HELLS在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況及其與臨床病理的相關(guān)性研究

食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率及死亡率在全球仍居前5位

，但該病早期多無(wú)典型臨床表現(xiàn)，約50%患者就診時(shí)已為晚期，導(dǎo)致目前ESCC預(yù)后差。因此，探索其發(fā)生發(fā)展機(jī)制以期早診早治具有重要臨床意義。

淋巴特異性解旋酶(helicase lymphoid-specific，HELLS)是一種ATP依賴的染色質(zhì)重塑因子，屬于SNF2家族

，主要參與細(xì)胞增殖過(guò)程中DNA甲基化調(diào)控，也有研究

發(fā)現(xiàn)，HELLS參與細(xì)胞糖代謝。HELLS在腫瘤中相關(guān)研究表明，其在胰腺癌、結(jié)腸癌、腎癌等多種腫瘤中發(fā)揮促癌作用

，但確切的促癌機(jī)制目前尚不明確。此外，HELLS高表達(dá)與腫瘤預(yù)后不良

及化療耐藥性相關(guān)

。但其在ESCC中尚無(wú)相關(guān)研究數(shù)據(jù)。

《詩(shī)志》大多數(shù)地方屬于純粹文學(xué)批評(píng)，喜好以后世的詩(shī)歌與《詩(shī)》相比較，相對(duì)其他文學(xué)性解經(jīng)書籍更為鮮明成熟。如牛氏評(píng)點(diǎn)《詩(shī)經(jīng)·漢廣》說(shuō)“漢廣不可泳，江永不可方，言游女有二漢之隔，婷婷獨(dú)立，可望而不可即也。正與‘盈盈一水間，脈脈不得語(yǔ)’相似”[19]。評(píng)點(diǎn)《詩(shī)經(jīng)·柏舟》說(shuō)：“憂極不能自遣，算到奮飛一著，真煩騷無(wú)聊之至?！笧殡p黃鵠，奮翅起高飛’，古之憂患人于此躊躇多少。”[19]用后世詩(shī)句與《詩(shī)》對(duì)照闡發(fā)，注重的是《詩(shī)》作為文學(xué)的神理氣味，讀者自行比較不同詩(shī)句，則詩(shī)歌的妙味不言而自然領(lǐng)悟。這明顯不同于漢人注解《詩(shī)經(jīng)》的方式，以考據(jù)訓(xùn)詁追求字詞確義。

本研究通過(guò)在ESCC組織芯片中采用免疫組化檢測(cè)ESCC及癌旁組織中HELLS表達(dá)情況，初步明確其與ESCC臨床病理特點(diǎn)的相關(guān)性。

功夫不負(fù)有心人。慢慢地，我在太平路小學(xué)變得小有名氣了。領(lǐng)導(dǎo)感覺(jué)這個(gè)年輕人有天賦、有激情，于是開(kāi)始讓我嘗試在學(xué)校做教學(xué)研究課。有一次，五一小學(xué)的王副校長(zhǎng)到太平路小學(xué)聽(tīng)課，正好聽(tīng)了我的一節(jié)《葡萄溝》，聽(tīng)后王校長(zhǎng)對(duì)我大加贊賞。這似乎是我和“五一”人的第一次接觸。

1 資料與方法

(1)微波抗原修復(fù)，常規(guī)脫蠟水化；(2)3% H

O

封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，隨后再用山羊血清封閉；(3)孵育HELLS一抗；(4)加入通用型二抗；(5)DAB 顯色；(6)蘇木精復(fù)染，脫水透明，中性樹(shù)膠封片；(7)顯微鏡下觀察。

龍斌的目光離開(kāi)了電腦屏幕凝視著竹韻清秀的臉龐，伸手為她理了一下掉在額頭手頭發(fā)，然后緊緊地握住她柔軟的小手久久不肯松開(kāi)。

400倍光鏡隨機(jī)選5個(gè)高倍鏡實(shí)驗(yàn)，每視野數(shù)100個(gè)細(xì)胞，HELLS陽(yáng)性結(jié)果：胞核出現(xiàn)棕黃色染色為陽(yáng)性，陽(yáng)性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的百分比>10%。

進(jìn)入虛擬漫游培訓(xùn)場(chǎng)景后，可以通過(guò)手柄搖桿控制場(chǎng)景中的漫游動(dòng)作。將場(chǎng)景中的主攝像機(jī)Main Camera替換為MojingMain預(yù)設(shè)攝像頭，添加腳本組件MojingWalk掛在MojingMain上，實(shí)例代碼如下：

選取47例ESCC組織，其中23例有配對(duì)癌旁組織，所有ESCC組織和癌旁組織均來(lái)源于組織芯片(上海芯超生物科技有限公司，貨號(hào)HEso-Squ127Lym-01)。腫瘤分期根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟食管鱗癌臨床病理分期標(biāo)準(zhǔn)(第7版)

確定。

小鼠HELLS單克隆抗體(貨號(hào)：sc-46665)購(gòu)自美國(guó) Santa Cruz公司。通用型試劑盒(小鼠/兔聚合物法檢測(cè)系統(tǒng))(編號(hào)：PV-6000)購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

免疫組化結(jié)果顯示，HELLS在ESCC及癌旁組織中均有表達(dá)，陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，表現(xiàn)為黃褐色染色(見(jiàn)圖1)。在47例癌組織中28例(59.57%)呈陽(yáng)性表達(dá)，23例癌旁組織中2例(8.70%)呈陽(yáng)性表達(dá)，與癌旁組織相比，HELLS在癌組織中的表達(dá)率明顯升高(

<0.001)(見(jiàn)表1)。

2 結(jié)果

本研究進(jìn)一步分析了HELLS表達(dá)與ESCC患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HELLS高表達(dá)與ESCC患者腫瘤大小(

=0.04)有相關(guān)性，而與性別、年齡、腫瘤分級(jí)及N分期無(wú)相關(guān)性(

>0.05)(見(jiàn)表2)。

3 討論

HELLS在維持基因甲基化及染色質(zhì)重塑過(guò)程中發(fā)揮重要作用

，在腫瘤領(lǐng)域的研究越來(lái)越廣泛。目前研究表明，在肝癌、胰腺癌、胃癌及腎透明細(xì)胞癌等多種腫瘤中呈高表達(dá)，且其高表達(dá)與腫瘤進(jìn)展及生存期縮短相關(guān)

。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，HELLS在ESCC組織中呈高表達(dá)。進(jìn)一步分析其表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系表明，HELLS表達(dá)與腫瘤大小相關(guān)。此外由于本研究所用芯片組織T分期數(shù)據(jù)缺失，且均未發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此，需要通過(guò)擴(kuò)大樣本量及樣本種類進(jìn)一步驗(yàn)證HELLS與臨床參數(shù)的關(guān)系。

關(guān)于HELLS作用機(jī)制目前尚未明確，目前研究結(jié)果提示其可能通過(guò)3種途徑發(fā)揮作用。首先，HELLS可通過(guò)改變組蛋白與DNA間的相互作用，改變核小體位置以暴露DNA

，使得轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子與裸露的DNA結(jié)合進(jìn)而調(diào)控下游基因的表達(dá)發(fā)揮作用。在肝癌細(xì)胞中，HELLS通過(guò)增加轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)核小體占位阻止無(wú)核小體區(qū)域形成，進(jìn)而抑制抑癌基因E-cadherin、FBP1、IGFBP3、XAF1及CREB3L3的表達(dá)發(fā)揮作用

。其次，HELLS可與特定的轉(zhuǎn)錄因子相互作用調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄。在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究中發(fā)現(xiàn)，HELLS是RB/E2F通路中關(guān)鍵的下游蛋白，可能作為E2F3的轉(zhuǎn)錄共激活因子調(diào)控下游細(xì)胞周期蛋白的表達(dá)，影響細(xì)胞增殖

，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的研究也表明，HELLS通過(guò)與轉(zhuǎn)錄因子E2F3及MYC相互作用影響細(xì)胞周期發(fā)揮促癌作用

。在肝癌中HELLS可激活著絲粒蛋白F(centromere protein F, CENPF)的轉(zhuǎn)錄而影響細(xì)胞周期發(fā)揮促癌作用

。最后，HELLS參與調(diào)控細(xì)胞代謝。研究表明，HELLS參與胃癌細(xì)胞有氧糖酵解

，在肺癌中通過(guò)抑制鐵死亡發(fā)揮促癌作用

。關(guān)于HELLS在食管癌中的作用機(jī)制目前尚無(wú)相關(guān)研究。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)HELLS在ESCC中呈高表達(dá)，其高表達(dá)與患者預(yù)后不良相關(guān)。本研究結(jié)果表明，HELLS表達(dá)水平與腫瘤大小相關(guān)，但與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等病理特征的相關(guān)性需進(jìn)一步開(kāi)展大樣本量的臨床研究。此外，目前研究結(jié)果均提示HELLS在腫瘤靶向治療中有很大機(jī)制，因此，還需進(jìn)行HELLS在ESCC中的機(jī)制研究，為后續(xù)實(shí)現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化提供研究基礎(chǔ)。

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