表明，κ-OR對(duì)心肌細(xì)胞可以產(chǎn)生負(fù)性調(diào)節(jié)作用,而該作用可以抑制多種因素如去甲腎上腺素、異丙腎上腺素、血管緊張素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)等誘導(dǎo)的心肌肥大[2],而這種抑制作用無(wú)一例外的都與細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i瞬變有關(guān)[3]。

研究顯示,血管內(nèi)皮素1(vascular endothelin-1,ET-1)誘導(dǎo)的心肌肥厚反應(yīng)是通過(guò)激活磷脂酶C(phospholipase C,PLC)、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)、磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)和絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)等通路實(shí)現(xiàn)的。ET-1屬于G蛋白偶聯(lián)受體,能夠結(jié)合G蛋白后激活PLC,后者讓二磷酸磷脂酰肌醇(phosphatidylinosito(4,5) biosphosphate,PIP2)水解為三磷酸肌醇(inositol triphosphate,IP3)及二酰基甘油(diacylglycerol,DG),IP3引起細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]i 的瞬變,并促成胞外Ca2+向胞內(nèi)轉(zhuǎn)移,使鈣調(diào)蛋白活化,然后觸發(fā)活化T細(xì)胞核因子(nuclear factor of activated T-lymphocytes,NFAT)核轉(zhuǎn)位,從而使相關(guān)基因、蛋白表達(dá)增加,最終造成心肌肥厚[4]。最新研究證明,該致心肌肥厚過(guò)程與ET-1和受體結(jié)合后通過(guò)PKC依賴(lài)性或PKC非依賴(lài)性等一系列過(guò)程激活MAPK使其磷酸化,進(jìn)而激活許多物質(zhì)以使肥厚基因表達(dá)增加有關(guān)[5]。MAPKs是一組蛋白絲/蘇氨酸激酶,其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路主要包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERKs)、應(yīng)激活化蛋白激酶(stress-activated protein kinase/c-Jun N-terminal kinase,SAPKs/JNKs)和p38三種[6],且ERK途徑是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化與存活等過(guò)程的重要信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。

而阿片肽是否通過(guò)ERK通路抑制ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大,國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究采用體外培養(yǎng)心肌細(xì)胞模型,重點(diǎn)觀察了κ阿片受體激動(dòng)劑(U50488H)和ERK抑制[1,4-diamino-2,3-dicyano-1,4-bis(o-aminophenylmercapto)butadiene,U0126]對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的影響及ANP-mRNA和ERK1/2表達(dá)的影響,以探討κ阿片受體對(duì)ERK誘導(dǎo)的心肌肥大的抑制作用及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠(生后1～3 d),雌雄不限,由河南省試驗(yàn)動(dòng)物中心提供,動(dòng)物許可證號(hào)SCXK(豫)2017-0001。

1.2 藥品與試劑胎牛血清(FB25015)購(gòu)于美國(guó)CLARK公司、DMEM培養(yǎng)基(SH30081.01)購(gòu)于澳洲 HyClone 公司、U50488H、κ-OR受體拮抗劑(nor-binaltorphimine,NOR-BNI)、PKC抑制劑(bisindolylmaleimide IX mesylate,Ro-31-8220)、十二烷基硫酸鈉(sodium dodecyl sulfate,SDS)、百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)、ET-1、U0126、均購(gòu)自Sigma；PCR檢測(cè)試劑盒購(gòu)自大連寶信生物技術(shù)公司；RIPA buffer(SDS,Tritern X-100,PMSF)購(gòu)自上海生工,其他試劑均為分析純。

1.3 儀器信息超凈工作臺(tái)：江蘇吳縣市凈化技術(shù)研究所、二氧化碳孵箱：Sheldon Manufacturing Inc,USA、XD-101型倒置顯微鏡：OLYMPUS TOKYO,JAPAN、79-1磁力加熱攪拌器：江蘇金壇中大儀器廠、TDL-4型離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠制造、電子天平：北京賽多利斯天平有限公司、DNM-9602G酶標(biāo)分析儀：北京普朗新技術(shù)有限公司、2041 ELECTRO：RioRad Trans-Blot Sdelectrophoresis、Mini ProteanⅡ vertical：BioRad、PowerPac Basic：BioRad。

1.4 體外大鼠乳鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)[7]無(wú)菌環(huán)境下,眼科剪剪開(kāi)出生1～3 d的SD大鼠乳鼠劍突,取出心臟,用Hanks液沖洗3次,并剪至碎塊1 mm3大小,用胰蛋白酶(濃度為0.8 g·L-1)消化分離細(xì)胞。用含小牛血清(體積分?jǐn)?shù)為0.15)、DMEM培養(yǎng)基(體積分?jǐn)?shù)為0.84)、雙抗液(體積分?jǐn)?shù)為0.01,含1×10 U·L-1的青霉素,100 mg·L-1鏈霉素)的培養(yǎng)基對(duì)之前離心分離的細(xì)胞進(jìn)行處理,吹打均勻后接種于培養(yǎng)瓶其密度為1×109·L-1,或用24孔培養(yǎng)板接種其密度為0.5×109·L-1,培養(yǎng)箱為二氧化碳孵箱內(nèi)含5% CO2。為了減少血清中的成分對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,常規(guī)培養(yǎng)心肌細(xì)胞2 d后,更換為含0.004小牛血清的培養(yǎng)基再培養(yǎng)1 d后加入處理因素。

1.5 分組及給藥方法為了減少血清中成分對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響,常規(guī)培養(yǎng)心肌細(xì)胞48 h后,無(wú)菌條件下,加藥前更換培養(yǎng)基換為含0.04%小牛血清DMEM培養(yǎng)基,更換后送入通以5% CO2,孵箱中30 min后分組給藥,每組用5個(gè)培養(yǎng)瓶；如果是培養(yǎng)板,每板分為四組,每組6孔。分組如下：(1) 正常組、(2) ET-1 10 nmol·L-1組、(3) ET-1 10 nmol·L-1+U50488H 1 μmol·L-1組、(4) ET-1 10 nmol·L-1+U0126 1 μmol·L-1組、(5) ET-1 10 nmol·L-1+Ro-31-8220 1 μmol·L-1組 、(6) ET-1 10 nmol·L-1+U50488H 1 μmol·L-1+U0126 1 μmol·L-1組、(7) ET-1 10 nmol·L-1+U50488H 1 μmol·L-1+Ro-31-8220 1 μmol·L-1組、(8) ET-1 10 nmol·L-1+U50488H 1 μmol·L-1+NOR-BNI 1 μmol·L-1組、(9)ET-1 10 nmol·L-1+U50488H 1 μmol·L-1+PTX 5 mg·L-1組、(10) ET-1 10 nmol·L-1+U0126 1 μmol·L-1+NOR-BNI 1 μmol·L-1組、(11) ET-1 10 nmol·L-1+Ro-31-8220 1 μmol·L-1+NOR-BNI 1 μmol·L-1組。各組藥物的濃度以文獻(xiàn)報(bào)道為標(biāo)準(zhǔn)[8]，48 h后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定：各組先給相應(yīng)阻斷劑預(yù)處理,然后放入通以5% CO2的二氧化碳孵箱中；30 min后取出給保護(hù)藥，繼續(xù)送入上述二氧化碳孵箱中；30 min后取出加入造模藥ET-1；48 h后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定。

1.6 培養(yǎng)心肌細(xì)胞體積測(cè)量[9]測(cè)量細(xì)胞直徑進(jìn)而通過(guò)計(jì)算可以獲得細(xì)胞體積,用D-Hanks液快速3次沖洗培養(yǎng)孔,其內(nèi)加胰蛋白酶(濃度為0.3 mL·g·L-1),將其放入溫度為37 ℃的恒溫箱,10 min后,加入培養(yǎng)基(含有10%的血清)0.2 mL以結(jié)束消化,將細(xì)胞收集后加入到一個(gè)用硅化的蓋玻片制作的細(xì)胞室內(nèi),用倒置顯微鏡(擴(kuò)大400倍)觀察上述制作的細(xì)胞室內(nèi)的呈球形的細(xì)胞。細(xì)胞的直徑(R)利用計(jì)算機(jī)CIAS大恒細(xì)胞圖象分析系統(tǒng)測(cè)量,細(xì)胞的體積公式為4/3πr3(r=1/2R)。

1.7 RT-PCR法測(cè)心肌細(xì)胞ANP的mRNA表達(dá)[7]利用培養(yǎng)瓶培養(yǎng)大鼠心肌細(xì)胞,種植密度為1×108·L-1,分組給予藥物處理2 d后,丟掉培養(yǎng)液,以PBS洗滌2次,收集心肌細(xì)胞入EP管,經(jīng)過(guò)離心保留細(xì)胞成分,之后用TRIzol試劑完全裂解細(xì)胞,取此裂解液1 mL,抽提(氯仿)、沉淀(異丙醇),最后回收總RNA,并用-70 ℃冰箱貯存?zhèn)溆谩Ｒ?%瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度計(jì)(A260/A280)鑒定RNA的純度和濃度。取總RNA(約1 μg),進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。反轉(zhuǎn)錄條件如下：先42 ℃ 60 min,后99 ℃ 2 min,4 ℃保存。ANP引物序列(5′-3′)為GGC TCC TTC TCC ATC ACC AA TGT TAT CTT CGG TAC CG,內(nèi)參 GAPDH引物序列(5′-3′)為CAA AGT TGT CAT GGA TGA CCA TGG AGA AGG CTG GG。上述由大連寶信生物有限公司合成的引物。滅菌水溶解上述引物,配成100 μmol·L-1的上下游引物混合液,使用濃度(μmol·L-1)。

1.8 Western blot法測(cè)ERK1/2相對(duì)表達(dá)水平[10]細(xì)胞分組給藥48 h后,PBS緩沖液沖洗、離心、收集細(xì)胞,放入-70 ℃冰箱備用。對(duì)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定時(shí),每份制樣選取50 μg,每份制樣中選取10 μL作為樣品進(jìn)行點(diǎn)樣,點(diǎn)樣標(biāo)準(zhǔn)物為蛋白質(zhì)(Cell Signaling Tecnology,MA,USA)。采用恒壓電泳法電泳3～5 h,凝膠為變性的SDS聚丙烯酰胺,采用半干法轉(zhuǎn)模9～12 h,4 ℃條件下封閉過(guò)夜,洗膜,然后先用一抗(以1 ∶5 000稀釋的兔抗ERK及兔抗p-ERK)室溫條件下反應(yīng)2 h,隨后用二抗(以1 ∶2 000稀釋的鼠抗兔IgG抗體)室溫反應(yīng)1 h,Supel Signal West Pico試劑盒內(nèi)作用5 min,放射條件下顯影。

1.9 倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化[7]將倒置相差顯微鏡置于有機(jī)玻璃保溫箱內(nèi),并保持箱內(nèi)采用恒溫氣體對(duì)流裝置,使觀測(cè)中的培養(yǎng)板始終被37 ℃恒溫氣流覆蓋。用放大倍數(shù)為200倍目鏡觀察心肌細(xì)胞形態(tài)。

2 結(jié)果

2.1 U50488H對(duì)ET-1誘導(dǎo)心肌細(xì)胞體積增大的抑制作用ET-1組與對(duì)照組相比,心肌細(xì)胞體積明顯增大；與ET-1組相比,U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)均可明顯使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞體積變小,且三者顯著差異；當(dāng)U0126(1 μmol·L-1)或Ro-31-8220(50 nmol·L-1)存在時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)可以使心肌細(xì)胞體積減小現(xiàn)象被部分抑制；但當(dāng)用PTX(5 mg·L-1)預(yù)處理時(shí)U50488H(1 μmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞體積變小的現(xiàn)象基本消失；當(dāng)用NOR-BNI(1 μmol·L-1)預(yù)處理時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞體積變小的現(xiàn)象基本消失,且三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 1)。

Fig 1 Effects of different agents on cell size of cultured cardiacmytes induced by n=100)

2.2 U50488H對(duì)ET-1培養(yǎng)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞的ANP-mRNA的抑制作用ET-1組與對(duì)照組相比,心肌細(xì)胞ANP-mRNA表達(dá)明顯增多；與ET-1組相比,U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)均可明顯使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ANP-mRNA減少,且三者無(wú)顯著差異；當(dāng)U0126(1 μmol·L-1)或Ro-31-8220(50 nmol·L-1)存在時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)可以使心肌細(xì)胞ANP-mRNA表達(dá)減少的情況被部分抑制；但當(dāng)用PTX(5 mg·L-1)預(yù)處理時(shí)U50488H(1 μmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞體積變小的現(xiàn)象基本消失；當(dāng)用NOR-BNI(1 μmol·L-1)預(yù)處理時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞ANP-mRNA表達(dá)減少的現(xiàn)象基本消失,且三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 2)。

Fig 2 Effects of different agents on expression of ANPmRNA of cultured cardiacmytes induced by n=4)

2.3 U50488H對(duì)ET-1培養(yǎng)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞p-ERK相對(duì)表達(dá)含量的抑制作用ET-1組與對(duì)照組相比,心肌細(xì)胞ERK1/2表達(dá)含量明顯增多；與ET-1組相比,U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)均可明顯使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞p-ERK相對(duì)表達(dá)含量減少,且三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；當(dāng)U0126(1 μmol·L-1)或Ro-31-8220(50 nmol·L-1)存在時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)可以使心肌細(xì)胞p-ERK相對(duì)表達(dá)減少的現(xiàn)象被部分抑制；但當(dāng)用PTX(5 mg·L-1)預(yù)處理時(shí)，U50488H(1 μmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞p-ERK相對(duì)表達(dá)含量減少的現(xiàn)象基本消失；當(dāng)用NOR-BNI(1 μmol·L-1)預(yù)處理時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞p-ERK相對(duì)表達(dá)含量減少的現(xiàn)象基本消失,且三者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Fig 3)。

Fig 3 Effects of different agents on p-ERK relative expression of cultured cardiacmytes induced by n=4)

2.4 U50488H對(duì)ET-1培養(yǎng)誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞形態(tài)的影響ET-1組與對(duì)照組相比,心肌細(xì)胞明顯增大,形態(tài)變化不規(guī)則；與ET-1組相比,U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)均可明顯使ET-1誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞變小,且形態(tài)變化相對(duì)規(guī)則；當(dāng)U0126(1 μmol·L-1)或Ro-31-8220(50 nmol·L-1)存在時(shí),心肌細(xì)胞變小現(xiàn)象減弱,形態(tài)稍不規(guī)則；但當(dāng)用PTX(5 mg·L-1)預(yù)處理時(shí)心肌細(xì)胞變大；當(dāng)用NOR-BNI (1 μmol·L-1)預(yù)處理時(shí),U50488H(1 μmol·L-1)、U0126(1 μmol·L-1)、Ro-31-8220(50 nmol·L-1)使心肌細(xì)胞變小現(xiàn)象基本消失(Fig 4)。

Fig 4 Effects of different agents on cell morphology of cultured cardiacmyocytes induced by ET-1(n=24)

3 討論

多種心血管疾病都可造成心肌的代償性肥大,早期的心肌肥大是有利的，是一種適應(yīng)疾病的病理表現(xiàn)。但這種肥大如果未被合理干預(yù),持續(xù)進(jìn)行下去則會(huì)最終發(fā)展為不可逆轉(zhuǎn)的心力衰竭、心律失常甚至猝死等一系列心臟的嚴(yán)重不良結(jié)局。多種原因均可以造成心肌肥大,但具體分子機(jī)制尚不清楚,多篇文獻(xiàn)證明,各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路通過(guò)胞內(nèi)Ca2+耦聯(lián)產(chǎn)生作用。在心肌細(xì)胞受到機(jī)械牽拉或心臟負(fù)荷被動(dòng)增加時(shí)會(huì)代償?shù)膶?dǎo)致心肌肥大,此時(shí)心肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+濃度是增加的；各種體液因子包括AngⅡ、苯腎上腺素、內(nèi)皮素1等所致的心肌細(xì)胞的肥大反應(yīng)過(guò)程內(nèi),心肌細(xì)胞內(nèi)的Ca2+均是增加的[11]。內(nèi)皮素是一種活性多肽,總共含有21個(gè)氨基酸,是經(jīng)過(guò)血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞等合成分泌的,有3個(gè)異構(gòu)體：ET-1、ET-2和ET-3,目前研究較多的是ET-1,主要由ET-A和ET-B兩個(gè)受體亞型調(diào)節(jié)。這兩種受體均屬于G蛋白偶聯(lián)家族中的一員,ET-1與心肌細(xì)胞膜上的ET-A特異性受體結(jié)合后通過(guò)與G蛋白耦聯(lián),激活I(lǐng)P3/Ca2+信號(hào)傳遞即PLC-PIP2-IP3-Ca2+途徑,接著激活PKC,使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高并激活細(xì)胞內(nèi)的早反應(yīng)原癌基因如c-fos、c-myc、c-jun、Egr-1、Ras-等核內(nèi)信使或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,進(jìn)而調(diào)控次級(jí)反應(yīng)基因,以促成心肌蛋白質(zhì)合成,細(xì)胞體積增加最終引起心肌肥厚[12-14]。OR是7次跨膜G蛋白偶聯(lián)受體,有證據(jù)顯示κ-OR抑制心肌肥大的作用有細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路的參與。那么,κ-OR激活抑制ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大時(shí)也有可能與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示,ET-1可以增大心肌細(xì)胞的體積,增多心肌細(xì)胞內(nèi)的ANP-mRNA,增多心肌細(xì)胞內(nèi)的ERK1/2表達(dá),增大心肌細(xì)胞的形態(tài),表明造模成功。U50488H應(yīng)用時(shí)心肌細(xì)胞肥大受到抑制,且細(xì)胞內(nèi)的ERK1/2表達(dá)明顯減少,這表明U50488H對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的抑制作用可能與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路參與有關(guān)。后續(xù)試驗(yàn)表明,當(dāng)細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路的抑制劑U0126同時(shí)應(yīng)用時(shí),U50488H抑制ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的作用減弱,提示U50488H對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的抑制作用可能確實(shí)有細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路的參與。但是,當(dāng)κ-OR阻滯劑NOR-BNI參與時(shí),U0126對(duì)心肌細(xì)胞的抑制作用并未完全消失,表明U0126對(duì)U50488H的抑制作用未被完全阻斷,該抑制作用可能還有其他通路參與,細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路并不是唯一途徑,當(dāng)然這有待更進(jìn)一步的研究。研究發(fā)現(xiàn)[15-16]阿片肽通過(guò)激動(dòng)κ-OR從而抑制心肌肥大,心肌κ-OR興奮可以激活PTX-敏感性G蛋白-DAG-IP3途徑,而由DAG激活的PKC通過(guò)磷酸化激活下游蛋白激酶級(jí)聯(lián)而調(diào)節(jié)基因表達(dá)。PKC活化可引起MAPK,并進(jìn)一步激活ERK通路中多種下游蛋白激酶的活化,從而調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)。而本研究中，PKC抑制劑Ro-31-8220對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大有抑制作用,且抑制程度與U50488H相似,但當(dāng)預(yù)先應(yīng)用PTX處理時(shí),U50488H對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的抑制作用則幾乎完全消失,由此可見(jiàn)，阿片肽可能正是通過(guò)PTX-敏感性G蛋白抑制胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路的上游元件PKC的激活進(jìn)而抑制心肌細(xì)胞肥大。

總之,本研究表明κ-OR的激動(dòng)劑U50488H對(duì)ET-1誘導(dǎo)的心肌肥大的抑制作用可能是通過(guò)PKC激活胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路實(shí)現(xiàn)的。這為阿片肽對(duì)心肌肥厚的抑制作用指明了一個(gè)新的研究方向,也為心肌肥厚的臨床實(shí)踐找到了一個(gè)新的作用靶點(diǎn)。但是胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶通路究竟如何抑制心肌肥厚的機(jī)制尚不明確。與其他通路是否有交互作用亦不明了，均有待更深入的研究以證實(shí)。